李兆君，丁潤(rùn)梅

（寧夏醫(yī)科大學(xué)，寧夏銀川 750004）

多糖是由單糖組成的天然高分子化合物，具有廣泛的生物活性，能調(diào)節(jié)人體免疫力、抗腫瘤、延緩衰老等作用。枸杞多糖是枸杞中重要的組成物質(zhì)，是一種水溶性物質(zhì)。黑果枸杞和寧夏枸杞在植物學(xué)分類(lèi)上都屬于茄科，只是兩個(gè)不同的枸杞品種，本文對(duì)兩種物質(zhì)枸杞多糖含量的測(cè)定與分析比較，了解和全面認(rèn)識(shí)黑果枸杞這一珍貴的植物資源奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

多糖含量的測(cè)定最常見(jiàn)的方法是苯酚-硫酸法，以葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品為對(duì)照。苯酚-硫酸紫外分光光度法[1，2]測(cè)定多糖的方法是利用枸杞多糖在濃硫酸的作用下水解成單糖，脫水生成糠醛衍生物，該衍生物和苯酚能夠生成有色化合物，用紫外分光光度法測(cè)定其含量，實(shí)驗(yàn)前用乙醇洗滌去除單糖，以丙酮-石油醚脫色，避免對(duì)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生干擾，此方法簡(jiǎn)單，易行。

1 材料與儀器

1.1 材料

寧夏枸杞（中寧東華鄉(xiāng)產(chǎn)）；黑果枸杞（寧夏中寧種植）；D-葡萄糖（AR，科密歐試劑）；濃硫酸；苯酚（AR，煙臺(tái)雙雙化工有限公司產(chǎn)）；無(wú)水乙醇（AR，北聯(lián)試劑）；甲醛（天津市盛奧化學(xué)試劑有限公司）、丙酮、石油醚。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備、儀器

紫外分光光度計(jì)（UV-1600，上海美譜達(dá)儀器有限公司）；KDM 型調(diào)溫電熱套（250 mL）；粉碎機(jī)；80 目篩子；電子分析天平；瑞爾回流提取裝置；國(guó)華超級(jí)恒溫水浴箱。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 黑果枸杞多糖和寧夏枸杞多糖的提取

黑果枸杞和寧夏枸杞分別烘干，粉碎，過(guò)80 目篩，稱(chēng)取粉末10 g 加水100 mL 在100 ℃水浴中提取3次，每次提取時(shí)間為2.0 h、1.5 h、1 h，3 次300 mL，過(guò)濾合并3 次濾液，靜止12 h 后提取其上清液，用80 %乙醇減壓濃縮浸泡，冰箱中靜置24 h（5 ℃），過(guò)濾得沉淀，索氏提取，以95 %乙醇、無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌沉淀，得粗多糖粉末[3，4]。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：準(zhǔn)確稱(chēng)取干燥恒重的葡萄糖0.100 3 g，定容在100 mL 容量瓶中，得1 mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。用吸量管取10.00 mL，定容在100 mL容量瓶中，稀釋至100 μg/mL 葡萄糖測(cè)量液待用。

圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

苯酚溶液配制：稱(chēng)取90 g 苯酚，定容在100 mL 容量瓶中。取5.00 mL，定容在50 mL 容量瓶中，稀釋至9 %，現(xiàn)配現(xiàn)用。

取8 支試管，標(biāo)示管號(hào)1～8，分別加100 μg/mL 葡萄糖測(cè)量液0.00 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.30 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL，冰水浴分別加入9 %苯酚液0.50 mL，振蕩搖勻后緩慢加入濃硫酸3.00 mL，溫度不宜高，以微放熱為適宜，放置約30 min 后以0 號(hào)試管作空白參照，在490 nm 處測(cè)定吸光度值，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線圖（見(jiàn)圖1）。

2.3 多糖含量的測(cè)定

準(zhǔn)確稱(chēng)取干燥后所得的黑果枸杞和寧夏枸杞多糖粉末50.0 mg，放置在50.00 mL 容量瓶中，加蒸餾水溶解，定容。分別用吸量管吸取5.00 mL 于50.00 mL 容量瓶中，定容至刻度線，再用吸量管吸取1.00 mL 稀釋液于10.00 mL 容量瓶中，分別加入9 %苯酚液0.50 mL，振蕩搖勻后緩慢加入濃硫酸3.00 mL，放入水浴箱，沸水浴中反應(yīng)15 min 后立刻放置在0 ℃中進(jìn)行冷卻，冷卻后在490 nm 處測(cè)得吸光度值[5]。

3 結(jié)果與分析

3.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

以葡萄糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，測(cè)得的吸光度值為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，回歸線方程為：

3.2 黑果枸杞和寧夏枸杞多糖含量

根據(jù)實(shí)驗(yàn)測(cè)得的吸光度值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出黑果枸杞和寧夏枸杞樣品中葡萄糖的含量[6]，黑果枸杞和寧夏枸杞中多糖含量以葡萄糖的相對(duì)量表示（見(jiàn)表1、表2）。

4 討論與結(jié)論

本文對(duì)黑果枸杞和寧夏枸杞中多糖含量進(jìn)行了測(cè)定，從結(jié)果可以看出，寧夏枸杞多糖含量為9.26 %，與文獻(xiàn)報(bào)道中報(bào)道基本相符，黑果枸杞中多糖含量為6.28 %。寧夏枸杞多糖含量高于黑果枸杞，本論文實(shí)驗(yàn)結(jié)果給黑果枸杞的使用提供參考依據(jù)。

表1 黑果枸杞多糖含量與吸光度關(guān)系

表2 寧夏枸杞多糖含量與吸光度關(guān)系