于占晶

（衡水學(xué)院生命科學(xué)系 河北衡水 053000）

蘋果在我國是最普遍栽培的果樹之一，屬薔薇科蘋果亞科蘋果屬植物，其果實(shí)有重要的營養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值[1]。蘋果斑點(diǎn)落葉病是目前我國各蘋果產(chǎn)區(qū)的主要病害之一[2]。由蘋果致病型（異名引起的蘋果斑點(diǎn)落葉病最早于1905 年在美國密歇根農(nóng)業(yè)實(shí)驗(yàn)站發(fā)現(xiàn)，1924 年在美國首次報(bào)道，并將該病原命名為蘋果斑點(diǎn)落葉病菌絲體的越冬是通過潛伏在落葉上進(jìn)行的。第2 年春天，風(fēng)把潛伏在落葉中的病菌孢子吹散，在空氣中大量傳播。等到蘋果樹開花后，病菌孢子開始對(duì)新梢進(jìn)行初次侵染，一旦形成降雨后菌絲體會(huì)再次擴(kuò)散，形成二次侵染，這個(gè)時(shí)候極易引起發(fā)病。北方許多果園病葉率非常高，有的果園病葉率竟達(dá)90%以上，平均每個(gè)葉片有十余個(gè)病斑。蘋果樹葉大面積脫落，果實(shí)的品質(zhì)和產(chǎn)量受到很大影響，嚴(yán)重時(shí)常造成蘋果樹勢(shì)衰弱，影響來年長勢(shì)和花芽形成。因此，及時(shí)掌握蘋果斑點(diǎn)落葉病的綜合防治技術(shù)十分重要[4～6]。

隨著人民生活水平的提高，環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)，物理防治方法顯得尤為重要[7]。N、P、K 是促進(jìn)植物生長的必不可缺的微量元素，與植物病害的發(fā)生和植物的健康成長有非常重要的聯(lián)系[8]。K 肥的合理施用也能夠?qū)?xì)菌、真菌和病毒引發(fā)的病害有一定的抑制作用。王波等研究發(fā)現(xiàn)，玉米紋枯病菌菌絲的疏密程度和生長快慢均受到不同C、N源的影響，其菌絲的疏密度也影響著菌核的數(shù)量和重量[9]。N、P、K 元素的含量與蘋果樹病害關(guān)系中，當(dāng)感染蘋果褐斑病時(shí)，健康植株葉片上K 元素的含量要高于感染的植株葉片K 元素的含量。感染輪紋病時(shí)，染病的葉片K 元素含量往往低于健康葉片K 元素含量。同時(shí)蘋果斑點(diǎn)落葉病的病情加重往往與 K、Ca、P 元素缺乏有一定的聯(lián)系[10～11]。

1 材料與方法

表1 供試試劑名稱、劑型、廠家信息

1.2 供試培養(yǎng)基的制備 馬鈴薯葡萄糖瓊脂半量培養(yǎng)基：馬鈴薯去皮后稱量100 g，把切成小塊的馬鈴薯放入鍋中，加入1 000 mL 無菌水，煮沸30 min。用紗布濾除馬鈴薯殘?jiān)?，然后加入瓊?7 g，葡萄糖10 g?；靹蚝蠓盅b，同時(shí)加入7 個(gè)不同濃度的N、P、K（表2）。分裝后在0.103 Mpa，121 ℃下高壓蒸汽滅菌20 min。

表2 N、P、K 含量及其對(duì)應(yīng)化學(xué)試劑含量 /（g/L）

1.3 N、P、K對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌影響測(cè)定 采用菌絲生長速率法測(cè)定7 種不同濃度的N、P、K 元素對(duì)病原菌的菌絲生長的作用，打開超凈工作臺(tái)紫外線殺菌30 min，將加入不同濃度 N、P、K 元素的半量 PDA 培養(yǎng)基加熱熔化后倒入直徑為9 cm 的培養(yǎng)皿中，每個(gè)處理設(shè)3 個(gè)重復(fù)，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照。待其凝固后，用直徑5 mm 的打孔器在活化好的病原菌菌落邊緣打取菌餅，倒置接種到培養(yǎng)基平板中央，倒置于25 ℃恒溫箱中黑暗培養(yǎng)，48 h開始用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，每隔24 h觀察測(cè)量1 次并記錄數(shù)據(jù)直至菌落鋪滿培養(yǎng)皿。

菌絲生長抑制率/%=（對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）/對(duì)照菌落直徑×100%

1.4 數(shù)據(jù)分析 用Microsoft Excel 2010 對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，SPSS 20.0 軟件進(jìn)行方差分析，顯著水平均為 p≤0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 N元素對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的影響 用第7 d測(cè)量所得數(shù)據(jù)結(jié)合SPSS20.0 軟件進(jìn)行分析，結(jié)果見表3。不同N 元素對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌菌絲生長均表現(xiàn)出抑制作用，其中N 濃度為1.00 g/L 的抑制效果最佳，抑制率達(dá)到了21.28%。N 濃度為5.00 g/L 時(shí)抑制效果次之，抑制率達(dá)到了18.80%。15.00 g/L 抑制效果最差，僅為3.96%。N 濃度 1.00 g/L、5.00 g/L 與 CK 蘋果斑點(diǎn)落葉病菌菌絲直徑差異性顯著，與其他濃度差異不顯著。濃度為 23.00、20.00、15.00、10.00、2.00 g/L 時(shí)，菌落直徑差異性均不顯著。

表3 N 對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的影響

2.2 P元素對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的影響 用第7 d測(cè)量所得數(shù)據(jù)結(jié)合SPSS 20.0 軟件進(jìn)行分析，結(jié)果可見表4。不同 P 元素對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌落生長均表現(xiàn)出抑制作用，其中P濃度為3.30 g/L 的抑制效果最佳，抑制率達(dá)到了27.89%。P 濃度為1.00 g/L 時(shí)抑制效果次之，抑制率達(dá)到了17.77%。濃度為3.80 g/L 抑制效果最差，僅為5.37%。濃度4.60 g/L 和1.00 g/L時(shí)與CK差異性顯著，與其他不顯著。濃度4.20、3.80、3.30、2.80、2.00 g/L 與對(duì)照以及相互之間差異性均不顯著。

表4 P 對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的影響

2.3 K元素對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的影響 用第7 d測(cè)量所得數(shù)據(jù)結(jié)合SPSS 20.0 軟件進(jìn)行分析，結(jié)果可見表5。不同濃度的K 元素對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌落生長均表現(xiàn)出抑制作用，抑制效果均較差，其中K 濃度為10.00 g/L 的抑制效果最佳，抑制率僅為2.28%，濃度為20.00 g/L 抑制效果最差，抑制率僅為0.41%。濃度10.00、5.00、2.00 g/L 與 CK 差異性顯著，與其他濃度相比差異不顯著。濃度37.00、26.00、20.00、15.00 g/L差異性均不顯著。

表5 K 對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的影響

3 結(jié)論與討論

本研究表明，N元素濃度為1 g/L時(shí)，蘋果斑點(diǎn)落葉病菌生長最慢，抑制效果最好，抑制率為21.28%。15.00 g/L 抑制效果最差，僅為3.96%。P 元素濃度為3.30 g/L 的抑制效果最佳，抑制率達(dá)到了27.89%。3.80 g/L 抑制效果最差，僅為5.37%。K 元素濃度為10.00 g/L 的抑制效果最佳，抑制率僅為2.28%。從整體來看，N、P 元素的抑制作用較為明顯，K 元素的抑制作用最差。5 d 以后，所有濃度的N、P、K 元素對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病病菌均出現(xiàn)抑制作用，但不同濃度抑制效果之間存在較大差異。為進(jìn)一步研究是否可以通過適當(dāng)增加N、K、P 元素含量，減輕蘋果斑點(diǎn)落葉病的發(fā)生打下基礎(chǔ)。