王寬 劉慧榮 吳煥淦 張英英 翁志軍 秦秀娣 趙繼夢 吳璐一

摘要? 目的：從維生素D參與免疫調節(jié)作用角度探討隔藥灸治療UC的作用機制。方法：采用4%葡聚糖硫酸鈉制備UC大鼠模型。將動物隨機分為：正常組、模型組、隔藥灸組和SASP組。觀察各組大鼠DAI評分、結腸大體形態(tài)損傷評分及結腸組織病理學（HPS）評分、大鼠血清及結腸組織25（OH）D3、VDR濃度;檢測大鼠結腸組織炎性細胞因子IFN-γ、TNF-α的表達和大鼠結腸組織VDR、RXRα mRNA的表達;分析25（OH）D3與治療后DAI評分、結腸IFN-γ、TNF-α表達之間的相關性。結果：隔藥灸顯著降低UC大鼠DAI評分、結腸大體形態(tài)損傷評分及HPS評分（ P <0.05）;隔藥灸顯著升高UC大鼠血清和結腸中25（OH）D3、VDR濃度（ P <0.05），以及結腸組織中VDR、RXRαmRNA表達（ P <0.05）;隔藥灸降低UC大鼠結腸組織中IFN-γ、TNF-α表達水平（ P <0.05）。大鼠血清25（OH）D3濃度與治療后DAI評分呈負相關，結腸25（OH）D3濃度分別與結腸IFN-γ、TNF-α表達呈顯著負相關。結論：隔藥灸可抑制UC大鼠結腸IFN-γ、TNF-α的表達，升高其血清和結腸中的維生素D及其受體的濃度;UC大鼠腸道炎癥與低濃度的維生素D呈負相關。

關鍵詞? 隔藥灸;潰瘍性結腸炎;25羥基維生素D3;維生素D受體;γ干擾素;腫瘤壞死因子-α

Study on the Effects of Vitamin D Participation in Herb-partitioned Moxibustion of Rats with Ulcerative Colitist

WANG Kuan1，LIU Huirong1，WU Huangan1，ZHANG Yingying1，WENG Zhijun1，QIN Xiudi1，ZHAO Jimeng1，WU Luyi2

（1 Key Laboratory of Acupuncture-Moxibustion and Immunological Effects，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 201203，China; 2 Shanghai Qigong Research Institure，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 201203，China）

Abstract Objective： From the perspective of vitamin D′s participation in immune regulation，the mechanism of herb-partitioned moxibustion in the treatment of UC was discussed. Methods： The UC rat model was prepared with 4% dextran sodium sulfate.The animals were randomly divided into：a normal group，a model group，a herb-partitioned moxibustion group and a SASP group.Observe the DAI score，gross morphological damage score of the colon，and histopathology（HPS）score of each group of rats，the concentration of 25（OH）D3 and VDR in rat serum and colon tissue; detect the inflammatory cytokine IFN-，TNF-α in rat colon tissue and the expression of TNF-α and the expression of VDR and RXRα mRNA in rat colon tissue; analyze the correlation between 25（OH）D3 and DAI score，colon IFN-γ and TNF-α expression after treatment. Results： Herb-partitioned moxibustion significantly reduced the DAI score，gross morphological damage score and HPS score of UC rats（ P <0.05）; herb-partitioned moxibustion significantly increased the concentration of 25（OH）D3 and VDR in the serum and colon of UC rats（ P <0.05），and the expression of VDR and RXRαmRNA in colon tissue（ P <0.05）; herb-partitioned moxibustion reduced the expression levels of IFN-γ and TNF-α in colon tissue of UC rats（ P <0.05）.The serum 25（OH）D3 concentration in rats was negatively correlated with the DAI score after treatment，and the colonic 25（OH）D3 concentration was significantly negatively correlated with the expression of colon IFN-γ and TNF-α. Conclusion： Herb-partitioned moxibustion could inhibit the expression of IFN-γ and TNF-α，and significantly increase the concentration of vitamin D and its receptors in the serum and colon; intestinal inflammation in UC rats is negatively correlated with low concentrations of vitamin D.

Keywords? Herb-partitioned Moxibustion; Ulcerative Colitis; 25（OH）D3; Vitamin D receptor; IFN-γ; TNF-α

中圖分類號：R245.8 文獻標識碼：A? doi： 10.3969/j.issn.1673-7202.2020.14.007

潰瘍性結腸炎（Ulcerative Colitis，UC）屬炎癥性腸?。↖nflammatory Bowel Disease，IBD）范疇。UC是一種以反復發(fā)作的腹痛、腹瀉，伴黏液膿血便和不同程度的全身癥狀為主要臨床表現(xiàn)的慢性非特異性炎癥性腸道疾病，主要發(fā)生在直腸、結腸黏膜和黏膜下層等部位，主要表現(xiàn)為潰瘍形成，隱窩膿腫或炎性反應，杯狀細胞減少以及各類炎性反應細胞浸潤等非特異性病理改變。該病為消化內科常見疑難病，病程漫長，且逐年加重，久治難愈。目前UC的病因和發(fā)病機制仍不完全清楚，臨床對于UC也缺乏特異性的治療手段，而中醫(yī)針灸可有效改善UC的炎性反應表現(xiàn)，對治療UC具有一定的優(yōu)勢[1-3]。

新近的流行病學調查研究顯示[4-5]，IBD的發(fā)生正呈現(xiàn)出全球化的變化趨勢，在亞洲及亞太地區(qū)國家，UC的發(fā)生較CD更為普遍，而且隨著人類生活水平的不斷提高，UC患者病例的報道數(shù)量也不斷增多，UC的發(fā)病率和患病率已經呈現(xiàn)出了逐年上升的趨勢[6]。在近10年里，越來越多的國內外研究學者對維生素D與免疫學的關系表現(xiàn)出了極大的科學興趣和研究熱潮， 維生素D參與治療機體免疫系統(tǒng)相關疾?。ㄈ缪装Y性腸?。┑恼n題也逐漸被人們所關注并加以深入研究[7]。維生素D除了傳統(tǒng)的調節(jié)機體鈣、磷代謝的作用外，其在炎癥性腸病的發(fā)生發(fā)展過程中所起到的抗感染以及免疫調節(jié)的作用也具有十分重要的地位[8-9]。因此，本研究擬從維生素D參與免疫調節(jié)作用角度探討隔藥灸治療UC的作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物

40只健康成年雄性SD大鼠，體質量（170±10）g，SPF級，由上海中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供[動物許可證號：SCXK（京）2012-0001]，適應性喂養(yǎng)7 d。飼養(yǎng)環(huán)境為12 h晝夜節(jié)律交替、室內溫度控制在（20±2）℃，室內濕度控制在50% ～70%。所有實驗流程均經上海中醫(yī)藥大學動物研究倫理委員會批準。

1.1.2 藥物

柳氮磺砒啶腸溶片（SASP，上海信誼天平藥業(yè)有限公司，國藥準字H31020557）。

1.1.3 試劑與儀器

葡聚糖硫酸鈉（DSS）（分子量：36 000～50 000，MP Biomedicals公司，美國，貨號：9011-18-1），液體石蠟（國藥集團化學試劑有限公司，貨號：30139828），戊巴比妥鈉（Sigma公司，美國，貨號：P3761），蘇木素-伊紅（南京建成科技有限公司， 貨號：D006），中性樹膠（國藥集團化學試劑有限公司，貨號：10004160），大鼠VDR ELISA試劑盒（上海源葉生物科技有限公司，貨號：S0000-96T），大鼠25（OH）D3 ELISA試劑盒（上海源葉生物科技有限公司，貨號：S0000-96T），IFN-γ抗體（北京博奧森生物技術有限公司，貨號：bs-0480R），TNF-α抗體（武漢博士德生物工程有限公司，貨號：BA14901），二抗[基因科技（上海）有限公司，貨號：GP016029]，Trizol（Invitrogen公司，美國，貨號：15596026），RNase-free Water（QIAGEN公司，德國，貨號：129112），隨機引物（Invitrogen公司，美國，貨號：48190011），RNA酶抑制劑（Invitrogen公司，美國，貨號：AM2684），RT-PCR試劑盒（AMV）（Invitrogen公司，美國，貨號：12594100），2×Sybrgreen PCR mix（QIAGEN公司，德國，貨號：330520），TBE緩沖液（上海威奧生物科技有限公司，貨號：WH1183），6×上樣緩沖液（上海威奧生物科技有限公司，貨號：RT201），多功能酶標儀（BioTek公司，美國，型號：Synergy H4 Hybrid），高速冷凍離心機（Thermo Fisher公司，美國，型號：ST16R），通用臺式離心機（Thermo Fisher公司，美國，型號：ST16），凝膠圖像分析系統(tǒng)（Bio-Rad公司，美國，型號：ChemiDocTM XRS+），酶標儀數(shù)據(jù)獲取及分析軟件（BioTek公司，美國），Real-time檢測儀（Applied Biosystems，美國，型號：ABI-7300）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備

將40只SD大鼠完全隨機分為2部分：正常大鼠（ n =10）和UC模型大鼠（ n =30）。根據(jù)國際公認的方法[10-11]來制備UC大鼠模型，具體方法為：將DSS（MPBIO，美國）溶于大鼠每日的飲用水中，配置成4% DSS（wt/vol）溶液，自由飲用7 d。造模過程中模型組大鼠先后有2只死亡，造模結束后隨機抽取2只模型組和2只正常組，觀察大鼠體質量及大便性狀，觀察大鼠DAI及大體形態(tài)損傷評分，并做HE染色觀察結腸組織病理學變化，以確認模型是否制備成功，待UC大鼠模型制備成功后，依據(jù)大鼠DAI評分及體質量、便血情況，對模型組大鼠進行篩選處理（棄掉2只），確保24只UC模型大鼠后再繼續(xù)下一步實驗。

在成功制備實驗性UC大鼠模型的基礎上，采用隨機設計方法，將模型大鼠隨機分成模型組、隔藥灸組和SASP組，同時設立正常組，每組8只。1）正常組：與隔藥灸組同樣抓取固定，不做其他處理。2）模型組：繼續(xù)以1%DSS溶液維持大鼠UC的狀態(tài)。與隔藥灸組同樣抓取固定，不做其他處理。3）艾灸組：采用隔藥灸，取天樞穴（雙）和氣海穴，具體定位參照《實驗針灸學》[12]及相關文獻[13-14]。神闕穴定位在腹正中線上，劍突與恥骨聯(lián)合上緣連線的上2/3與下1/3交點處。天樞穴定位在臍中旁開約0.5 cm。氣海穴定位在臍下約1.0 cm。4）SASP組：參照《藥理實驗方法學》[15]，每日稱量大鼠體質量，并根據(jù)體質量按27 mg/100 g計算SASP劑量，通過大鼠灌胃的方式補充SASP，1次/d，共治療7 d。

1.2.2 干預方法

選擇天樞穴（雙）和氣海穴實施隔藥灸，詳細治療方案參考有關文獻[23-25]制定。藥餅是將含有附子、肉桂、丹參、紅花、木香、黃連等中藥成分的藥粉配以適量的黃酒，調和均勻，用相同規(guī)格的模具做成直徑1.0 cm，厚0.5 cm大小的藥餅備用。艾炷以精制艾絨（南陽漢醫(yī)艾絨有限責任公司）制成，直徑0.6 cm、高0.6 cm，重約90 mg，呈圓錐狀。施灸時，先將藥餅置于大鼠穴位上，再將艾炷放置于藥餅上，點燃施灸。灸治1次/d，每次每穴各灸2壯，共治療7 d。

干預結束后，以2%戊巴比妥鈉腹腔注射（0.2 mL/100 g）麻醉大鼠，待大鼠麻醉完全后，迅速剖開大鼠腹腔并充分暴露腹主動脈，用10 mL注射器取血，取血量在5～8 mL，緩慢移至10 mL離心管中，室溫靜置2 h后移至4 ℃離心機中，按3 000 r/min離心20 min，取上清液并分裝至EP管中，統(tǒng)一轉移至-80 ℃保存;大鼠取完血之后，馬上截取大鼠回盲部至肛門上3 cm處的全結腸，并沿腸系膜縱行剖開，用冰生理鹽水清洗，觀察結腸大體形態(tài)，并拍照記錄;在結腸大體形態(tài)評分完成后，將取下的結腸平均切成長1 cm的結腸段，除距肛門4～5 cm結腸段放于4%多聚甲醛溶液中固定外，其余結腸段均分別放于凍存管中，編號保存至-80 ℃冰箱中備用。

1.2.3 檢測指標與方法

1.2.3.1 疾病活動指數(shù)（DAI）

每天觀察大鼠的精神狀態(tài)、體質量、活動情況、毛發(fā)光澤度、食欲、大便性狀等，并依據(jù)Lagishetty V等[16]制定的DAI評分標準，每日測量大鼠的體質量，大便性狀和潛血情況（肉眼血便），并記錄。見表1。

1.2.3.2 組織學觀察和病理學評分

1）結腸大體形態(tài)損傷評分：大鼠處死后，截取大鼠回盲部至肛門上3 cm處的全結腸，并沿腸系膜縱行剖開，用冰生理鹽水清洗，依據(jù)Wallace JL等[17]制定的標準對結腸進行大體形態(tài)損傷評分。見表2。

2）結腸組織病理學評分（HPS）：大鼠結腸組織經4%多聚甲醛固定液固定24 h后，脫水，進行石蠟包埋及石蠟切片，切片厚4 μm，進行HE染色，觀察結腸組織的病理學改變，并按照Cooper HS等[18]制定的組織病理學評分標準進行評分記錄。見表3。

1.2.3.3 蘇木精-伊紅染色法（Hematoxylin-eosin Staining，HE）

結腸組織切片常規(guī)脫蠟至水;蘇木素（南京建成生物有限公司）染色90 s;流水沖10 min;鹽酸乙醇分化2 s;流水沖洗5 min;伊紅（南京建成生物有限公司）染色5 min;梯度乙醇脫水;二甲苯透明;中性樹膠封片;Olympus-BX53顯微鏡下觀察，采集圖片。

1.2.3.4 酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）

分別將不同濃度的標準品 依次加入微孔酶標板（96孔）中（50 μL）;除空白孔外，酶標板樣本孔中依次加入待測樣本各10 μL，再加入樣本稀釋液各40 μL;然后，依次加入HRP標記的一抗25（OH）D3和VDR（上海源葉生物科技有限公司），空白孔不加;將酶標板置于37 ℃恒溫箱中溫育60 min后，將酶標板倒置在吸水紙上適當拍打，直至拍干;每孔中加入稀釋好的洗滌液，靜置1 min后棄去洗滌液，拍干，如此重復5次;每個孔中依次加入試劑盒底物A、B，將酶標板置于37 ℃恒溫箱中避光孵育15 min;最后加入終止液50 μL，置于酶標儀中檢測每孔的OD值（波長450 nm），根據(jù)標準曲線計算出樣本濃度。

1.2.3.5 RT-PCR

結腸組織總RNA抽提，組織勻漿，采用Trizol法提取總RNA，檢測濃度、純度、完整性，取相等量的總RNA，采用SYBRGreen PCR試劑盒（QIAGEN，德國，貨號：208052）、cDNA synthesis試劑盒（Invitrogen，美國）逆轉錄cDNA，所用引物序列如下：GAPDH-F，GGCAAGTTCAACGGCACAGT;GAPDH-R，ATGACATACTCAGCACCGGC;VDR-F，AAGCTGGTGGAAGCCATTCA;VDR-R，TCGGCCAGTTTCTGGATCAT;RXRα-F，TCGCTGTTGAGCCCAAGACT;RXRα-R，GGCCCACTCCACAAGAGTGA。擴增條件為：95 ℃ 2 min，94 ℃ 10 s，60 ℃ 10 s，72 ℃ 40 s，40個循環(huán)。

1.2.3.6 免疫組織化學法（Immunohistochemistry，IHC）

采用免疫組織化學（IHC）方法檢測大鼠結腸IFN-γ、TNF-α炎性細胞因子的表達情況。組織切片用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗3次5 min，室溫下暴露于3%H2O2中15 min，以抑制內源性過氧化物酶。用0.01 m PBS洗滌3次5 min后，標本滴加已稀釋的一抗IFN-γ（北京博奧森生物技術有限公司）和TNF-α（武漢博士德生物工程有限公司），4 ℃孵育過夜。將標本加熱30 min，用0.01 mol/L PBS洗滌3次5 min，在室溫下與二抗（基因科技（上海）有限公司）孵育30 min，用0.01 M PBS洗滌3次5 min后，加入3，3-二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色液。然后，用中性膠密封切片，在光鏡下進一步觀察，使用Image-Pro Plus 6.0圖像分析系統(tǒng)進行半定量分析。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。若實驗數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布，則用來表示;若實驗數(shù)據(jù)不服從正態(tài)分布，則用M（QU-QL）表示。數(shù)據(jù)同時滿足正態(tài)性及方差齊性條件時，統(tǒng)計方法采用單因素方差分析（One-way ANOVA），并進一步作多個樣本均數(shù)間的兩兩比較（LSD檢驗）。數(shù)據(jù)不同時滿足正態(tài)性及方差齊性時，采用非參數(shù)檢驗中的Kruskal-Wallis H檢驗，多個樣本間的兩兩比較采用Nemenyi法。（Deluca and Cantorna 2001）對實驗數(shù)據(jù)進行相關性分析，若2個變量均為連續(xù)性變量，則用Pearson相關分析;若2個變量均為分類變量，或其中一個為分類變量，或對原始數(shù)據(jù)總體分布不明，則用Spearman相關分析。以r表示相關系數(shù)，以α=0.05為檢驗水準，以 P <0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2.8 相關性分析

經Spearman相關分析，結果表明大鼠血清25（OH）D3濃度與治療后大鼠DAI評分之間呈負相關（r=-0.479， P =0.006）。經Pearson相關分析，結果表明大鼠結腸25（OH）D3濃度與結腸組織IFN-γ、TNF-α表達之間均呈負相關關系（r=-0.442， P =0.011、r=-0.362， P =0.042）。見圖12。

3 討論

UC是消化內科的常見疾病，屬西醫(yī)病名，古代中醫(yī)典籍中并沒有明確的病名記載，亦無結腸炎稱謂。由中華中醫(yī)藥學會脾胃病分會于2010年審定的“潰瘍性結腸炎中醫(yī)診療共識意見” 中指出，可將其歸屬于“休息痢”“久痢”“腸澼”等 病范疇[19]。艾灸療法是中醫(yī)特色針灸療法中的重要組成部分，灸法在臨床上的應用甚為廣泛，而且療效顯著[20-22]。通過分析針灸干預UC的隨機對照試驗的相關文獻報道[23-24]，指出針灸治療UC療效優(yōu)于西藥，且具有不良反應少、安全性高等優(yōu)勢。Kim SY等[25]專門針對1998—2008年PubMed上有關灸法的隨機對照研究進行了系統(tǒng)的評價，明確指出艾灸治療UC的療效明顯優(yōu)于藥物治療。Wu HG等[26]將46例UC患者納入研究，并隨機分為隔藥灸組和SASP組，結果顯示，2組治愈率比較差異有統(tǒng)計學意義（ P <0.01）。宋宸宇等[27]研究中共納入脾腎陽虛型UC患者60例，分別經艾灸治療和口服SASP治療，結果顯示，2組間療效比較差異有統(tǒng)計學意義（ P <0.05），這些研究提示艾灸治療脾腎陽虛型UC療效顯著。我們的研究結果提示，隔藥灸顯著降低了UC大鼠的疾病活動指數(shù)，緩解了結腸黏膜炎性反應，其治療效應與SASP相當，這與以往研究結果一致。

在艾灸治療UC相關的免疫學機制研究方面，Zhou EH等[28]研究中共納入UC患者109例作為研究對象，隨機分為隔藥灸組和隔麩灸組，指出隔藥灸對IL-8、ICAM-1及其mRNA表達的抑制作用可能是艾灸改善UC腸道炎性反應的重要途徑之一。劉慧榮等[29]觀察隔藥灸對UC患者結腸黏膜TNF-α及COX-2表達的影響，結果發(fā)現(xiàn)隔藥灸可通過抑制結腸黏膜中TNF-α表達，減少COX-2產生，進而改善UC患者腸道炎性反應。此外，Wu HG等[30-34]多項研究表明，隔藥灸治療UC可能是通過抑制結腸上皮細胞凋亡，促進中性粒細胞凋亡， 改善結腸黏膜中促炎細胞因子與抗炎細胞因子之間的平衡狀態(tài)，調節(jié)結腸Bcl-2、Bax及Fas、FasL蛋白表達，從而修復結腸黏膜損傷，減輕或消除UC腸道炎性反應。本研究結果顯示，隔藥灸顯著抑制了結腸IFN-γ、TNF-α炎性細胞因子釋放，緩解UC大鼠腸道炎性反應。

維生素D可以通過調節(jié)機體免疫系統(tǒng)的發(fā)育和功能，直接或間接抑制IBD致病T細胞的功能，從而減弱或抑制IBD的進一步發(fā)展[35]。維生素D3通過與血漿中的維生素D結合蛋白（Vitamin D Binding Protein，DBP）結合，經肝臟轉化為25（OH）D3，后經腎臟最終轉化為1，25-（OH）2D3[36-37]。25（OH）D3是維生素D在人體內的主要循環(huán)形式，1，25-（OH）2D3則是維生素D在人體內的主要效應形式。而1，25-（OH）2D3需依賴于維生素D受體（Vitamin D Receptor，VDR）來發(fā)揮它的生物學效應[38]。1，25-（OH）2D3可以直接作用于Th1和Th17細胞等，下調IL-17和IFN-γ等促炎性細胞因子，同時上調Th2細胞因子IL-4等[39-40]，從而抑制體內的炎性反應。在眾多與UC發(fā)生發(fā)展相關的因素中，感染和免疫異常是目前比較公認的可影響UC發(fā)病的關鍵因素[41]。維生素D除了可以調節(jié)機體免疫系統(tǒng)紊亂的功能之外，還具有一定的抗感染作用，在發(fā)揮抗感染和調節(jié)機體免疫紊亂的相互作用下，維生素D可具體參與調節(jié)UC腸道炎性反應及相關Th亞群細胞炎性因子水平，抑制疾病狀態(tài)，同時促進腸道黏膜修復，調節(jié)機體免疫穩(wěn)態(tài)，從而進一步達到緩解或治療目的。體外實驗表明，CD4+T細胞在缺乏維生素D時，可誘發(fā)IL-17細胞的大量分泌，而1，25-（OH）2D3則可以抑制Th17細胞的功能，具體表現(xiàn)在可下調IL-17mRNA表達，IL-17細胞分泌受到抑制，炎性反應即可得到一定的改善[42-43]。本實驗結果顯示，模型組大鼠血清及結腸組織中25（OH）D3、VDR濃度明顯低于正常組，而模型組大鼠結腸IFN-γ、TNF-α表達明顯高于正常組;隔藥灸組大鼠血清及結腸組織中25（OH）D3、VDR濃度明顯高于模型組，而隔藥灸組大鼠結腸IFN-γ、TNF-α表達明顯低于模型組。表明隔藥灸可顯著調節(jié)UC大鼠血清及結腸25（OH）D3、VDR濃度，能明顯抑制UC大鼠結腸IFN-γ、TNF-α表達，提示維生素D可能參與隔藥灸對UC大鼠結腸IFN-γ、TNF-α促炎性細胞因子的抑制作用，維生素D的免疫調節(jié)作用可能是隔藥灸對UC起效機制的重要環(huán)節(jié)。

機體維生素D與某些免疫系統(tǒng)紊亂性疾病之間存在較高的易感性，而維生素D缺乏在處于活動期和緩解期的IBD患者中均普遍存在，而且維生素D缺乏與疾病的活動程度具有一定的相關性[44]。本實驗中，相關性分析結果表明大鼠血清25（OH）D3濃度與治療后大鼠DAI評分之間呈負相關，這說明隨著大鼠DAI評分的升高，大鼠血清25（OH）D3濃度則會保持下降的趨勢，這與UC患者中普遍存在維生素D缺乏的結論相一致;大鼠結腸25（OH）D3濃度與結腸組織IFN-γ、TNF-α表達之間均呈負相關，IFN-γ、TNF-α均為促炎性細胞因子，可介導機體多種免疫反應，參與破壞腸道黏膜屏障，加重UC的腸道的炎性反應以及疾病活動程度，而IFN-γ、TNF-α與25（OH）D3的負相關關系則說明維生素D可通過抑制炎性細胞的增值分泌參與調節(jié)機體的免疫反應，改善UC的疾病狀態(tài);大鼠結腸VDR mRNA水平與結腸組織IFN-γ、TNF-α表達之間也呈負相關，說明維生素D與VDR均參與了上述調節(jié)IFN-γ、TNF-α炎性細胞因子的過程。

本研究主要通過研究維生素D在隔藥灸治療UC大鼠過程中對結腸IFN-γ及TNF-α炎性細胞因子表達所發(fā)揮的相關免疫調節(jié)作用，初步探討了維生素D與免疫之間的關系，證實UC大鼠中存在維生素D缺乏。因受時間、技術等因素所限，相關免疫學指標不夠全面，維生素D相關的免疫學作用機制未能完全闡明，有關維生素D在隔藥灸治療UC過程中具體作用途徑的研究也未能深入展開，后續(xù)可結合多種現(xiàn)代科學技術，交叉并借鑒多學科理論，從不同角度對維生素D的免疫調節(jié)作用加以探討，維生素D的補充標準及其安全性也需開展相關研究加以規(guī)范和完善。繼續(xù)深入研究維生素D與UC之間的關系，將有助于進一步揭示UC的發(fā)病機制，同時也將為進一步闡釋灸法作用的起效機制提供一定的理論與實踐依據(jù)，以期提高艾灸臨床療效。

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（2020-04-30收稿 責任編輯：徐穎）

基金項目：國家自然科學基金項目（81674074，81973955）;上海市青年科技英才揚帆計劃項目（17YF1417600）;上海市青年科技啟明星計劃項目（16QA1403400）;上海市衛(wèi)生計生委優(yōu)秀人才培養(yǎng)計劃項目（2018YQ11）

作者簡介：王寬（1989.07—），男，碩士，醫(yī)師，研究方向：針灸治療胃腸道疾病，E-mail：wangkuan271@163.com

通信作者：趙繼夢（1986.04—），女，博士，助理研究員，研究方向：針灸治療炎癥性腸病的臨床與基礎研究，E-mail：zhaojm0414@163.com;吳璐一（1984.07—），女，博士，副研究員，研究方向：針灸治療胃腸疾病的臨床與基礎研究，E-mail：luyitcm@163.com