昂格力瑪 水 玲 伊茹娜 斯 琴 陳英松

內蒙古自治區(qū)呼和浩特市土默特左旗內蒙古醫(yī)科大學金山校區(qū)，內蒙古 呼和浩特 010100

類風濕性關節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是一種慢性自身免疫性疾病,伴隨著復雜的炎癥介質導致關節(jié)的損害、滑膜炎癥、軟骨和骨的損壞,導致人類和動物嚴重的機體功能障礙[1]。目前研究表明免疫學指標的檢測對于類風濕關節(jié)炎的價值較高，能夠較好地輔助已有的實驗室診斷[2]。風濕性關節(jié)炎屬蒙醫(yī)“協(xié)日烏素病”范疇，蒙醫(yī)稱關節(jié)“協(xié)日烏素病”。蒙醫(yī)學認為飲食起居不當、長時間在寒濕環(huán)境中生活、氣候過于寒涼、陰雨連綿、感染引起的一種罕見病，起病緩慢，病程較長，易于復發(fā)，難于控制的一種慢性關節(jié)疾病[3]。臨床實驗顯示，動物實驗顯示，蒙醫(yī)五味甘露對風濕性關節(jié)炎的治療有一定的療效。蒙醫(yī)五味甘露浴具有較好地免疫調節(jié)作用[4],具有較好的抗炎、鎮(zhèn)痛作用[5]。蒙醫(yī)五味甘露浴是蒙古族特色療法之一，由小白蒿、水柏枝、麻黃、杜鵑葉、刺柏等5種藥物組成。直接從體外給溫熱刺激，以達到治療疾病的目的。浴具有悠久的歷史，資源豐富，療效明顯，副作用小等特點[6]。佐劑性關節(jié)炎模型的研究日漸增多，其抗氧化和抗炎作用受到廣泛關注。蒙醫(yī)五味甘露浴劑，具有舒筋散結、通絡止痛、益氣補腎、祛燥黃水等功效。臨床上主要治療四肢僵直或拘攣，關節(jié)腫痛、肌肉萎縮等“黃水”疾病。方中刺柏葉味甘、澀、性涼、輕、鈍，用以清腎熱，燥黃水；水柏芝味甘，性涼、鈍、重、固，以清熱，斂毒、祛黃水、清肉毒；小白蒿味苦，性涼、鈍、澀、燥，有通活血脈、祛燥黃水、活血化瘀、益腎壯腰等功效。麻黃味苦、澀，性涼、鈍、輕、澀、燥，有清熱，除血蟲，破痞消腫，發(fā)汗止痛[7]之效；照白山味甘、苦、澀，性溫、輕、大毒，有祛巴達干，祛痰等功效。

本實驗采用CFA (完全弗氏佐劑)誘導的佐劑性關節(jié)炎(adjuvant arthritis, AA)模型大鼠。觀察治療前后大鼠肝臟GSH、GSH-Px、SOD活性及MDA含量的變化，探討蒙醫(yī)五味甘露浴的抗氧化，疏通氣血作用。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器 蒙醫(yī)五味甘露浴劑(批號:720121110，內蒙古自治區(qū)蒙中醫(yī)醫(yī)院中心制劑室提供)；完全弗氏佐劑(CFA，Sigma公司提供)；GSH(谷胱甘肽)，GSH-Px(谷胱甘肽過氧化物酶)，SOD(超氧化物歧化酶)，MDA(丙二醛),ELISA檢測試劑盒，北京新亞太生物科技有限公司提供，批號分別為DZE30786，DZE30787，DZE30267，DZE30266；

80-2式離心機：金壇市化城敏科實驗儀器廠；全自動多功能酶標儀： MULTISKAN MK3，Thermo，USA；電熱恒溫培養(yǎng)箱：DH4000A，天津泰斯特；MINI shaker：MH-1， kylin-Bell Lab Instruments QILINBEIER。

1.2 實驗動物 取7周齡，清潔級雄性SD大鼠[SCxK(軍)2012-0004]30只，體重180～200 g，由北京實驗動物科技有限公司提供，在黑暗與光明周期為12 h，溫度為(24±2)℃的環(huán)境，自由飲食水進行3 d適應性飼養(yǎng)。

1.3 分組與造模 將30只SD大鼠，隨機分為空白組、模型組、蒙醫(yī)五味甘露浴組，每組10只。對模型組，蒙醫(yī)五味甘露浴組大鼠進行造模。無菌條件下在大鼠右后足趾注射0.1 mL的CFA (內含0.1℅滅活結核桿菌) 致炎，空白組注射同劑量的0.9%的生理鹽水，之后針眼處涂抹紫藥水[6]。

1.4 治療方案 空白組在第3天開始進行溫水浴對照，1次/d，30 min/次，連續(xù)治療15 d，藥浴方法為在50 cm×30 cm×20 cm的半透明塑料容器中加入溫度為(25±2)℃的清潔飲用水1000 mL，將大鼠的四肢和尾部浸泡在溫水中，治療結束后用清潔毛巾擦拭干凈后放入鼠籠中。

模型組在造模之后的浴療方法同空白組。

蒙醫(yī)五味甘露浴組在造模后第3天開始進行五味甘露浴治療，藥浴濃度為33.4%，1次/d，30 min/次，連續(xù)治療15 d，藥浴方法同空白組，藥浴溫度為(40±2) ℃。

1.5 取材 末次治療后24 h，用戊巴比妥鈉腹腔麻醉大鼠，切開腹腔取下完整肝臟并稱重后置于凍存管，用液氮快速冷凍，放入-80 ℃冰箱保存待測。

1.6 檢測方法 采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測大鼠肝臟GSH，GSH-Px，SOD活性及MDA含量。

2 結果

2.1 各組大鼠肝勻漿MDA含量和SOD、OGSH-Px、GSH活性的影響。

與正常組相比，模型組SOD、GSH、GSH-Px的活性明顯下降(P<0.05)，MDA的含量明顯增加(P<0.05)。五味組與模型組相比蒙醫(yī)五味甘露浴組SOD、GSH、GSH-Px的活性明顯升高(P<0.05)，MDA的含量明顯減少(P<0.05)。見表1，如圖1所示。

圖1 A表示各組SOD活性的比較；B表示各組MDA含量的比較； C表示各組GSH活性的比較；D表示GSH-Px活性的比較

表1 各組大鼠肝臟SOD、GSH、GSH-Px活性，MDA含量的比較

2.2 各組大鼠肝指數變化 與空白組比較，模型組大鼠活動減少、體重減輕，肝臟指數明顯增加(P<0.05)，且隨著造模時間的延長，模型組大鼠炎癥的加重，表現為原發(fā)側足趾腫脹進行性加重，且出現漸進性的繼發(fā)性足腫脹和前足腫脹，逐漸行動不便、站立不穩(wěn)，肝臟指數逐漸增加。與模型組比較，五位組大鼠肝臟指數明顯降低(P<0．05)。如圖2所示。

圖2 各組肝臟指數的比較

3 討論

蒙醫(yī)五味甘露浴是蒙古族特色療法之一，由小白蒿、水柏枝、麻黃、杜鵑葉、刺柏等5種藥物組成。直接從體外給溫熱刺激，以達到治療疾病的目的。浴具有悠久的歷史，資源豐富，療效明顯，副作用小等特點[7]。佐劑性關節(jié)炎模型的研究日漸增多，其抗氧化和抗炎作用受到廣泛關注。蒙醫(yī)五味甘露浴劑，具有舒筋散結、通絡止痛、益氣補腎、祛燥黃水等功效。臨床上主要治療四肢僵直或拘攣，關節(jié)腫痛、肌肉萎縮等“黃水”疾病。方中刺柏葉味甘、澀、性涼、輕、鈍，用以清腎熱，燥黃水；水柏芝味甘，性涼、鈍、重、固，以清熱，斂毒、祛黃水、清肉毒；小白蒿味苦，性涼、鈍、澀、燥，以通活血脈、祛燥黃水、活血化瘀、益腎壯腰等功效。麻黃味苦、澀，性涼、鈍、輕、澀、燥，以清熱，除血蟲，破痞消腫，發(fā)汗止痛[8]；照白山味甘、苦、澀，性溫、輕、大毒。以祛巴達干，祛痰等功效。

肝臟是機體物質代謝的重要器官，其中的自由基代謝及抗氧化酶變化較為明顯。SOD是保護肝臟所必需的蛋白質，對預防、修復氧化應激引起肝損傷中具有重要的作用，也是體內重要的防御自由基毒害的抗氧化酶，分解過氧化氫和脂質過氧化物，阻斷脂質過氧化反應，保護細胞免受傷。有文獻顯示RA患者體內SOD含量低于正常人，SOD和MDA是相互對立的氧自由基相關因子，當體內SOD含量偏低時，不能防御自由基，分解不了過氧化氫和脂質過氧化物，不能阻斷脂質過氧化反應，因此MDA會增加。MDA是脂質過氧化的代謝產物，是造成細胞膜損傷的物質基礎，其含量可以反映機體內脂質過氧化的程度，間接反映自由基對細胞的損傷程度。MDA增多會引起生命大分子蛋白質、核酸等發(fā)生交聯(lián)聚合，故有細胞毒性。GSH是一種低分子清除劑，其量的多少是衡量機體抗氧化能力大小的重要因素。GSH含量增多會引起體內過量的氧自由基造成肝細胞膜脂質的過氧化，損傷抗氧化酶。GSH-Px是體內催化過氧化氫分解的重要的酶，它特意催化GSH對過氧化氫的還原反應，可以起到保護細胞膜結構和功能完整的作用[9]，GSH-Px水平的高低反映著機體抗氧化能力，GSH-Px水平下降表明機體抗氧化能力的下降，導致機體自由基生成大量增加。

本實驗中，AA模型組大鼠肝臟GSH、GSH-Px和SOD活性顯著降低，而MDA的濃度增加，說明AA模型組大鼠肝臟組織中存在氧化應激作用。過量的氧自由基造成肝細胞膜脂質的過氧化，損傷抗氧化酶，引起GSH、GSH-Px和SOD的催化作用降低甚至失活。還有研究發(fā)現RA患者抗氧化能力下降，在急性和慢性炎癥RA患者滑膜液內O2的增長超過了SOD的清除能力，且SOD水平低于正常人，同時脂質過氧化損傷增加。大量產生的自由基促進軟骨的破壞，加重RA關節(jié)損傷。

與空白組比，模型組肝臟指數明顯增長，與模型組比，五味組肝臟指數明顯下降，但沒有統(tǒng)計學意義。具體原因還有待進一步研究。

本實驗結果表明蒙醫(yī)五味甘露浴具有抗氧化作用，能提高AA體內降低的抗氧化能力，減輕細胞的過氧化損傷，同時能保護好AA大鼠軟骨。實驗結果提示蒙醫(yī)五味甘露浴對AA大鼠有抗氧化作用和對其關節(jié)有保護作用。