肖 灣，黃亞運(yùn)，郝曉紅，史福霞

（上海市質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)技術(shù)研究院，上海 201114）

人體皮膚接觸六價(jià)鉻可能導(dǎo)致過敏；眼部接觸六價(jià)鉻可能會(huì)出現(xiàn)視網(wǎng)膜出血、視神經(jīng)萎縮等現(xiàn)象；吸入和食入六價(jià)鉻會(huì)引發(fā)胃、肝、腎功能損壞，嚴(yán)重時(shí)可致癌或引起遺傳方面的基因缺陷［1］。2015年5月，歐盟reach法規(guī)將皮革中六價(jià)鉻限值從原來的 1000mg／kg變?yōu)?3mg／kg［2］，很多出口歐盟的皮革廠家就因此而被退貨。因此，有必要研究開發(fā)快速、準(zhǔn)確、簡便的皮革六價(jià)鉻檢測方法。

目前，常用的六價(jià)鉻檢測方法有分光光度法和高效液相色譜衍生法，分光光度法易受樣品萃取液中雜質(zhì)的影響，導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確，而高效液相色譜衍生法則需要將萃取液進(jìn)行衍生后進(jìn)行測定。本文建立了一種高效液相色譜法直接測定皮革中的水溶性六價(jià)鉻，能夠?qū)⒎治瞿繕?biāo)物與雜質(zhì)分離，實(shí)驗(yàn)過程中不使用衍生試劑，可減少試驗(yàn)步驟，降低實(shí)驗(yàn)室成本，同時(shí)能夠提高方法的準(zhǔn)確度。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

1）儀器。高效液相色譜儀（1260，DAD檢測器，安捷倫科技有限公司），電子天平（精確至0.1mg，BSA2242S-CW，德國Sartorius公司），水浴恒溫振蕩器（SHA-B，常州諾基儀器有限公司）。

2）試劑。硝酸，氨水，磷酸，磷酸氫二鉀（分析純，國藥集團(tuán)）；六價(jià)鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液（100mg／L，上海市計(jì)量院）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品的前處理

提取方法參照 GB／T 22807-2008，將100mL磷酸鹽緩沖液加入250mL錐型瓶中，導(dǎo)入氮?dú)?min（流量50mL／min）。加入2g（精確至0.01g）皮革試樣，置于振蕩器萃取3h后測定濾液的pH值，應(yīng)在7.5到8.0之間。取部分萃取液經(jīng)0.22μm水相針式濾器過濾后進(jìn)行測定。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

分別移取適量的六價(jià)鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液配制質(zhì)量濃度為0.05、0.1、0.2、0.5、1.0mg／L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，將色譜峰面積對(duì)六價(jià)鉻濃度做圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.3 液相色譜條件

色譜柱（PRP-X100離子交換柱，250 mm×4.1mm×10μm），檢測波長：370nm，流速：1mL／min，柱溫：30℃，進(jìn)樣量 100μL，運(yùn)行時(shí)間：10min，流動(dòng)相：濃度為0.08 mol／L NH4NO3（吸取5.25mL濃硝酸于1L的容量瓶中，加入超純水，并用氨水調(diào)節(jié)pH值至8.0）。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的選擇

在堿性條件下，六價(jià)鉻在紫外區(qū)有一較強(qiáng)的吸收峰［3］。因此，采用DAD檢測器在200～600nm范圍內(nèi)掃描六價(jià)格標(biāo)液色譜峰，得到的紫外可見光譜如圖1所示。六價(jià)鉻標(biāo)樣在370nm處有較強(qiáng)的吸收峰，因此選擇370 nm為高效液相色譜法的檢測波長。

圖1 六價(jià)鉻標(biāo)液光譜圖

2.2 分離色譜圖

以1.2.3節(jié)確定的色譜參數(shù)條件進(jìn)行測定，六價(jià)鉻標(biāo)液在色譜圖中保留時(shí)間 tR＝5.80 min處出峰，分離色譜圖見圖2。由圖2可知，該峰對(duì)稱性好，經(jīng)光譜圖純度分析，該峰純度較高。因此，可以通過色譜峰的保留時(shí)間和光譜圖進(jìn)行六價(jià)鉻定性，通過色譜峰的面積進(jìn)行六價(jià)鉻定量。

圖2 六價(jià)鉻標(biāo)液色譜圖

2.3 方法的線性和檢出限

方法的線性和檢出限見表1。

表1 線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限

以目標(biāo)化合物峰面積與六價(jià)鉻標(biāo)液的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到六價(jià)鉻標(biāo)液的工作曲線。取最低濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液對(duì)空白樣品進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)，10次平行測定，以10倍標(biāo)準(zhǔn)偏差為檢出限，結(jié)果如表1所示。該方法線性良好，檢出限低于GB／T 22807-2008中規(guī)定的 3mg／kg。

2.4 方法回收率和精密度

準(zhǔn)確稱取2.0 g皮革陰性樣品于錐形瓶中，在高、中、低3個(gè)濃度水平進(jìn)行加標(biāo)回收率試驗(yàn)，平行測定7次，結(jié)果取平均值，如表2所示。回收率范圍為80%～100%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為1%～2%，可見本方法具有良好的精密度和準(zhǔn)確度，滿足分析測試需求。

表2 精密度與回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5 不同方法的比較

取陽性皮革樣品，分別用建立的方法與GB／T 22807-2008進(jìn)行7次測定，試驗(yàn)樣品測試結(jié)果與精密度見表3。由表可知，兩種檢測方法的測定結(jié)果相差不大，精密度均較好。其中，本文建立的方法的測試結(jié)果稍小于GB／T 22807-2008測試結(jié)果，可能是因?yàn)殡x子色譜柱測定能夠?qū)⒎治瞿繕?biāo)物與雜質(zhì)分離，減少了試驗(yàn)誤差。

表3 不同方法測試結(jié)果與精密度比較

3 結(jié)論

建立了一種高效液相色譜法直接測定皮革中的水溶性六價(jià)鉻的檢測方法，與其他方法相比，該方法不僅檢測限較低，回收率較高，精密度較好，試驗(yàn)步驟較少，檢測時(shí)間較短，并且能夠很好的將分析目標(biāo)物與雜質(zhì)分離，提高試驗(yàn)的準(zhǔn)確度。