鄭卉娜， 鄭晨昕， 黃 建， 王竹紅

(福建農(nóng)林大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院， 福建 福州 350002)

柑桔褐圓蚧[Chrysomphalusaonidum(Linnaeus)]隸屬半翅目(Hemiptera)盾蚧科(Diaspididae)，是柑桔產(chǎn)區(qū)的重要害蟲(黃建軍，2005)。該害蟲繁殖量大、田間世代交替嚴(yán)重，且因其蟲體有角質(zhì)化的蠟質(zhì)介殼保護(hù)，化學(xué)防治十分困難(劉先琴等，2002)。鑒于介殼蟲特殊蟲體構(gòu)造，以及大量使用化學(xué)農(nóng)藥對環(huán)境、食品安全造成不可恢復(fù)的傷害，因此可以利用與生態(tài)環(huán)境和諧的生物防治措施來控制柑桔褐圓蚧(車東耀等，2006)。

柑桔褐圓蚧有多種寄生蜂，主要種類有蚜小蜂科(Aphelinidae)的嶺南黃蚜小蜂(AphytislingnanensisCompere)、褐圓蚧純黃蚜小蜂(AphytisholoxanthusDeBach)、長纓恩蚜小蜂[Encarsiacitrina(Craw)]、單毛長纓恩蚜小蜂[Encarsialounsburyi(Berlese et Paoli)] 、長恩蚜小蜂[Encarsialongata(Dozier)]、斯氏四節(jié)蚜小蜂[Pteroptrixsmithi(Compere)]、雙帶花角蚜小蜂(AblerusperspeciosusGirault)(重寄生蜂)以及跳小蜂科(Encyrtidae)的雙帶巨角跳小蜂[Comperiellabifasciata(Howard)]等(甘宗義等，1993；黃建，1994；徐志宏等，2004)，其中褐圓蚧純黃蚜小蜂(以下簡稱純黃蚜小蜂)是褐圓蚧的優(yōu)勢種寄生蜂(黃建，1994)。美國、以色列、墨西哥、南非、巴西、秘魯和澳大利亞等國家相繼從國外引進(jìn)純黃蚜小蜂，對本國柑桔褐圓蚧的為害都獲得了不同程度的防治效果(黃建，1994；楊慶寅，2003)。

幼期個體發(fā)育特征(如蛹的色素)是黃蚜小蜂屬寄生蜂種類鑒定的重要參考依據(jù)之一。目前，國內(nèi)外對純黃蚜小蜂的研究報(bào)道較少，僅限于寄生蜂寄生齡期(Rosenetal,1978)、不同條件下的壽命和產(chǎn)卵量的研究(Quednau,1964;Raoetal,1969)，尚無有關(guān)其胚胎和胚后個體發(fā)育的研究。利用黃金榕飼養(yǎng)柑桔褐圓蚧，對純黃蚜小蜂胚胎和胚后個體發(fā)育進(jìn)行了跟蹤觀察，拍照并描述其個體發(fā)育過程和形態(tài)變化，為深入了解純黃蚜小蜂的生物學(xué)特性提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)蟲源

柑桔褐圓蚧：福建農(nóng)林大學(xué)經(jīng)濟(jì)昆蟲試驗(yàn)室繁殖多代的試驗(yàn)種群，寄主植物為黃金榕(Ficusmicrocarpa‘Golden Leaves’)。

純黃蚜小蜂：福建南平柑桔褐圓蚧種群上采集，并在福建農(nóng)林大學(xué)經(jīng)濟(jì)昆蟲實(shí)驗(yàn)室柑桔褐圓蚧上繁殖多代。

1.2 試驗(yàn)條件

飼養(yǎng)條件：養(yǎng)蟲籠長50 cm×寬50 cm×高50 cm，四周尼龍網(wǎng)(200目)，溫度(25±1) ℃，相對濕度70%±5%，光照周期L∶D為14∶10。

1.3 試驗(yàn)儀器及材料

人工氣候箱(MRX-250B-LED，寧波普朗特儀器有限公司)、Zeiss顯微鏡(Axioskop 40，蔡司光學(xué)儀器國際貿(mào)易有限公司)、Nikon顯微鏡(Eclipse NI-U，尼康光學(xué)儀器有限公司)；其他材料：小養(yǎng)蟲盒(直徑3 cm×高1.8 cm)、培養(yǎng)皿(直徑12 cm×高2 cm、直徑15 cm×高1.5 cm)、解剖針、濾紙、小剪刀、保鮮膜、脫脂棉、指形管、載玻片。

1.4 純黃蚜小蜂胚胎發(fā)育

將寄生有柑桔褐圓蚧(孕卵期)的黃金榕葉片置于培養(yǎng)皿中，葉柄用脫脂棉包住并加水保濕，培養(yǎng)皿底部放置濾紙，培養(yǎng)皿上部用保鮮膜包住。將已交配過的純黃蚜小蜂雌蜂放入培養(yǎng)皿中，在體視顯微鏡下觀察純黃蚜小蜂寄生，并隨即挑開介殼，獲得初產(chǎn)寄生蜂卵若干，放入小養(yǎng)蟲盒中，置于人工氣候箱[溫度(25±1) ℃，相對濕度70%±5%，光照L∶D為14∶10]飼養(yǎng)，每隔2 h觀察卵的發(fā)育狀態(tài)。卵的表觀變化觀察采用直射光，在Nikon顯微鏡(50×)下觀察拍照；卵的內(nèi)部變化觀察采用透射光，將卵放于載玻片上，滴適量荷氏液封片，在Nikon顯微鏡(50×)下觀察拍照。連續(xù)觀察54 h，直至卵孵化。

1.5 純黃蚜小蜂胚后發(fā)育

在體視顯微鏡下觀察純黃蚜小蜂寄生后，將寄生有柑桔褐圓蚧的黃金榕葉片的葉柄插在清水中，用塑料瓶罩住，置于人工氣候箱[溫度(25±1) ℃，相對濕度70%±5%，光照L∶D為14∶10]飼養(yǎng)。待卵孵化后，采用直射光，每天用Nikon(Eclipse NI-U)顯微鏡(10×)觀察拍照，直至成蜂羽化，重復(fù)30次。

2 結(jié)果與分析

2.1 純黃蚜小蜂胚胎發(fā)育

采用透射光(圖1)和直射光(圖2)觀察，初產(chǎn)的純黃蚜小蜂卵具卵柄，橄欖球形，淡黃色半透明狀，長約133 μm，寬約75 μm，卵內(nèi)原生質(zhì)和卵黃分布均勻，充滿卵體。隨著生長發(fā)育，胚盤和胚胎形成。從初產(chǎn)卵到胚胎最終形成，純黃蚜小蜂卵的體積沒有明顯增大。

初產(chǎn)卵：透射光觀察，卵內(nèi)原生質(zhì)和卵黃分布均勻，充滿卵體；卵殼內(nèi)側(cè)有一薄層卵黃膜，卵黃膜圍著原生質(zhì)、卵黃和核(很小，不明顯)(圖1A)；直射光觀察，初產(chǎn)卵呈橄欖球形，表面光滑，卵柄位于卵基部(圖2A)。

2～6 h卵：透射光觀察，合核分裂并形成許多子核，為胚胎發(fā)育的卵裂期(圖1B～D)；直射光觀察，卵表觀與初產(chǎn)卵時變化不大(圖2B～D)。

8 h卵：透射光觀察，經(jīng)過多次卵裂，子核向卵的周緣移動，進(jìn)入周質(zhì)內(nèi)，并逐漸形成圍繞卵黃的單層細(xì)胞層，即胚盤。胚盤內(nèi)包裹著大量卵黃球和卵黃細(xì)胞(圖1E)；直射光觀察，卵內(nèi)有顆粒物出現(xiàn)，應(yīng)是卵黃球和卵黃細(xì)胞(圖2E)。

10～14 h卵：透射光觀察，胚盤形成后細(xì)胞開始分化，卵黃向卵中間聚集，與卵殼之間出現(xiàn)一條界限，此后卵黃和原生質(zhì)的活動都在界限范圍內(nèi)(圖1F～H)；直射光下，可觀察到卵內(nèi)顆粒物(卵黃球和卵黃細(xì)胞)，其他表觀變化不大(圖2F～H)。

16～18 h卵：透射光觀察，胚盤細(xì)胞繼續(xù)分化，形成胚帶和胚膜，卵黃和原生質(zhì)聚攏并游動，中部出現(xiàn)一圓形旋渦(圖1I～J)；直射光下，觀察到分布不均的卵內(nèi)顆粒物(卵黃球和卵黃細(xì)胞)(圖2I～J)。

20～40 h卵：透射光觀察，胚盤細(xì)胞繼續(xù)分裂增厚形成胚帶，開始胚層分化；卵黃球和卵黃細(xì)胞數(shù)量逐漸減少；在胚層形成的同時，胚胎開始分節(jié)(不明顯)(圖1K～U)。直射光下，觀察到分布不均的卵內(nèi)顆粒物(卵黃球和卵黃細(xì)胞)，但數(shù)量呈減少趨勢(圖2K～U)。

42～48 h卵：透射光觀察，胚層分化出相應(yīng)的內(nèi)部器官和系統(tǒng)，如消化系統(tǒng)等(隱約可見)(圖1V～Y)；直射光觀察，卵內(nèi)顆粒物(卵黃球和卵黃細(xì)胞)開始聚攏，形成黃色團(tuán)狀物，卵逐漸由黃色變?yōu)橥该靼咨?圖2V～Y)。

50～52 h卵：透射光觀察，胚胎雛形形成，在卵中央頻繁扭動，帶動卵內(nèi)容物跟著伸縮流動，頭部開始發(fā)育(圖1Z～Z1)；直射光觀察，卵內(nèi)除黃色團(tuán)狀物外，其他地方呈現(xiàn)透明白色(圖2Z～Z1)。

54 h卵：透射光觀察，胚胎在卵中央晃動頻繁，頭部形成，向卵柄部位蠕動，卵殼表皮出現(xiàn)裂縫，開始孵化[圖1(Z2)]；直射光觀察，卵表面出現(xiàn)一條裂縫[圖2(Z2)]。

孵化中的卵：透射光觀察，卵孵化時卵殼從卵端部沿“C”字形脫落，直至脫到卵柄，孵化時間1～2 min[圖1(Z3)]；直射光下，觀察到卵殼脫落[圖2(Z3)]。

注：A～O為初產(chǎn)卵～28 h卵; P～Z2為30～54 h卵; Z3為孵化。

初孵一齡幼蟲：直射光觀察，初孵幼蟲除體內(nèi)黃色團(tuán)狀物(應(yīng)是消化道)外，其余部分白色透明[圖2(Z4)]。

注：A～O為初產(chǎn)卵～28 h卵; P～Z1為30～52 h卵; Z2為裂縫； Z3為孵化； Z4為初孵幼蟲。

2.2 純黃蚜小蜂幼蟲發(fā)育

采用直射光，在Nikon(Eclipse NI-U)顯微鏡(10×)下觀察拍照。在溫度(25±1) ℃，相對濕度70%±5%條件下，純黃蚜小蜂從初孵幼蟲發(fā)育至預(yù)蛹約7 d，體色從淺黃色至白色(圖3)。幼蟲發(fā)育過程中，蟲體逐漸變大，近圓形或近橢圓形，淺黃色，內(nèi)容物淺褐色(圖3A～F)；老熟幼蟲白色，內(nèi)容物淺褐色(圖3G)；預(yù)蛹白色，排出暗褐色至黑色的蛹便(圖3H～I(xiàn))。

注：A～G為1～7 d幼蟲; H-I為預(yù)蛹。

2.3 純黃蚜小蜂蛹發(fā)育

采用直射光，在體視顯微鏡下觀察拍照。在溫度(25±1) ℃，相對濕度70%±5%條件下，純黃蚜小蜂雌蜂從預(yù)蛹發(fā)育到成蜂羽化歷期7～8 d(圖4)。1 d蛹，體黃色，復(fù)眼黃色，胸部腹板和腹部腹板大部分暗褐色，腹板末端淺色；2 d蛹，復(fù)眼顏色變化不大，附肢顏色稍深；3 d蛹，復(fù)眼逐漸變?yōu)槌燃t色；4～5 d蛹，復(fù)眼顏色加深呈淺紅褐色；6 d蛹，復(fù)眼暗紅褐色；7 d蛹，復(fù)眼淺灰色，身體及附肢色稍暗。第8 d，雌蜂羽化，體黃色。

注：A-H為1～7 d蛹(腹面觀)； I為雌成蜂(背面觀)。

雄蜂蛹的個體發(fā)育和體色變化基本同雌蜂蛹。

總體來看，純黃蚜小蜂從初蛹至成蜂羽化，復(fù)眼顏色變化最大，由初蛹的黃色變?yōu)槌燃t色、淺紅褐色至暗紅褐色，羽化前呈淺灰色。老熟蛹(復(fù)眼淺灰色)的體色是黃蚜小蜂種類鑒定重要的輔助特征。

3 小結(jié)與討論

采用透射光和直射光兩種不同拍攝方法，觀察描述純黃蚜小蜂胚胎發(fā)育過程，以及初產(chǎn)卵到卵孵化的54 h卵的表觀變化與內(nèi)部變化。當(dāng)卵發(fā)育到18 h，出現(xiàn)了雙層膜結(jié)構(gòu)，這與智利黃蚜小蜂(AphytischilensisHoward)卵發(fā)育過程中出現(xiàn)雙層膜的情況一致，但后者并未指出雙層膜出現(xiàn)的時間(Rosenetal,1978)。

目前，蚜小蜂科包含40多屬，重要的屬有：恩蚜小蜂屬(Encarsia)、黃蚜小蜂屬(Aphytis)、異角蚜小蜂屬(Coccobius)等。不同屬的蚜小蜂寄生方式和卵的形狀也多不相同，如恩蚜小蜂屬為體內(nèi)寄生蜂，卵大多乳白色，但形狀有所差異，雙斑恩蚜小蜂卵長橢圓形，一端稍尖，另一端具一小柄(錢明惠，2005)；友恩蚜小蜂卵兩端窄，中部寬，似棒槌狀(王竹紅，2006)；淺黃恩蚜小蜂卵長橢圓形，一端較鈍圓，一端具小柄(周長青，2008)；麗蚜小蜂卵兩端鈍圓(徐文秀，2015)；日本恩蚜小蜂卵長橢圓形(謝金莉，2015)。異角蚜小蜂屬也同樣為體內(nèi)寄生蜂，卵多為長橢圓形(王竹紅等，2012)。而黃蚜小蜂屬為體外寄生蜂，卵多呈橄欖球形，淡黃色半透明狀，一端具卵柄，如智利黃蚜小蜂(Rosenetal,1978)和純黃蚜小蜂。

根據(jù)人們對一些蚜小蜂的研究，體內(nèi)寄生(卵產(chǎn)在寄主體內(nèi)，幼期在寄主體內(nèi)發(fā)育)和體外寄生(卵產(chǎn)在寄主體外，幼期在寄主體外發(fā)育)的蚜小蜂卵內(nèi)胚胎形成和發(fā)育過程有所不同。以恩蚜小蜂屬(體內(nèi)寄生)和黃蚜小蜂屬(體外寄生)為例，體內(nèi)寄生的友恩蚜小蜂和日本恩蚜小蜂卵的內(nèi)容物聚攏形成長橢圓形的幼蟲胚胎，胚外膜與卵殼之間分界明顯，胚胎體節(jié)分節(jié)較明顯；而體外寄生的智利黃蚜小蜂卵內(nèi)幼蟲胚胎近似圓形，胚外膜與卵殼之間分界不明顯，胚胎體節(jié)分節(jié)不明顯(Rosenetal,1978)，這與純黃蚜小蜂相似。在溫度25 ℃、相對濕度70%條件下，日本恩蚜小蜂卵發(fā)育12 h出現(xiàn)胚外膜；24 h胚外膜完全消失；40～44 h后，幼蟲蟲體輪廓形成，開始在卵內(nèi)蠕動(謝金莉，2015)。而純黃蚜小蜂卵發(fā)育18 h出現(xiàn)胚外膜，50 h形成幼蟲胚胎雛形，52 h開始蠕動，但胚外膜一直未消失。有報(bào)道稱，胚外膜上釋放出畸形細(xì)胞，可能參與對寄主免疫的抑制作用(Pedataetal,2003)，而純黃蚜小蜂為體外寄生，其胚外膜的形成和作用原理尚待進(jìn)一步研究。在溫度25 ℃、相對濕度70%條件下，日本恩蚜小蜂卵的平均歷期為43.15 h(謝金莉，2015)，雙斑恩蚜小蜂卵平均歷期為(47.52±9.12) h(錢明惠，2005)，而純黃蚜小蜂卵平均歷期為48～72 h，相對較長。

黃蚜小蜂屬寄生蜂個體微小且大多通體黃色，形態(tài)特征差異很小，種類鑒定十分困難。而黃蚜小蜂屬不同種類蛹的色素呈現(xiàn)一定差異，并成為該屬寄生蜂種類正確鑒定的重要輔助依據(jù)(Compere,1955;李順珍等，1993)。本文描述了純黃蚜小蜂蛹個體發(fā)育過程中色素的變化，其胸部腹板和腹部腹板大部分呈暗褐色，復(fù)眼顏色從初蛹至成蜂羽化，由黃色變?yōu)槌燃t色、淺紅褐色至暗紅褐色，羽化前呈淺灰色。目前，已知道黃蚜小蜂屬蛹的色素有多種類型，有僅僅胸部腹板暗褐色，或胸部腹板和腹部腹板大部分暗褐色，或胸部腹板和腹部腹板全部暗褐色；還有胸、腹部完全黃色，或蛹體部分黑色，或全部黑色等等。因此，在進(jìn)行黃蚜小蜂屬寄生蜂資源調(diào)查和研究中，還要十分重視蛹色素的觀察。