王席 陶芳 胡開(kāi)明

目前認(rèn)為肺癌是發(fā)病率和死亡率增長(zhǎng)最快，對(duì)人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一[1]。近年來(lái)許多國(guó)家都報(bào)道肺癌的發(fā)病率和死亡率均明顯增高，其中男性肺癌發(fā)病率和死亡率約占所有惡性腫瘤的第一位，女性發(fā)病率占第二位，死亡率占第二位[2]。雖然目前用來(lái)肺癌的診斷手段較多，技術(shù)診斷如X光，CT掃描等，病理診斷如細(xì)針活檢及支氣管鏡檢查。其共同的特點(diǎn)是較為繁瑣且耗時(shí)長(zhǎng)。因此，臨床更加傾向于認(rèn)可簡(jiǎn)便快速無(wú)創(chuàng)的血液學(xué)生物標(biāo)志物檢測(cè)方法。近年來(lái)Hsp90α作為一種新型的腫瘤標(biāo)志物應(yīng)用于不同的腫瘤診斷中，但Hsp90α在肺癌的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)進(jìn)展中扮演著何種角色，研究較少[3]。因此，本研究通過(guò)對(duì)118例肺癌患者和30例肺部炎癥患者和30例正常人的血漿Hsp90α水平及其他腫瘤指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析，以此來(lái)探討血漿熱休克蛋白90α定量檢測(cè)及與其他腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合在肺癌患者中的應(yīng)用價(jià)值。

資料與方法

一、一般資料

選取2018年5月至2019年8月在我院住院診斷的118例肺癌患者(其中肺腺癌50例，鱗癌47例，小細(xì)胞肺癌21例)，其均經(jīng)病理明確診斷且未進(jìn)行放化療。其中男性85例，女性33例，年齡67.34±9.42歲。同期選擇30例肺部良性病變肺炎患者作為炎癥組，并排除其他嚴(yán)重系統(tǒng)疾病及惡性腫瘤，年齡66.33±8.10歲。選擇30例健康體檢者作為正常對(duì)照組，年齡66.23±6.44歲。入選體檢各指標(biāo)均正常排除心、肝、脾、肺、腎及其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病。

二、檢測(cè)方法

采集待檢者 2mL EDTA-K2 抗凝血用于血漿Hsp90α水平的檢測(cè)，另采集3～5mL無(wú)添加劑的非抗凝血標(biāo)本分離血清后用于檢測(cè)胃癌抗原(CA72-4)、癌胚抗原(CEA)、細(xì)胞角蛋白19片段(CYFRA 21-1)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、胃泌素釋放肽前體(ProGRP)和 鱗癌抗原(SCC)，所有標(biāo)本需經(jīng)4000 rpm離心8 min分離血漿/血清待檢。血漿Hsp90α水平檢測(cè)采用煙臺(tái)普羅吉生物科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)的熱休克蛋白90α定量檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附法)進(jìn)行定量測(cè)定；SCC采用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀MAGLUMI 2000 Plus與其配套試劑進(jìn)行定量測(cè)定；其他的腫瘤指標(biāo)采用羅氏E 601電化學(xué)發(fā)光儀與原裝配套試劑進(jìn)行定量測(cè)定。其操作步驟均嚴(yán)格按照儀器及試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用GraphPad Prism 6.01軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。首先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，非正態(tài)分布計(jì)量資料用 M (P25-P75)來(lái)表示。之后選用非參數(shù)檢驗(yàn)兩兩進(jìn)行數(shù)據(jù)比較分析，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Hsp90α與其他肺癌腫瘤指標(biāo)的聯(lián)合診斷，其數(shù)據(jù)模型采用SPSS 17.0進(jìn)行l(wèi)ogistic回歸分析評(píng)估后應(yīng)用MedCalc軟件繪制ROC曲線判斷診斷效能，通過(guò) Youden指數(shù)來(lái)確定最佳診斷臨界值。

結(jié) 果

一、 肺癌組、炎癥組與正常對(duì)照組間的血漿Hsp90α水平比較

三組的血漿Hsp90α水平分別是125.26(67.79～135.0)ng/mL、68.57 (35.17～77.82) ng/mL、57.83 (48.88～69.85) ng/mL。數(shù)據(jù)分析顯示肺癌組的血漿Hsp90α水平明顯高于其他兩組，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0001)，而炎癥組與正常對(duì)照組的血漿Hsp90α水平比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見(jiàn)圖1)。

圖1 肺癌組與其他兩組的血漿Hsp90α水平比較情況

二、 不同類型的肺癌患者的血漿Hsp90α水平比較

統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析顯示不同類型的肺癌患者的血漿Hsp90α水平均明顯高于正常對(duì)照組，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，其中炎癥組和正常對(duì)照組間的血漿Hsp90α水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見(jiàn)圖2)。

圖2 不同類型的肺癌患者的血漿Hsp90α水平比較情況

三、 血漿Hsp90α水平在肺癌中的診斷價(jià)值

血漿Hsp90α水平在肺癌組中呈現(xiàn)明顯的高表達(dá)狀態(tài)，通過(guò)SPSS 17.0軟件繪制ROC曲線判斷其診斷效能(見(jiàn)圖3)，其曲線下面積AUC為0.802(95%CI0.736～0.858)，敏感性和特異性分別達(dá)到72.03%,和86.67%， Youden指數(shù)為 0.5870，與非肺癌組的血漿Hsp90α水平比較，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)(見(jiàn)圖3)。

圖3 肺癌組的血漿Hsp90α水平ROC曲線

四、 血漿Hsp90α聯(lián)合其他腫瘤標(biāo)志物對(duì)肺癌的診斷效能分析

從三組血漿Hsp90α水平及其他相關(guān)腫瘤指標(biāo)結(jié)果比較來(lái)看，血漿Hsp90α是最敏感的肺癌診斷指標(biāo)，但特異性較低(見(jiàn)表1)。血漿Hsp90α聯(lián)合其他腫瘤標(biāo)志物指標(biāo)診斷肺癌，通過(guò)logistic回歸分析評(píng)估后應(yīng)用MedCalc軟件繪制ROC曲線判斷其診斷效能，其曲線下面積AUC為0.966(95%CI0.928～0.987)，敏感性和特異性分別達(dá)到88.98%和96.67，對(duì)肺癌進(jìn)行聯(lián)合診斷效能明顯高于單一指標(biāo)，與非肺癌組相比，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)(見(jiàn)表1，圖4)。

表1 單一指標(biāo)診斷肺癌的ROC曲線比較(%)

圖4 血漿Hsp90α聯(lián)合其他相關(guān)腫瘤標(biāo)志物指標(biāo)診斷肺癌ROC曲線

討 論

目前肺癌占癌癥相關(guān)疾病的死亡率約占25%以上并且每年約有15%的新癌癥病例發(fā)生[4]。通常肺癌被發(fā)現(xiàn)的時(shí)候即為晚期，故難以通過(guò)常規(guī)手術(shù)的方法來(lái)達(dá)到治愈的目的。這就需要我們通過(guò)放射或者藥物治療的方式來(lái)對(duì)癌細(xì)胞進(jìn)行控制和殺滅。盡管近年來(lái)分子靶向技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用在改善肺癌的藥物治療方式上提供了強(qiáng)有力的證據(jù)，但肺癌平均5年生存率仍然只有15%至20%[4]。臨床迫切需要新的簡(jiǎn)易快速的方法用來(lái)篩查和診斷肺癌，因此高靈敏的肺癌腫瘤生物標(biāo)志物的應(yīng)用對(duì)提高臨床的診療水平具有重要意義。

事實(shí)上，熱休克蛋白90α是熱休克蛋白家族中研究最為深入的成員。在人體內(nèi)作為一種重要的蛋白伴侶，在調(diào)控細(xì)胞周期及凋亡、協(xié)助激素信號(hào)傳遞等方面發(fā)揮著重要作用[5-6]。目前，有報(bào)道稱血漿Hsp90α蛋白水平的高表達(dá)與髓母細(xì)胞瘤、乳腺癌以及結(jié)直腸癌等疾病的發(fā)生發(fā)展均具有一定的相關(guān)性[7-9]。在腫瘤發(fā)生過(guò)程中，正常細(xì)胞發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)，Hsp90α和其他熱休克蛋白的水平增加，可引起蛋白質(zhì)變性防止蛋白非特異性聚集以保證蛋白質(zhì)進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼郫B，以便維持細(xì)胞的正?；钚?。因此，腫瘤對(duì)抑制Hsp90α更敏感[10]。有研究表明許多癌基因蛋白均為熱休克蛋白的作用靶點(diǎn)，因此抑制熱休克蛋白的功能將促進(jìn)這些癌基因蛋白的降解，有助于癌癥治療[11-12]。

本次研究通過(guò)檢測(cè)肺癌患者的血漿Hsp90α蛋白水平與肺部良性病變肺炎患者和健康體檢者進(jìn)行比較，以評(píng)估其對(duì)肺癌的診斷價(jià)值。我們發(fā)現(xiàn)血漿Hsp90α蛋白水平在肺癌患者中明顯高于其他兩組，不同類型的肺癌患者間的血漿Hsp90α蛋白水平無(wú)明顯差異。通過(guò)ROC曲線發(fā)現(xiàn)使用最佳的血漿Hsp90α蛋白水平臨界值其對(duì)肺癌的診斷具有較高的敏感性和特異性。通過(guò)將血漿Hsp90α與其他的肺癌腫瘤標(biāo)志物指標(biāo)相結(jié)合，可以提高其對(duì)肺癌的診斷效能。因此，我們認(rèn)為血漿Hsp90α蛋白水平對(duì)肺癌的輔助診斷是有用的生物標(biāo)志物之一。

與其他研究者[13]一樣，本研究證明血漿Hsp90α蛋白異常表達(dá)于肺癌患者的體內(nèi)。其在鱗癌為主的肺癌患者中異常表達(dá)水平最高，腺癌和小細(xì)胞肺癌次之。與其他的肺癌腫瘤標(biāo)志物相比，其異常表達(dá)于肺癌的敏感性最高。但Hsp90α作為新的腫瘤標(biāo)志物之一，單個(gè)標(biāo)記物的敏感性或特異性往往不能滿足臨床要求，因此多數(shù)學(xué)者提倡一次同時(shí)測(cè)定多種腫瘤標(biāo)志物，以便提高檢測(cè)的敏感度和特異度。本研究通過(guò)Hsp90α與其他六種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)分析，其敏感性和特異性均有大幅度提高。在肺癌診治方面，這可能成為臨床實(shí)踐中潛在的診斷和預(yù)后腫瘤標(biāo)志物之一。因此，同大多數(shù)學(xué)者[14]的觀點(diǎn)一樣，作者認(rèn)為聯(lián)合檢測(cè)不同的腫瘤標(biāo)志物以達(dá)到提高對(duì)肺癌預(yù)測(cè)的特異性和敏感性來(lái)滿足臨床對(duì)肺癌的早期篩查和診治，這對(duì)肺癌的早發(fā)現(xiàn)、早治療起到了至關(guān)重要的作用。