牟玉梅 李菲 范高領(lǐng) 邢丹 蓬桂華

摘? ? 要：以拮抗青枯病菌的辣椒種子內(nèi)生細(xì)菌為對象，研究并了解其促生功能多樣性、促生效應(yīng)等，為辣椒種子內(nèi)生細(xì)菌的開發(fā)利用提供理論支撐。測定了6株內(nèi)生細(xì)菌的多樣化生物學(xué)功能，進(jìn)行種子催芽和盆栽促生試驗(yàn)。結(jié)果表明，產(chǎn)IAA、溶磷、固氮、產(chǎn)嗜鐵素是供試菌株中普遍具備的功能，6株內(nèi)生細(xì)菌中有5株具有3種及3種以上的促生功能。所有內(nèi)生細(xì)菌菌懸液均能顯著地促進(jìn)辣椒種子萌發(fā)和植株生長，增強(qiáng)種子活力，提高壯苗指數(shù)，具有較好的促生效果。辣椒種子內(nèi)生菌菌株對辣椒具有較好的防病促生效果，具有開發(fā)微生物農(nóng)藥和菌肥的巨大潛力。

關(guān)鍵詞：辣椒種子;內(nèi)生細(xì)菌;拮抗作用;功能多樣性

中圖分類號：S633.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1673-2871（2020）07-056-05

Abstract：This experiment is to study and understand the function diversity and effect of cayenne pepper seed endophytic bacteria， which antagonizes cayenne pepper seed， and providing theoretical support for the development and utilization of endophytic bacteria in pepper seeds. The biological functions of 6 endogenous bacteria were determined by seed germination and plant growth in pot. IAA production， phosphorus dissolution， nitrogen fixation， and ferrophilic production are a common function of the tested strains. Five of the six endogenous bacteria have three or more probiotic functions. All endogenous bacterial suspensions can significantly promote the seed germination and growth of pepper， enhance the seed vitality， and improve the seedling index， which has a good effect of promoting growth. Endophytic bacterial strains of pepper seeds have good disease control and growth promotion effects on pepper， and have great potential to be developed as microbial pesticides and bacterial fertilizer.

Key words： Pepper seeds; Endophytic bacteria; Antagonistic effect; Functional diversity

內(nèi)生菌是一類生活在植物體內(nèi)且對植物無明顯不利影響的微生物的總稱[1]。植物內(nèi)生菌的生物多樣性十分豐富，其在自然選擇條件下會產(chǎn)生與宿主植株相同或相似的生理生化活性物質(zhì)[2]，通過合成植物激素、產(chǎn)生鐵載體、生物固氮等多種方式促進(jìn)宿主種子萌發(fā)和植物生長，協(xié)助宿主植物抵御病原菌及不良的生長環(huán)境[3-4]。已有研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)生菌除具有生防功能多樣性外，還兼有一定的促生效果。程亮[5]從矮火絨草植株根、莖、葉和種子部位分離獲得52株內(nèi)生細(xì)菌，發(fā)現(xiàn)其中11株有拮抗病原真菌能力、9株有產(chǎn)IAA能力、7株有溶磷活性、7株有固氮活性、20株有除草活性、13株有耐低溫能力和8株有促生作用。 蔡長平等[6]從連作重茬地辣椒健康植株根系中分離出內(nèi)生拮抗細(xì)菌PEB-99，發(fā)現(xiàn)該內(nèi)生細(xì)菌除抑菌活性較強(qiáng)之外，還能產(chǎn)生鐵載體、吲哚-3-乙酸（IAA），具有較強(qiáng)的溶解有機(jī)磷的能力。 焦蓉等[7]從煙草種子中分離篩選出4株對煙草疫霉具有較強(qiáng)抑制作用的拮抗菌株，其對煙草病害有良好的防治效果，還能促進(jìn)煙草種子萌發(fā)、顯著提升各項(xiàng)生理指標(biāo)，促進(jìn)煙草幼苗的生長。張波等[8]發(fā)現(xiàn)，將從茅蒼術(shù)分離的4種內(nèi)生真菌對茅蒼術(shù)種子進(jìn)行浸種處理后，種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢都高于對照。金夢軍等[9]發(fā)現(xiàn)，從青藏苔草中分離的內(nèi)生菌株1Y4對黃瓜和辣椒的株高、莖粗、鮮質(zhì)量和干質(zhì)量具有明顯促進(jìn)作用。但目前針對辣椒種子內(nèi)生菌促生功能的報道尚不多見。因此，筆者以貴州省辣椒研究所辣椒栽培技術(shù)研究課題組從辣椒種子中分離的6株對辣椒青枯病菌具有較強(qiáng)抑制作用的內(nèi)生細(xì)菌為材料，開展促生功能多樣性、促生效應(yīng)等方面研究，探究辣椒種子內(nèi)生細(xì)菌的促生特性和功能，為辣椒種子內(nèi)生菌株的開發(fā)及利用奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試內(nèi)生菌株 2017年3月，以從抗辣椒青枯病的辣椒種子（編號7號和8號）中篩選出的6株拮抗辣椒青枯病菌的內(nèi)生細(xì)菌（gz1、gz6、gz7、gz11、gz13、gz14）為供試菌株，在貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院辣椒研究所貴陽試驗(yàn)基地及實(shí)驗(yàn)室開展內(nèi)生細(xì)菌促生功能研究。

1.1.2 培養(yǎng)基 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、NBRIP無機(jī)磷培養(yǎng)基、NFb無氮培養(yǎng)基、CAS培養(yǎng)基、蛋白酶檢測培養(yǎng)基、DF固體培養(yǎng)基、纖維素酶檢測培養(yǎng)基。

1.2 方法

1.2.1 內(nèi)生細(xì)菌功能多樣性分析 產(chǎn)IAA的檢測：采用Salkowskis試劑微孔板比色法測定IAA[10]。在波長530 nm用酶標(biāo)儀測定吸光值，以濃度0、20、40、60、80 mg·L-1的分析純IAA標(biāo)準(zhǔn)液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。未接種的培養(yǎng)基作為空白對照。

溶磷能力的檢測：定性測定：挑取待測菌株的單菌落點(diǎn)接于NBRIP平板上[11]，點(diǎn)接無菌水為陰性對照，置于30 ℃培養(yǎng)10 d，觀察有無解磷圈及解磷圈的大小。以解磷圈與菌落比值大小確定其對無機(jī)磷的解磷作用，比值大，解磷能力強(qiáng)，比值小，解磷能力弱，比值為1時表示菌株無解磷能力。定量測定：將定性篩選出的具有溶磷性的菌株接種于營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基中，以等量無接菌液體培養(yǎng)基作為對照，設(shè)置3個重復(fù)，用鉬銻抗比色方法進(jìn)行磷含量比色測定[10，12]，讀取700 nm波長下吸光值，根據(jù)繪制的磷標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到培養(yǎng)液中的有效磷數(shù)值。

潛在固氮能力和產(chǎn)酸能力的檢測：將待測菌株穿刺接種于含有0.5%庶糖的NFb無氮培養(yǎng)基，30 ℃培養(yǎng)7 d，觀察其生長情況，在培養(yǎng)基液面或液面以下出現(xiàn)菌膜，為陽性，未觀察到菌膜的為陰性，未接種的培養(yǎng)基作為空白對照，轉(zhuǎn)接3次。含有溴麝香草酷藍(lán)的NFb無氮培養(yǎng)基由綠色變?yōu)辄S色，說明培養(yǎng)基pH值降至6.0以下，細(xì)菌生長過程中產(chǎn)酸[10]。

產(chǎn)生嗜鐵素能力的檢測：挑取待測菌株的單菌落點(diǎn)接于CAS培養(yǎng)基平板上[13]，置于30 ℃培養(yǎng)7 d，菌落周圍出現(xiàn)黃色暈圈為陽性，無黃色暈則為陰性。測量黃色暈圈的直徑，每株細(xì)菌重復(fù)檢測3次。

胞外分泌蛋白酶能力的檢測：在蛋白酶檢測培養(yǎng)基平板中央放置直徑5 mm的滅菌濾紙片，每張濾紙片上滴入內(nèi)生細(xì)菌菌液5 μL，每處理3次重復(fù)，28 ℃恒溫培養(yǎng)2 d后觀察，觀察有無透明圈產(chǎn)生，有透明圈產(chǎn)生則表明該菌可分泌蛋白酶。測量透明圈的直徑，每株細(xì)菌重復(fù)檢測3次[14]。

產(chǎn)ACC脫氨酶能力的檢測：定性測定：菌株接種于含3 mmol·L-1 ACC的DF固體培養(yǎng)基，選取傳代3次后能夠在唯一氮源ACC培養(yǎng)基上生長的菌株為產(chǎn)ACC脫氨酶陽性菌株。

定量測定：將菌株接種至營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，采用Bradford 比色法測得酶蛋白的含量[15]。比活力（U·mg-1）為酶活力除以酶蛋白濃度。各菌株酶活性測定均扣除對照樣品中自發(fā)產(chǎn)物后計(jì)算，3次重復(fù)。

產(chǎn)纖維素酶能力的檢測：28 ℃恒溫培養(yǎng)3～4 d后，用0.9% NaCl溶液浸泡纖維素酶檢測培養(yǎng)基平板，每2 h除去NaCl溶液1次，沖洗并倒入新的NaCl溶液，6 h后觀察菌落周圍是否有黃色暈圈，有則表示可產(chǎn)生纖維素酶[16]。

1.2.2 不同菌株浸種對辣椒種子萌芽的影響 將含水量10 %以下的辣椒種子表面消毒，放在70 ℃的恒溫箱內(nèi)干熱處理72 h，冷卻至室溫，將其放入濃度為109 CFU·mL-1內(nèi)生細(xì)菌菌懸液中浸泡4 h，無菌水沖洗3次后，用培養(yǎng)皿紙床法恒溫保濕催芽，每培養(yǎng)皿放置100粒種子，檢測出芽率。同時，以LB培養(yǎng)液替代菌懸液浸種作為對照。

從種子出芽開始，每天觀察記錄發(fā)芽情況，發(fā)芽觀察期為19 d，以胚根長超過種子長度的1/2作為發(fā)芽標(biāo)準(zhǔn)。7 d統(tǒng)計(jì)發(fā)芽勢，14 d統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率，以19 d內(nèi)的發(fā)芽數(shù)計(jì)算發(fā)芽指數(shù)。發(fā)芽勢/% =供試種子7 d內(nèi)的發(fā)芽數(shù)/供試種子總數(shù)×100，發(fā)芽率/% =供試種子總發(fā)芽數(shù)（第14天） /供試種子總數(shù)×100，發(fā)芽指數(shù)= Σ（日發(fā)芽數(shù)/發(fā)芽天數(shù)）。

以發(fā)芽勢、發(fā)芽率和發(fā)芽指數(shù)指標(biāo)，計(jì)算綜合隸屬函數(shù)值。根據(jù)隸屬函數(shù)值，分析不同內(nèi)生細(xì)菌催芽能力的差異。隸屬函數(shù)值Xij用模糊數(shù)學(xué)隸屬函數(shù)值方法計(jì)算。R（Xij） =（Xij-Xjmin） /（Xjmax-Xjmin）。式中：R（Xij）表示i種類菌株j指標(biāo)的隸屬值，Xij表示i種類菌株j指標(biāo)的測定值，Xjmax、Xjmin分別表示所有參試菌株某指標(biāo)的最大值和最小值。累加各指標(biāo)隸屬函數(shù)值并求平均值。

1.2.3 不同菌株浸種對辣椒幼苗促生作用測定 消毒、浸種同催芽試驗(yàn)，以LB培養(yǎng)液替代菌懸液浸種作為對照，辣椒播種后50 d，統(tǒng)計(jì)各處理成苗率，隨機(jī)選擇各處理適齡幼苗10株，自來水沖洗干凈，用蒸餾水沖洗一遍，測量株高、莖粗、葉長、葉寬，然后105 ℃殺青，80 ℃烘干至恒重，測定根干質(zhì)量、地上部干質(zhì)量、全株干質(zhì)量、葉綠素含量，計(jì)算壯苗指數(shù)。

成苗率/%=成活的辣椒苗/播種種子數(shù)×100;壯苗指數(shù)=（莖粗/株高+根干質(zhì)量/地上部干質(zhì)量）×全株干質(zhì)量[17] 。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2007進(jìn)行錄入、制作圖表和計(jì)算，采用DPS 7.05進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 內(nèi)生細(xì)菌功能多樣性分析

2.1.1 產(chǎn)IAA的能力 從表1可知，6株種子內(nèi)生細(xì)菌中有4株可以分泌IAA。各內(nèi)生細(xì)菌分泌生長素產(chǎn)量介于18.92～67.29 mg·L-1之間，其中菌株gz1分泌生長素能力最強(qiáng)，為67.29 mg·L-1，顯著高于其他3個菌株。

2.1.2 溶磷能力的檢測 6株內(nèi)生細(xì)菌中有4株內(nèi)生細(xì)菌表現(xiàn)出不同的溶磷能力（表2）。各菌株D/d值在3.26～6.17之間，菌株gz7 D/d值最大，最小的菌株是gz13。

將具有溶磷圈的4株內(nèi)生細(xì)菌利用鉬銻抗比色法定量測定溶解培養(yǎng)基中磷酸鈣的能力，其范圍在150.34～397.73 mg·L-1之間，菌株gz14溶磷量最大，但D/d值不是最大，菌株gz11溶磷量最小，但其D/d值也不是最小的?？梢钥闯鼋饬兹ψ钚〉模谝后w培養(yǎng)基內(nèi)溶磷活性不一定最弱;解磷圈最大的，在液體培養(yǎng)基內(nèi)溶磷活性不一定最強(qiáng)。表明解磷圈直徑大小與菌株液體解磷能力沒有必然相關(guān)性。

2.1.3 潛在固氮能力和產(chǎn)酸能力 在NFb無氮培養(yǎng)基中的生長情況顯示，有5株內(nèi)生細(xì)菌（gz1、gz6、gz7、gz11、gz13）可以生長，在培養(yǎng)基液面或液面以下出現(xiàn)菌膜，表明這5株內(nèi)生細(xì)菌均具有固氮能力，僅菌株gz14無固氮能力。NFb無氮培養(yǎng)基中所有菌株均未使培養(yǎng)基顏色變黃，說明均不能產(chǎn)酸。

2.1.4 產(chǎn)嗜鐵素能力 6株菌株中有5株細(xì)菌在CAS平板上能夠分泌嗜鐵素，螯合三價鐵離子，產(chǎn)生黃色暈圈（表3）。暈圈直徑范圍在10.56～24.49 mm之間，暈圈D/d值范圍在1.58～1.93之間;菌株gz14產(chǎn)嗜鐵素能力最強(qiáng)。

2.1.5 分泌蛋白酶能力 6株內(nèi)生細(xì)菌中有4株（gz7、gz11、gz13、gz14）能分泌蛋白酶將奶粉蛋白質(zhì)降解成小分子可溶性物質(zhì)（表4）。6株分泌蛋白酶菌株透明圈直徑范圍在36.86～49.08 mm之間，D/d值范圍在1.68～2.41之間，其中菌株gz11分泌蛋白酶能力最強(qiáng)。

2.1.6 產(chǎn)ACC脫氨酶能力 將分離的6株辣椒種子內(nèi)生細(xì)菌接種于以ACC為唯一氮源的DF固體培養(yǎng)基上，多次傳代后有3株菌株（gz7、gz11、gz14）能夠正常生長（表5），表明其具有ACC脫氨酶活性，其中g(shù)z7的酶比活力最高，為53.89 nmol·mg-1·h-1，顯著高于其他2個菌株。

2.1.7 產(chǎn)纖維素酶能力的檢測 6株菌株菌落周圍均未產(chǎn)生黃色暈圈，說明菌株均不能產(chǎn)生纖維素酶。

2.1.8 種子內(nèi)生細(xì)菌促生功能多樣性分布 從辣椒種子內(nèi)生細(xì)菌促生功能多樣性分布可以看出（表6），產(chǎn)IAA、溶解磷酸鈣、固氮能力、產(chǎn)嗜鐵素、分泌蛋白酶是供試菌株中普遍具備的功能，6株內(nèi)生細(xì)菌中有5株具有3種及以上的促生功能，表明辣椒種子內(nèi)生細(xì)菌促生功能豐富多樣，具有促進(jìn)植物萌發(fā)或生長的能力。

2.2 辣椒內(nèi)生細(xì)菌促生效應(yīng)

2.2.1 不同菌株浸種對辣椒種子萌芽的影響 不同類型內(nèi)生菌株促進(jìn)辣椒種子萌芽的作用效果存在差異（表7）。由表7可知，不同內(nèi)生細(xì)菌浸種處理后辣椒種子的發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)差異較為明顯，發(fā)芽率差異不明顯。發(fā)芽勢方面，6株菌株的發(fā)芽勢變化幅度為18.00～62.00%，有5株內(nèi)生細(xì)菌浸種處理后種子的發(fā)芽勢明顯強(qiáng)于對照，菌株gz1浸種處理辣椒種子后的發(fā)芽勢明顯高于其他菌株。發(fā)芽率方面，所有內(nèi)生細(xì)菌浸種處理后種子的發(fā)芽率均高于對照，有4株菌株浸種處理后的發(fā)芽率大于80%，其中g(shù)z1、gz11菌株浸種處理辣椒種子的發(fā)芽率最高。發(fā)芽指數(shù)方面，所有內(nèi)生細(xì)菌浸種處理后種子的發(fā)芽指數(shù)均高于對照，其中菌株gz1浸種處理辣椒種子的發(fā)芽指數(shù)明顯高于其他菌株。

由表7可知，平均隸屬函數(shù)值由大到小分別是：gz1、gz11、gz6、gz7、gz13、gz14、CK，表明所有內(nèi)生細(xì)菌對種子的催芽能力均高于對照，其中g(shù)z1菌株催芽能力最強(qiáng)。

2.2.2 不同菌株浸種對辣椒幼苗促生作用 用不同內(nèi)生菌株的菌懸液浸種處理后，對辣椒幼苗生長有顯著的影響，大部分菌液浸種后，辣椒植株健壯、葉色深，具有較好的促生效果。由表8可知，與對照相比較，6株內(nèi)生細(xì)菌浸種處理后，5株有效抑制了辣椒植株徒長，3株使辣椒葉寬變寬，3株使辣椒葉長變長，5株使葉綠素含量提高，4株使全株干質(zhì)量增加，4株使壯苗指數(shù)提高。內(nèi)生細(xì)菌菌懸液浸種處理使椒苗在株高、莖粗、葉綠素、全株干質(zhì)量和壯苗指數(shù)等方面出現(xiàn)明顯變化，特別是菌株gz1、gz7、gz11、gz14菌懸液浸種處理后植株葉綠素、全株干質(zhì)量和壯苗指數(shù)顯著優(yōu)于對照，說明辣椒內(nèi)生細(xì)菌具有促進(jìn)辣椒壯苗形成的潛力。

3 討論與結(jié)論

植物內(nèi)生菌通過水平侵染或垂直傳播，定殖于各種植物細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞間，在長期的進(jìn)化過程中與宿主植物形成了一種特殊的生態(tài)關(guān)系，正是這種關(guān)系，內(nèi)生菌種類和數(shù)量在各植物體內(nèi)的分布常與植物的種類、生存環(huán)境、生長階段、營養(yǎng)供給及兩者的基因型密切相關(guān)。種子作為植物物種延續(xù)的重要繁殖器官，也是植物內(nèi)生菌垂直傳播的重要方式，蘊(yùn)含大量的內(nèi)生細(xì)菌。種子內(nèi)生菌與植物經(jīng)過長期、穩(wěn)定的進(jìn)化選擇，相比于從其他植物器官中分離的內(nèi)生菌更易長期定殖生存，也更易演化出與宿主互惠互利的代謝途徑。本試驗(yàn)結(jié)果表明產(chǎn)IAA、溶解磷酸鈣、固氮、產(chǎn)嗜鐵素是大部分菌供試菌株具備的功能，6株內(nèi)生細(xì)菌中有5株具有3種及3種以上的促生功能，與程亮[5]從矮火絨草植株分離獲得內(nèi)生細(xì)菌有拮抗病原真菌能力、產(chǎn)IAA能力、溶磷活性、固氮活性、除草活性、耐低溫能力和有促生作用的研究結(jié)果類似，表明辣椒種子內(nèi)生細(xì)菌經(jīng)過與宿主辣椒植株的長期相互選擇，已形成了相互促進(jìn)和需要的共生關(guān)系，內(nèi)生細(xì)菌能分泌植株生長所需物質(zhì)。將6株內(nèi)生細(xì)菌對辣椒種子進(jìn)行萌芽試驗(yàn)，對種子的催芽能力均高于對照，與張波等[8]將自茅蒼術(shù)分離的4種內(nèi)生真菌對茅蒼術(shù)種子進(jìn)行浸種處理后發(fā)芽率、發(fā)芽勢都高于對照的研究結(jié)果類似，證明植物內(nèi)生菌對種子萌發(fā)具有促進(jìn)作用。將6株內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行育苗試驗(yàn)，均對辣椒幼苗生長有顯著的影響，大部分內(nèi)生細(xì)菌菌液浸種后的辣椒植株健壯、葉色深，均有效促進(jìn)了莖葉、根系的生長及干物質(zhì)積累，與金夢軍等[9]關(guān)于從青藏苔草中分離的內(nèi)生菌株1Y4對黃瓜和辣椒的株高、莖粗、鮮質(zhì)量和干質(zhì)量具有明顯促進(jìn)作用的報道類似，表明辣椒種子內(nèi)生細(xì)菌對辣椒幼苗具有較好的促生效果。

對比內(nèi)生細(xì)菌促生功能與促生效果，發(fā)現(xiàn)gz1、gz7、gz11、gz14處理后植株葉綠素、全株干質(zhì)量和壯苗指數(shù)顯著優(yōu)于對照，可能與內(nèi)生細(xì)菌某項(xiàng)獨(dú)特的促生特性有關(guān)。其中：菌株gz1產(chǎn)IAA能力明顯優(yōu)于其他菌株，能有效促進(jìn)植株生長;gz7溶磷能力和產(chǎn)ACC脫氨酶能力均很強(qiáng)，能促進(jìn)植株對磷元素的吸收及降低植物生長時的乙烯水平;gz11具備產(chǎn)IAA、固氮、溶磷、產(chǎn)嗜鐵素、產(chǎn)蛋白酶、產(chǎn)ACC脫氨酶等多種促生能力，綜合功能較佳;gz14溶磷能力和產(chǎn)嗜鐵素能力均優(yōu)于其他菌株，能促進(jìn)植株對磷元素和鐵元素的吸收。

筆者以從抗青枯病辣椒種子中篩選出的6株拮抗青枯菌內(nèi)生細(xì)菌為研究對象，通過促生功能多樣性、促生效應(yīng)研究，發(fā)現(xiàn)種子內(nèi)生細(xì)菌對辣椒種子萌芽、幼苗生長具有積極促進(jìn)作用，為辣椒種子內(nèi)生細(xì)菌生物菌肥和生物農(nóng)藥的開發(fā)提供了理論基礎(chǔ)。但在本試驗(yàn)中只研究和分析了內(nèi)生細(xì)菌促生功能與促生效果之間可能存在的關(guān)系，對它們之間的作用機(jī)制還未深入研究。同時，為推動內(nèi)生細(xì)菌生防制劑的開發(fā)與推廣，下一步將針對生防菌的防病促生作用機(jī)理、發(fā)酵生產(chǎn)工藝以及大田施用技術(shù)等方面開展深入研究。

參考文獻(xiàn)

[1] 張海利，陳永兵，徐堅(jiān).番茄青枯病生物防治研究進(jìn)展[J].農(nóng)業(yè)科技通訊，2008（8）：98-101.

[2] 張萍，宋希強(qiáng).蘭科植物內(nèi)生細(xì)菌物種多樣性及其促生機(jī)理研究進(jìn)展[J].熱帶亞熱帶植物學(xué)報，2012，20（1）：92-98.

[3] 姚領(lǐng)愛，胡之壁，王莉莉，等.植物內(nèi)生真菌與宿主關(guān)系研究進(jìn)展[J].生態(tài)環(huán)境學(xué)報，2010，19（7）：1750-1754.

[4] 丁銳，李萌凱，任光宇，等.羊耳蒜內(nèi)生真菌的分離鑒定與抑菌活性篩選[J].北方園藝，2017（1）：126-130.

[5] 程亮.青藏高原矮火絨草內(nèi)生細(xì)菌多樣性及生物功能分析[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報，2019，50（10）：2222-2233.

[6] 蔡長平，黃軍，曾艷，等.一株辣椒內(nèi)生拮抗細(xì)菌的篩選及初步鑒定[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018（7）：1-4.

[7] 焦蓉，劉劍金，楊煥文，等.抑制煙草黑脛病菌和促煙草幼苗生長內(nèi)生菌的分離與鑒定[J].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)），2018，33（6）：1037-1045.

[8] 張波，王宏偉，肖逸，等.浸種及接種內(nèi)生真菌對茅蒼術(shù)種子發(fā)芽與幼苗生長的影響[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（9）：227-230.

[9] 金夢軍，李珊珊，田文波，等.高寒草地青藏苔草拮抗內(nèi)生細(xì)菌篩選、鑒定及其促生作用測定[J].植物保護(hù)學(xué)報，2019，46（4）：779-786.

[10] 許明雙.番茄和水稻種子可培養(yǎng)內(nèi)生細(xì)菌的多樣性分析及促生菌功能研究[D].北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)，2014.

[11] NAUTIYAL S C.An efficient microbiological growth medium for screening phosphate solubilizing microorganisms[J].FEMS Microbiology Letters，1999，170（1）：265-270.

[12] MURPHY J，RILEY J P.A modified single solution method for the determination of phosphate in natural waters[J].Analytic Chimica Acta，1962，27：31-36.

[13]? SCHWYN B，NEILANDS J B.Universal chemical assay for the detection and determination of siderophores[J].Analytical Biochemistry，1987，160（1）：47-56.

[14] ZHANG J，WANG ZH Y，HAN Y，et al.Isolation and identincation of alkaline proteprotease-producing bacteria[J]. Chemistry&Bioengineering，2006，23（10）：42-43.

[15] PENROSE D M，GLICK B R.Methods for isolating and characterizing ACC deaminase-containing plant growth-promoting rhizobacteria[J].Physiologia Plantarum，2003，118（1）：10-15.

[16] 張振粉，師尚禮.甘農(nóng)三號紫花苜蓿種帶細(xì)菌的生物功能分析及鑒定[J].草業(yè)學(xué)報，2018，27（1）：152-160.

[17] 王正，劉明池，季延海，等.潮汐灌溉時間對茄子穴盤苗質(zhì)量的影響[J].河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2015，38（6）：31-35.