金昌盛，周卸才，馮敬騫，李姜言，程萱

（1.衢州市衢江區(qū)農(nóng)業(yè)特色產(chǎn)業(yè)發(fā)展中心，浙江 衢州 324000；2.浙江仙霞湖健康科技有限公司，浙江 衢州 324000； 3.衢州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江 衢州 324000；4.衢州中醫(yī)醫(yī)院，浙江 衢州 324000）

鐵皮石斛為蘭科植物鐵皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo的干燥莖，因其富含單糖、多糖、多酚、生物堿等成分，具有抗衰老、抗腫瘤、降血糖、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、減輕肝損傷等作用，廣受市場歡迎。鐵皮石斛也是《中國藥典》收錄的名貴中草藥之一，具有滋陰清熱、益胃生津等功效，也是養(yǎng)生保健的佳品。

鐵皮石斛的自然繁殖率很低，加上長年無節(jié)制的采挖，野生資源逐漸枯竭。我國從1980年以來，在多地開展了鐵皮石斛人工規(guī)?；N植的研究，并從2008年后，種植規(guī)模迅速擴(kuò)大，但主要以大棚地栽方式種植為主，這種模式雖然長勢好、產(chǎn)量高、便于管理，但在品質(zhì)和藥效上要比野生的鐵皮石斛差。所以近年來，逐步興起仿野生種植技術(shù)，仿野生種植主要采用貼樹種植的方式，也有采用巖石種植的方式，理論上后者更接近野生鐵皮石斛的生長環(huán)境，但對自然條件要求極高，為了能起到示范作用、便于后期大面積推廣。

1 鐵皮石斛仿野生種植母樹篩選研究

衢州地區(qū)大部分樹種都能作為鐵皮石斛的附生母樹，考慮到附生母樹的郁閉度、樹皮的粗糙程度、粗糙樹皮的裂紋特征、樹皮水分等因素會(huì)對鐵皮石斛的生長、品質(zhì)產(chǎn)生影響。經(jīng)過初步篩選確定板栗樹、松樹和苦櫧樹為試驗(yàn)樹種。試驗(yàn)時(shí)，將已馴化的鐵皮石斛組培苗綁在樹干上，并抹上泥漿或牛糞，再以青苔等材料覆蓋根部。試驗(yàn)結(jié)果顯示，板栗樹作為鐵皮石斛附生母樹，鐵皮石斛組培苗的成活率最高超過97.5%；而松樹最低，存活率僅為88.9%，苦櫧樹栽的成活率為90.8%。因?yàn)榘謇鯓錁淦ご植?，還有縱裂溝和苔蘚，保水性好，樹冠為傘形，橫向分枝較多，樹葉茂密而均勻，郁閉度較大，為鐵皮石斛生長創(chuàng)造了良好生境。松樹木樹皮光滑，保水性差，而且冠幅小，郁閉度低。因此，選擇板栗樹作為主要的附生母樹。同時(shí)對母樹的樹齡進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)5年～15年的板栗樹的樹皮粗糙度、水分含量比較適中，樹栽鐵皮石斛的生長情況良好，品質(zhì)優(yōu)異；而15年以上的老樹，因其樹皮粗糙較干燥，且郁閉度過大，鐵皮石斛的生長也會(huì)受限[1-2]。

2 鐵皮石斛組培苗的馴化研究

因鐵皮石斛的自然繁殖率低，目前多采用組培苗馴化，影響組培苗馴化成功的因素包括馴化季節(jié)、煉苗時(shí)間、開瓶晾置時(shí)間、培養(yǎng)基質(zhì)、定植方式等。課題組通過試驗(yàn)選出組培苗馴化的優(yōu)化條件，結(jié)果表明，初夏和秋季的成活率較高，尤其是初夏成活率超過96%。分析原因主要是冬季氣溫偏低，組培苗生長緩慢甚至停滯，而盛夏高溫高濕，馴化苗的質(zhì)量也較差，初夏時(shí)的氣溫、濕度最適宜組培苗馴化。煉苗時(shí)間應(yīng)大于30d，因?yàn)闀r(shí)間太短，組培苗對外界環(huán)境的適應(yīng)性還較弱，成活率偏低。開瓶后可以讓鐵皮石斛組培苗適應(yīng)外界自然環(huán)境，但同時(shí)也會(huì)感染霉菌，所以掌握開瓶時(shí)間非常重要，經(jīng)試驗(yàn)開瓶晾置2～3d培養(yǎng)基無霉菌感染，比較合適。移栽前要將培養(yǎng)基洗掉，以免移栽后滋生霉菌，造成爛根。洗苗的同時(shí)，需根據(jù)苗高、莖粗度進(jìn)行質(zhì)量分級。采用鋸末、水苔、泥炭等作為馴化基質(zhì)，經(jīng)過試驗(yàn)篩選，以水苔：泥炭：鋸末=2：1：1的比例配制的基質(zhì)移栽 60d成活率均高于96%。但其中的鋸末須經(jīng)過堆漚發(fā)酵處理，泥炭使用前也要經(jīng)過高溫消毒。組培苗采用穴盤定植方式，其成活率超過97%。

3 鐵皮石斛附生母樹綁定技術(shù)優(yōu)化

在將鐵皮石斛苗樹栽綁定時(shí)，要求綁扎物能自然腐爛，從而使得鐵皮石斛經(jīng)過一段時(shí)間生長會(huì)自然的附著在樹干上，這樣才不影響后續(xù)生長，故綁扎物選擇易腐爛的麻繩。綁定時(shí)，先挖掉母樹栽苗點(diǎn)處的苔蘚，再把苗的根基部貼在栽苗點(diǎn)上，然后用麻繩綁緊，要求根系盡量舒展。固定點(diǎn)應(yīng)在苗根部與根莖基部以上2cm處，不能直接綁在苗基部，以免影響基部發(fā)芽和新根生長。為了促進(jìn)發(fā)芽和新根生長可在根基部涂上泥漿或牛糞[1-2]。

4 鐵皮石斛不同附生母樹對主要成分含量的影響

經(jīng)過上述栽培方法，分別采集了不同附生母樹的鐵皮石斛樣品，從性狀等方面進(jìn)行了初步的分析，經(jīng)鑒定為蘭科植物鐵皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo的干燥莖，不做螺旋處理，為直條，作為含量測定所需的鐵皮石斛樣本[3]。

4.1 多糖的含量測定

取本品粉末（過三號(hào)篩）約0.3g，精密稱定，加水200mL，加熱回流2小時(shí)，放冷，轉(zhuǎn)移至250mL量瓶中，用少量蒸餾水分3次洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2mL，置15mL離心管中，精密加入無水乙醇10mL，搖勻，冷藏1小時(shí)，取出，4000r/m離心20分鐘，棄去上清液，沉淀加80%乙醇洗滌2次，每次8ml，離心，棄去上清液，沉淀加熱水溶解，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，即得供試品溶液。精密量取供試品溶液1mL，置10mL具塞試管中，精密加入5%苯酚溶液1mL（臨用配制），搖勻，再精密加硫酸5mL，搖勻，置沸水浴中加熱20分鐘，取出，置冰浴中冷卻5分鐘，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在488nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，按標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中無水葡萄糖的量，計(jì)算，即得含量結(jié)果，見表1。

4.2 甘露糖的測定

取本品粉末（過三號(hào)篩）約0.12g，精密稱定，置索氏提取器中，加80%乙醇適量，加熱回流提取4小時(shí)，棄去乙醇液，藥渣揮干乙醇，濾紙筒拆開置于燒杯中，加水100mL，再精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2mL，煎煮1小時(shí)并時(shí)時(shí)攪拌，放冷，加水補(bǔ)至約100mL，混勻，離心，吸取上清液1mL，置安瓿瓶或頂空瓶中，加3.0mol/L的鹽酸溶液0.5mL，封口，混勻，110℃水解1小時(shí)，放冷，用3.0mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至中性，吸取400μl，照校正因子測定方法，自“加0.5mol/L的PMP甲醇溶液”起，依法操作，取上清液注入液相色譜儀，測定，即得含量結(jié)果，見表1。

4.3 醇溶性浸出物的含量測定

取供試樣品粉末2.000g放入蒸餾瓶中，加入100mL 95%乙醇溶液浸提1h，稱取蒸餾瓶質(zhì)量并記錄，在沸水浴中回流提取1h，取出冷卻，稱取蒸餾瓶質(zhì)量加水補(bǔ)至與m1一致，過濾。吸取濾液20mL于烘至恒重且已知質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，于沸水浴上蒸干，轉(zhuǎn)移至烘箱中105℃烘3h，取出至干燥器中冷卻稱重，即得含量結(jié)果，見表1。

4.4 多酚的含量測定

稱取0.2g均勻磨碎的試樣于10mL離心管中，加入在70℃中預(yù)熱過的70%甲醇溶液5mL，用玻璃棒充分?jǐn)嚢杈鶆驖駶?，立即移?0℃水浴中，浸提10min（隔5min攪拌1次），浸提后冷卻至室溫，轉(zhuǎn)入離心機(jī)在3500r·min-1轉(zhuǎn)速下離心10min，將上清液轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶。殘?jiān)儆?mL70%甲醇溶液提取1次，重復(fù)以上操作。合并提取液定容至10mL，搖勻。再移取1.0mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，待測。在每個(gè)試管內(nèi)分別加入5.0mL的福林酚試劑，搖勻。反應(yīng)3～8min，加入7.5%碳酸鈉溶液4.0mL，加水定容至刻度，搖勻。室溫下放置60min，在765nm波長條件下用分光光度計(jì)測定吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出茶多酚的濃度，即得含量結(jié)果，見表1。

表1 樹栽鐵皮石斛主要成分含量的結(jié)果

5 結(jié)語

綜上所述，以鐵皮石斛不同附生母樹的樹栽工藝入手，對其栽培技術(shù)要點(diǎn)展開深入的探究和分析，并對主要成分含量進(jìn)行測定，從含量測定結(jié)果看，板栗樹作為附生母樹所樹栽的鐵皮石斛主要成分較高，較適合作為鐵皮石斛優(yōu)良的附生母樹，適合在山區(qū)大力推廣，整體推動(dòng)鐵皮石斛仿野生栽培產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。