莊馥璐 柴小粉 高蓓蓓 王 憶

(中國農業(yè)大學 園藝學院，北京 100193)

蘋果是薔薇科蘋果亞科蘋果屬植物，其果實富含礦物質和維生素，是人們日常生活中常見的鮮食水果之一。2017年世界蘋果年產量約為 7 680 萬t，中國作為世界上最大的蘋果生產國和消費國，產量達4 450 萬t，占世界蘋果年產量的58%[1]。中國蘋果的商業(yè)化生產已經成為許多地區(qū)重要的經濟支柱。

磷是植物生長發(fā)育不可缺少的大量元素之一，對促進植株的生長發(fā)育和各種新陳代謝起著重要的作用。植株吸收的磷95%以上是無機磷的形式，占全磷含量的25%～56%[2]，因此無機磷的供應常出現(xiàn)不足。據(jù)相關統(tǒng)計顯示，全世界約有43%的耕地土壤缺乏能被植物吸收利用的有效磷, 我國缺乏有效磷的耕地土壤更是占我國總耕地土壤的70%以上[3]。為了保證農業(yè)生產的需求, 人們常常通過施用大量的磷肥來彌補有效磷的供應[4]。然而隨著大量的磷肥投入，同時也造成了土壤磷盈余, 不僅降低了磷肥的利用率, 而且對果園環(huán)境構成威脅[5]。因此，如何能夠滿足土壤磷素供給，又不給生態(tài)環(huán)境造成額外負擔，成為了果園管理新的關注點，生物菌肥也隨之孕育而生。

土壤微生物在磷循環(huán)中起著至關重要的作用，其中，一些細菌可以通過溶解不溶性磷酸鹽來提高植物的有效磷庫，其被稱之為解磷菌。解磷菌種類繁多，根據(jù)種類，可分為細菌、真菌和放線菌等。也可以根據(jù)解磷菌作用對象，即分解底物的不同，分為有機磷微生物(能夠轉化有機磷化合物)和無機磷微生物(將難溶無機化合物轉為可吸收的可溶磷)。其實很難根據(jù)分解底物的不同將解磷菌區(qū)分開來，無機磷和有機磷都能被鏈霉菌屬所溶解。目前，報道的菌屬約有 20 多種，其中解磷細菌研究最多，主要包括芽孢桿菌(Bacillus)、假單胞菌(Pseudomonas)、根瘤菌(Rhizobium)、伯克氏菌屬(Burkholderia)、無色桿菌屬(Achromobacter)、固氮菌(Azotobacter)、農桿菌(Agrobacterium)、微球菌(Micrococcus)、黃桿菌屬(Flavobacterium)和根瘤菌(Rhizobiumsp.)等[8-9]。解磷真菌類報道較少，但真菌磷能力強是目前許多學者關注的熱點。研究較多的有青霉菌屬(Penicillium)、曲霉菌屬(Asperquillus)、根霉屬(Rhizopus)、 鐮刀菌屬(Fusarium)和小菌核菌屬(Sclerotium)等。放線菌主要包括鏈霉菌屬(Streptomyces)和AM菌根。解磷菌對于農業(yè)生產上有重要的意義，解磷菌肥料的生產簡單、見效快、市場競爭力強。因此，解磷菌肥不僅能夠促進植物生長使作物增產，還能提高磷利用率使土壤環(huán)境改善，促進生態(tài)系統(tǒng)的可持續(xù)發(fā)展。

然而，目前在對土壤解磷菌的研究主要集中于溶解無機磷菌株的篩選[6-7]，對于篩選土壤難溶性有機磷解磷菌的報道則較少[8]。同時，隨著種植業(yè)結構的調整，人們對園藝產品的需求在不斷增加，相應的，園藝產品對土壤中營養(yǎng)元素的需求也在不斷增加，致使全國耕地土壤速效磷含量逐年下降。在土壤磷循環(huán)過程中，解磷微生物起著重要的作用，它可以將土壤中的難溶性磷轉化為植物能夠吸收并利用的有效磷，最終實現(xiàn)提高磷肥的利用率、改良土壤結構和提高作物產量的作用[9-12]。目前，對于解磷細菌篩選的研究國內外已有一些相關的報道，而前人多集中在對小麥[13-14]、玉米[15]和番茄[16]等根際解磷菌的研究，并將相關的解磷菌應用到菌肥中。國內外眾多學者研究了生物菌肥在豆科和茄科等作物上的應用，目前在美國和澳大利亞等發(fā)達國家80%以上的豆科作物種植時都接種根瘤菌劑，但在中國接種根瘤菌的作物面積不足種植面積的1%[17-18]。其中，前人對茄子[19]和花生[20]等植物的研究表明：解磷菌肥的適量增施能夠有效提高植株對氮、磷和鉀的吸收，顯著提高作物的產量，改善品質；生物菌肥在煙草上的施用能夠改善植煙土壤環(huán)境[21]以及促進煙株對鉀素的吸收和利用[22]，從而促進煙株生長發(fā)育，提高產量和質量[23]。但是，目前對于果樹根際解磷菌的報道還很少。

本研究以植酸鈣作為唯一有機磷源，通過選擇性培養(yǎng)，從蘋果砧木小金海棠根際土壤中分離純化解磷細菌，研究該菌株的解磷能力及生長情況；并選擇解磷能力強的菌株回接到植物根系，研究解磷菌對植株的影響，以期在開發(fā)果樹特異性和效果好的解磷菌資源。

1 材料與方法

1.1 土壤樣品采集

蘋果根際土的收集在北京市昌平區(qū)上莊鎮(zhèn)實驗基地蘋果園中進行。該地區(qū)屬于暖溫帶，半濕潤大陸性季風氣候，年均氣溫13 ℃，年均降水量535 mm，降水主要集中在夏季，全年日照2 390 h，土壤類型以褐土為主。果園中的栽培品種為富士，嫁接基砧為小金海棠的實生砧木，于2011年9月初芽接。在2018年10月進行土壤采集，以樹干為中心的半徑1 m范圍內，避開施肥點，取深度為0～20 cm 土層的毛細根，用“抖根法”收集根際土，裝入無菌自封袋并迅速放入冰盒，帶回實驗室于4 ℃冰箱保存，用于后續(xù)解磷細菌的分離篩選。

1.2 解磷菌的分離篩選及純化

稱取1 g根際土，裝入10 mL無菌離心管中，加入10 mL無菌水，充分振蕩形成細菌懸浮液，依次稀釋得到10-1、10-2、10-3、10-4和10-5稀釋梯度的樣品。取各稀釋梯度懸液100 μL均勻涂布到含蒙金娜有機磷培養(yǎng)基(1 L 體系:10 g葡萄糖(glucose)、0.5 g (NH4)2SO4、0.3 g NaCl、0.3 g KCl、0.03 g FeSO4·7H2O、0.03 g MnSO4·4H2O、0.3 g MgSO4·7H2O、0.4 g酵母粉、15 g瓊脂粉、2 g 植酸鈣，pH為7.0)的平板上，放置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱2 d。從適當稀釋倍數(shù)的培養(yǎng)基上挑取形成溶磷圈的單菌落，采用劃線的方式將單菌落接種到LB平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)形成單菌落，再挑取單菌落在蒙金娜培養(yǎng)基上劃線，反復上述步驟直至得到純的單菌落。然后將這些菌株接種到LB斜面培養(yǎng)基上，37 ℃培養(yǎng)2 d后置于4 ℃冰箱中保存，用于后續(xù)檢測。

1.3 解磷細菌的鑒定

對菌體進行革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察菌體形態(tài)。解磷細菌生理生化特性測定參考《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》[24]和《伯杰細菌鑒定手冊》[25]的方法對菌株進行淀粉水解、過氧化氫酶試驗、M.R (甲基紅)試驗和明膠試驗等生理生化試驗。

從小金海棠根際土壤中分離純化的解磷細菌進行16S rDNA測序分析，用以確定解磷菌菌株種類。在LB培養(yǎng)液中活化細菌，吸取菌液進行細菌PCR擴增，采用細菌16S rDNA通用引物(27F：5-AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG-3′；1492R：5′- TAC GGY TAC CTT GTT ACG ACT T-3′；M 為A 或C)，PCR反應體系50 μL，PCR反應程序為 95 ℃ 預變性5 min；94 ℃變性1 min，58 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min 30 s，循環(huán)34次；最后72 ℃延伸7 min。然后將PCR產物交由生工生物工程(上海)股份有限公司進行測序分析，所得序列提交到Genbank中利用Blast程序(www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)進行相似性比對，用ClustalX進行序列比對分析，確定細菌的種類，最后用MEGA軟件(版本5.5)構建系統(tǒng)進化樹。

1.3.1解磷菌的解磷能力測定

將分離純化的菌株接種到蒙金娜有機磷培養(yǎng)基平板上，放置 37 ℃ 恒溫箱中培養(yǎng) 60 h 分別測定細菌菌落直徑(d)和溶磷圈直徑(D)，計算可溶性指數(shù)(D/d)。由于磷酸單酯酶能夠水解對硝苯基磷酸二鈉，產生磷酸和對硝基苯酚(黃色)。通過比色法測定釋放的對硝基苯酚的含量，計算單位根際土單位時間內對硝基苯酚的量來評估磷酸單酯酶的活性。因此向培養(yǎng)基平板上滴加2 mL 150 mmol/LpNPP(對硝苯基磷酸二鈉)，覆蓋溶磷圈，4 h后觀察顯色結果，如有黃色產生則說明細菌分泌磷酸酶。將各菌株分別接種到LB液體培養(yǎng)基，以180 r/min 37 ℃ 培養(yǎng)7 h后用分光光度計調整細菌濃度至OD600=0.6。在超凈工作臺中吸取750 μL細菌懸液加入到裝蒙金娜液體培養(yǎng)基(15 mL)的50 mL無菌離心管，斜放于37 ℃振蕩(180 r/min)培養(yǎng)，每個菌株3次重復。在培養(yǎng)24 h后吸取2 mL溶液，4 ℃，12 000 r/min 離心5 min，取上清液用鉬銻抗顯色法[26]測定無機磷含量，同時用pH計測定培養(yǎng)液pH。另外取上清液0.5 mL，添加0.1 mLpNPP (對硝苯基磷酸二鈉)MES緩沖液(pH 8.5)，30 ℃水浴培養(yǎng)30 min，用1 mL 0.25 mol/L NaOH溶液終止反應。對照先添1 mL 0.25 mol/L NaOH溶液終止反應，然后 30 ℃水浴培養(yǎng)30 min，12 000 r/min離心10 min，用pNP(對硝基苯酚)做標準曲線比色，測定磷酸酶含量。

1.3.2解磷菌生長曲線的測定

各解磷細菌菌株在LB液體培養(yǎng)基以180 r/min 37 ℃培養(yǎng)8 h，用分光光度計將菌液調整至OD600=0.1用于接種。本試驗用100孔微孔板作為細菌生長曲線測定的培養(yǎng)裝置，在微孔中分別加入180 μL液體LB培養(yǎng)基，然后每個孔內加入20 μL調整好的菌液，對照加入20 μL液體LB培養(yǎng)基，每個處理重復9次。微孔板放到細菌連續(xù)生長儀Bioscreen C MBR(Oy Growth Curves Ab Ltd，F(xiàn)inland)中 37 ℃ 培養(yǎng)，每隔2 h監(jiān)測OD600值，用于反應細菌的生長狀況。

1.4 擬南芥回接試驗及根際pH顯色

擬南芥根際回接解磷菌試驗在培養(yǎng)基上進行。解磷菌回接試驗設置3個處理，分別是正常磷供應、無菌且植酸鈣為磷源、回接解磷菌且植酸鈣為磷源(在擬南芥根系生長位置加入PsbM4菌液10 μL)，每個處理4次重復，每次重復1個板(10棵擬南芥)。本試驗采用M培養(yǎng)基，按照表1準備母液[27]。配置工作液時吸取相應體積的母液，加 10 g/L 蔗糖，pH調至5.5，固體培養(yǎng)基加3 g/L植物凝膠，121 ℃滅菌15 min。試驗用擬南芥為野生型，種子用75%無水乙醇消毒30 s，無菌水沖洗3～4次，再用次氯酸鈉(體積比：次氯酸鈉∶無菌水=1∶3)消毒4 min，無菌水清洗3～4次，播種于MS培養(yǎng)基中，放置于4 ℃純化3 d。之后取出，培養(yǎng)基垂直培養(yǎng)，生長2周左右轉移至不同處理的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，直至出現(xiàn)缺磷表型。收獲時檢測根際pH。

表1 Minimum(M)培養(yǎng)基母液配方[27]Table 1 Concentration of stock solutions to prepare minimum(M) medium

收獲時，將擬南芥根系用去離子水清洗3次，用吸水紙將根系表面水分吸干，將根系放置于顯色培養(yǎng)基(0.06 g溴甲酚紫用少量95%酒精溶解，用蒸餾水定容至100 mL，取1 mL加入100 mL去離子水中，用1 mol/L NaOH調整溶液pH約5.9，加入1 g瓊脂，加入溶解后倒板)上，將根系展開，暗培養(yǎng)60 min，觀察根系周圍培養(yǎng)基顏色變化。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)均用Excel進行初步整理，利用SPSS軟件(20.0版本)進行數(shù)據(jù)分析。對不同菌株的可溶性指數(shù)、液體培養(yǎng)基中無機磷濃度和磷酸酶活性進行單因素方差分析和LSD法多重比較(P<0.05)。利用MEGA軟件(版本5.5)構建系統(tǒng)進化樹，利用Sigmaplot軟件(版本10.0)擬合細菌生長曲線。

2 結果與分析

2.1 蘋果根際土壤解磷菌的篩選和純化

在5個不同稀釋梯度下，對比根際土壤細菌懸液在篩選培養(yǎng)基上培養(yǎng)24 h后的菌落個數(shù)，確定解磷菌的最終篩選稀釋倍數(shù)為10-3，此時細菌在有機磷篩選培養(yǎng)基上的生長狀況如圖1(a)所示，單皿菌落數(shù)在30～300個且單菌落間較好分離，同時出現(xiàn)較為明顯的溶磷圈。將出現(xiàn)溶磷圈的單菌落進行純化培養(yǎng)，得到10株解磷菌，分別命名為蘋果樹解磷菌1-10(Phosphate-solubilizing bacteria fromMalusxiaojinensis1-10，簡稱PsbM1-10)。

(a)稀釋倍數(shù)為 10-3 的篩選培養(yǎng)基 Selection medium with a dilution factor of 10-3(b)不同解磷菌的解磷能力對比 Comparison of phosphorus removal ability of different phosphorus removal bacteria圖1 篩選解磷菌的培養(yǎng)基及不同解磷菌解磷能力的對比Fig.1 Comparison of medium for screening phosphate-solubilizing bacteria and the phosphate-solubilizing capacity of different phosphate-solubilizing bacteria

2.2 解磷菌的生理生化特性

對篩選獲得的10株解磷菌進行細菌基本理化性質的測定，包含革蘭氏染色、甲基紅、過氧化氫、淀粉水解和明膠水解試驗等。細菌按特征可為革蘭氏陽性和陰性菌兩大類，根據(jù)染色性質可以縮小鑒定范圍，有利于進一步分離和判斷，檢測發(fā)現(xiàn)所有篩出的10株解磷菌均為革蘭氏陰性菌，且通過甲基紅試驗驗證均不可代謝糖產酸。過氧化氫試驗發(fā)現(xiàn)PsbM4和PsbM9具有過氧化氫酶活性，使得滴加3%過氧化氫溶液5 min后仍能產生氣體。PsbM4和PsbM10被發(fā)現(xiàn)可產生淀粉水解酶，可以水解淀粉使碘液和淀粉無法形成藍紫色物質。PsbM1、PsbM4、PsbM5和PsbM9可產生明膠酶分解明膠，使明膠液化。

(a)過氧化氫試驗 H2O2 test； (b)淀粉水解試驗 Starch hydrolysis test； (c)明膠試驗 Gelatin test圖2 3種生理生化指標的測定Fig.2 Determination of three physiological and biochemical indexes

2.3 解磷菌的解磷能力

研究中常用溶磷圈直徑(D)和菌落直徑(d)的比例關系來代表解磷菌的解磷能力，因此本研究利用蒙金娜有機磷固體培養(yǎng)基測定純化的10株解磷菌的這2個指標初步測定10株解磷菌的解磷能力，結果顯示：10株解磷菌的可溶性指數(shù)>1.50，不同菌株之間存在差異，其中PsbM6的可溶性指數(shù)最大(為5.13)，其次是PsbM7、PsbM8和PsbM10(分別為3.53、3.42和3.18)，可溶性指數(shù)最小的為PsbM1(表3)。

通過鉬銻抗顯色法對10株解磷菌的解磷能力進行定量分析，結果表明PsbM10的解磷能力最強，培養(yǎng)24 h后溶液的無機磷濃度達到104.125 mg/L，其次為PsbM4和PsbM8。由于解磷菌在礦化有機磷的同時會降低溶液pH，因此溶液pH的變化也在一定程度說明菌株的解磷能力高低。測定發(fā)現(xiàn)10株解磷菌使pH降低的程度有所不同，其中PsbM8 和PsbM6下降幅度最低。

表2 10株解磷菌的理化特性Table 2 Physicochemical characteristic of 10 strains of phosphatolytic bacteria

表3 解磷菌溶磷圈和菌落直徑比值Table 3 Disolving phosphate zone diameter to culture community zone diameter ofphosphate-solubilizing bacteria

不同小寫字母表示處理間差異達顯著水平(P<0.05)。下同。The different lower case letters indicate significant difference among the treatments(P<0.05). The same below.圖3 從小金海棠蘋果砧木根際分離的10株解磷菌的解磷量及菌液pHFig.3 Phosphorus solubility and pH value of the bacteria solution of 10 strains isolated from rhizosphere of apple stock Malus xiaojinensis

2.4 解磷菌的酸性磷酸酶活性

有學者[28]認為，細菌分泌酸性磷酸酶的活性與解磷菌的解磷能力有關，因此本研究對這10株解磷菌進行酸性磷酸酶活性的定性和定量的檢測。在產生溶磷圈的蒙金娜有機磷培養(yǎng)基平板上滴加1 mLpNPP，覆蓋溶磷圈，10株解磷菌均有黃色產生(圖4(a)和(b))，說明這些解磷菌都能夠分泌酸性磷酸酶。同時定量檢測解磷菌的酸性磷酸酶活性(圖4(c))，發(fā)現(xiàn)菌株PsbM4的酸性磷酸酶活性最高，達到44.24 μg/(mL·h)(pNPP)，菌株PsbM3的酸性磷酸酶活性次之，為22.63 μg/(mL·h)(pNPP)。

(a)解磷菌未進行磷酸酶顯色反應前； (b)解磷菌進行磷酸酶顯色反應后； (c)10株解磷菌的磷酸酶活性(a) Phospholytic bacteria before phosphatase chromogenic reaction; (b) Phospholytic bacteria after phosphatase chromogenic reaction; (c) Phosphatase activity of 10 strains of phosphatolytic bacteria圖4 解磷菌酸性磷酸酶顯色反應和10株解磷菌的酸性磷酸酶活性Fig.4 Phosphatase chromogenic reaction and phosphatase activity of 10 phosphatase producing strains

2.5 解磷菌的生長曲線

為了對菌種進行更好的應用，需要篩選出能夠快速增殖的株系。通過對解磷菌生長曲線擬合發(fā)現(xiàn)，多數(shù)解磷菌生長迅速，在2 h內即進入對數(shù)期，12 h后進入穩(wěn)定期，但菌株之間的生長繁殖能力存在一定差異(圖5)。特別是PsbM4，其在培養(yǎng)過程中滯后期較長，在6 h后進入對數(shù)期，20 h進入穩(wěn)定期，繁殖速度較慢。

2.6 優(yōu)勢解磷菌的篩選及菌株鑒定

對解磷菌株的16S rDNA進行測序，經基因序列比對分析構建系統(tǒng)進化樹(圖6)， 發(fā)現(xiàn)10個菌株可以歸為3個主要的菌屬(Acinetobacter、Enterobacter和Pseudomonas)中。在解磷優(yōu)勢菌的篩選中，以各菌株的解磷能力和酸性磷酸酶的活性為主要篩選標準。根據(jù)前面的試驗結果可知，PsbM4的解磷能力僅次于PsbM10且其酸性磷酸酶的活性明顯高于其他菌株，所以本研究重點關注PsbM4。通過 BLAST比對并使用 MEGA7 軟件構建進化樹，PsbM4顯示與腸桿菌屬成員EnterobactercloacaeMG274270.1具有最高同源性。隨后，將其作為優(yōu)勢解磷菌株進行研究。

2.7 菌株回接擬南芥結果

為了驗證PsbM4是否有利于植物的生長，將菌株回接到擬南芥根系周圍。挑PsbM4單菌落至LB培養(yǎng)基，在180 r/min 37 ℃培養(yǎng)24 h后用無菌水調整細菌的OD600為1.0，在每盤培養(yǎng)基中加入20 μL的菌液且用涂布器推開。將擬南芥分別移栽至MS、缺磷和缺磷加菌3組培養(yǎng)基中，6 d后進行拍照并進行根系pH顯色。

從圖7(c)可以看出，缺磷加解磷菌培養(yǎng)基中擬南芥的根系周圍有明顯的解磷圈出現(xiàn)， 這說明培養(yǎng)基中的部分植酸鈣被解磷菌分解；而且相比于缺磷培養(yǎng)基(圖7(b)所示)，加菌培養(yǎng)基的植株更大且葉片更綠。同時，將擬南芥根系用去離子水清洗3次，用吸水紙將根系表面水分吸干，將根系進行pH顯色發(fā)現(xiàn)，若有黃色出現(xiàn)說明根系分泌出酸性物質。如圖7(c)所示，缺磷加菌培養(yǎng)基擬南芥根系周圍有黃色出現(xiàn)，這說明其根系分泌出酸性物質，而如圖7(a)和(b)所示，缺磷培養(yǎng)基和MS培養(yǎng)基并無顏色變化。

圖5 從蘋果砧木小金海棠分離的 10 株解磷菌的生長曲線Fig.5 Growth curve of 10 phosphate-degrading bacteria isolated from apple stock Malus xiaojinensis

圖6 從小金海棠蘋果砧木根際分離的10株解磷菌16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.6 Phylogenetic tree of estbliashed based on 16S rDNA sequences of 10 phosphatolytic bacteria isolated from apple stock Malus xiaojinensis

(A)和(a) MS培養(yǎng)基; (B)和(b)缺磷培養(yǎng)基; (C)和(c)缺磷加解磷菌培養(yǎng)基(A) and (a) MS medium; (B) and (b) phosphorus deficient medium; (C) and (c) phosphorus-deficient admixture medium for phosphorus-deficient bacteria圖7 各處理組擬南芥的表型及pH顯色情況Fig.7 Phenotype and pH color development of Arabidopsis thaliana in each treatment group

3 討 論

隨著種植業(yè)結構的調整，人們對園藝產品的需求在不斷增加，相應的，園藝產品對土壤中營養(yǎng)元素的需求也在不斷增加，致使全國耕地土壤速效磷含量逐年下降。在土壤磷循環(huán)過程中，解磷微生物起著重要的作用。目前，對于解磷細菌篩選的研究主要集中在大田作物，對于果樹根際解磷菌的報道還很少。根際土壤解磷菌在土壤中的數(shù)量及生態(tài)分布主要受宿主植物基因型、土壤類型和耕作方式等因素影響[29]。大田作物根際解磷菌多為芽孢桿菌屬和假單胞菌屬，而Zaffar等[30]通過研究發(fā)現(xiàn)蘋果根際土壤中存在大量的芽孢桿菌屬、假單胞菌屬和微球菌屬。對解磷菌解磷能力的相關研究表明，其解磷能力的大小主要是由菌株自身的特性所決定的，有學者認為解磷能力與菌株分泌的蘋果酸和草酸相關[31-32]，還有學者認為磷酸酶對解磷菌的解磷效果有重要影響[33]，磷酸酶活性越高，解磷能力越強。

在本研究中選擇的原產我國對磷具有高效吸收特性的蘋果砧木小金海棠，篩選到具有礦化有機磷的根際解磷菌主要為不動桿菌屬、腸桿菌屬和假單胞菌屬，這說明根際土壤解磷菌的種群類型與宿主基因型確實有一定的關系，與前人研究相符。運用溶磷圈法和鉬銻抗比色法對10 株解磷菌的解磷能力及酸性磷酸酶活性進行綜合測定后發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)后的菌液上清液的pH均比初始pH低，這極有可能是解磷菌在解磷的過程中產生了酸性磷酸酶等物質，礦化了培養(yǎng)基中的植酸鈣產生無機磷，從而引起了pH的下降。綜合分析10株解磷菌的溶磷圈大小、解磷能力和酸性磷酸酶活性，發(fā)現(xiàn)PsbM4體現(xiàn)了較高的解磷能力和酸性磷酸酶活性，因此將它作為篩選到的優(yōu)勢候選菌株，將其回接到擬南芥中，發(fā)現(xiàn)解磷菌能促進擬南芥生長，解磷菌同時影響了擬南芥的根際pH，導致擬南芥的根際pH下降，這可能是由于解磷菌分泌的酸性磷酸酶導致的結果，與測定解磷菌能力時菌液pH下降的結果相同。

未來會將解磷菌進一步回接到蘋果苗并探究解磷菌的促吸磷機制，由于從蘋果砧木小金海棠中分離篩選出的解磷菌，與蘋果根系互作性較好，對土壤環(huán)境的適應性也更強，對于開發(fā)解磷菌肥將具有一定意義。