宋玉桂 付英杰

(濟寧醫(yī)學院藥學院，日照 276826)

口腔潰瘍是一種發(fā)病率較高、易反復發(fā)作的口腔疾病。其病因復雜，多為細菌或病毒感染，可發(fā)于口腔黏膜的任何部位，如唇、頰、舌緣等[1]。該病的特征為周期性、復發(fā)性及自限性等，起病時有強烈疼痛感，影響進食和說話，給患者帶來極大的痛苦和不便，尤其是在遇酸、咸、辣的情況下，疼痛感加重[2]。目前該病的治療方法及治療藥物的種類也復雜多樣，其中中藥治療是一種較為普遍的方法，常見的中成藥有傳統(tǒng)散劑石膏散、青黛散、西瓜霜、冰硼散，以及其他劑型口炎清顆粒、牛黃清胃丸、牛黃解毒片等[3-4]。

本研究選擇名老中醫(yī)宋文山臨床驗方，以清熱藥青黛、兒茶、硼砂、冰片、風化硝、人中白和甘草為處方組成，其中兩味君藥分別是具有清熱解毒功效的青黛，常與冰片配伍，以及具有收濕斂瘡功效的兒茶，常與硼砂配伍[5]，均為治療口腔潰瘍的藥對。方中去除了傳統(tǒng)散劑中常用的朱砂、輕粉等重金屬礦物藥，加入善治牙疳的人中白及緩急止痛的甘草等，使組方更加安全可靠；原方為散劑，為解決散劑入口之后容易順著唾液流入咽喉等問題，減輕局部癥狀、促進潰瘍愈合，因此，將其制備為具備分散性好、黏附力強、穩(wěn)定性好、給藥部位局部濃度高等特點的生物黏附凝膠劑，可充分體現(xiàn)中藥傳統(tǒng)與現(xiàn)代技術結合的優(yōu)勢。

1 材料

1.1 儀器

XP204型天平(云南紫真科技有限公司)；UV754N紫外可見分光光度計(上海精密科學儀器有限公司)；TDP-5型壓片機(廣州旭朗機械設備有限公司)；YD-1片劑硬度測試儀(天津創(chuàng)興電子設備制造有限公司)；CS-1脆碎度測試儀(天津市國銘醫(yī)藥設備有限公司)；BJ-4D型崩解儀(南京沃拓儀器設備有限公司)；RC1208D溶出試驗儀(上海巴玖實業(yè)有限公司)；SHK-III-S循環(huán)水式多用真空泵(鄭州科泰實驗設備有限公司)。

1.2 試劑與試藥

明膠(天津市廣成化學試劑有限公司，批號：20160315)；黃原膠(化學純，上海埃彼化學試劑有限公司，批號：20171009)；阿拉伯膠(藥用級，天津市大茂化學試劑廠)；羥乙基纖維素(HEC，藥用級，青島優(yōu)索化學科技有限公司)；羧甲基纖維素鈉(CMC,分析純，天津市巴斯夫化工有限公司)；羥丙基甲基纖維素(HPMC，藥用級，杭州普修生物科技有限公司)；低取代羥丙基纖維素(L-HPC,藥用級，杭州普修生物科技有限公司)；聚乙二醇(PEG6000，天津市永大化學試劑有限公司)；卡波姆(青島優(yōu)索化學科技有限公司)；硬脂酸鎂(化學純，天津市巴斯夫化工有限公司)。

青黛、兒茶、玄明粉、冰片、硼砂、人中白、甘草均購于北京同仁堂日照藥店；兒茶素標準品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110877-201604)；靛藍標準品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110716-201612)。

2 方法

2.1 各藥材及輔料處理

冰片、青黛、兒茶、玄明粉分別經(jīng)乳缽研細，過80目篩；人中白、硼砂水飛后干燥；甘草先用粉碎機粗粉，再用70%乙醇冷浸甘草粗粉24h，70℃回流提取2h，連續(xù)回流提取2次后，提取物蒸干得甘草干浸膏[6]，粉碎研細，過80目篩。

阿拉伯膠等生物黏附材料分別經(jīng)乳缽研細，過80目篩、備用。

2.2 處方篩選及制備工藝

按照處方組成分別稱取經(jīng)處理后藥材粉末(青黛20g、兒茶15g、硼砂15g、冰片5g、玄明粉10g、人中白25g、甘草浸膏3g)，等量遞加、混合均勻，作為主藥。按設計處方分別稱取主藥、黏附材料、硬脂酸鎂適量，等量遞加、過篩、混合均勻后，采用粉末直接壓片工藝，選擇φ8mm淺凹沖頭、片重150mg、硬度(60±5)N，進行壓片。

2.3 體外黏附時間和崩解時限的測定

按上述壓片工藝，取含有不同黏附材料的自制片劑各5片，分別貼放于50ml燒杯的側壁上，吸取適量的人工唾液(磷酸二氫鉀：0.19g；磷酸氫二鈉：2.38g；氯化鈉：0.8g；蒸餾水:1000mL)[7-8]，滴于藥片周圍，自然吸附5min；再加適量的37℃人工唾液至完全浸沒藥片，并置其于37℃恒溫水浴中，觀察藥片的脫落情況，記錄體外黏附時間；觀察藥片的崩解程度，記錄溶解程度及完全崩解所需的時間。

2.4 君藥(青黛和兒茶)的含量及含量均勻度的測定

參考《中國藥典》2015版四部[9]，通則<0931>所規(guī)定的檢查方法及標準進行測定：取藥片于一定量人工唾液的燒杯中并置其于37℃的恒溫水浴中，至藥片完全崩解時，對其進行取樣、過濾，續(xù)濾液采用紫外分光光度法[10-11]分別對君藥青黛和兒茶中靛藍及兒茶素的含量進行測定。最后測定含量均勻度：按照最大載藥量的配比，取重量為0.15g的藥片10片，分別測定每一片以標示量為100的相對含量Xi，求其均值U、標準差S以及標示量與均值之差的絕對值A。

2.5 釋放性能和累積釋放度曲線的測定

釋放性能采用凡士林基質(zhì)測定法[12-13]：將凡士林溶化后，裝入刻度試管中，待其冷凝后，在其表面各貼一片貼片，分別在貼藥后1、2、3、4、5、6h取下藥片，刮取凡士林，根據(jù)青黛固有顏色，計算藥物擴散距離。并將刮取的凡士林加水浸提，用2.4項下方法測定其中靛藍及兒茶素的含量，繪制累積釋放度曲線。

3 結果

3.1 黏附材料的篩選

根據(jù)文獻[14]及預實驗，主藥、生物黏附材料、硬脂酸鎂比為10∶40∶0.25，分別配制混粉50.25g，測定休止角，并壓片。PEG、HEC、卡波姆的休止角θ>40°，無法滿足生產(chǎn)過程中的流動性需求且有粘沖現(xiàn)象；而含明膠的片劑，口感差，難以接受長時間在口腔中停留。因此，黏附材料可選取阿拉伯膠、CMC、黃原膠、HPMC、L-HPC 5種輔料進行壓片。見表1。

表1 主藥與不同輔料混合后休止角測定結果

3.2 體外黏附時間、崩解時限測定結果

采用不同生物黏附材料、相應設計處方制備得到的片劑，測定體外黏附時間和崩解時限等。由于黏附材料HPMC和L-HPC黏附時間太短、黏附力太低，無法達到規(guī)定黏附時間。因此，選取黃原膠、阿拉伯膠、CMC 3種材料，按照不同處方進一步壓片，結果見表3。從黏附時間、溶解程度及崩解時限3個方面綜合考慮，優(yōu)選的生物黏附材料為阿拉伯膠，且主藥/輔料比為1∶3。見表2、3。

表2 自制片體外平均黏附時間測定結果

表3 自制片黏附時間、崩解時限測定結果(n=3)

3.3 片劑制備

由于硬脂酸鎂加入過多易造成崩解遲緩，而本處方的崩解時間已經(jīng)非常長，因此僅使用最低量的硬脂酸鎂作為潤滑劑，即0.3%。以阿拉伯膠為黏附材料優(yōu)化后處方制備片劑，優(yōu)化后的處方組成為主藥∶阿拉伯膠∶硬脂酸鎂(10∶30∶0.12)。壓片后測得片劑的硬度、脆碎度、含量均勻度等指標，各指標均滿足質(zhì)量要求。見表4。

表4 優(yōu)化后自制片硬度等測定結果(n=3)

3.4 標準曲線及含量等測定結果

靛藍的最大吸收波長為610nm，標準曲線為A=107C+0.109，r=0.9998；兒茶素最大吸收波長為280nm，標準曲線A=104C+0.12，r=0.9996，對照品溶液的吸光度和濃度呈現(xiàn)良好線性關系。依據(jù)標準曲線分別測定原藥材中(即青黛、兒茶)和自制片劑中兒茶素和靛藍的含量，并計算含量均勻度。見表5。

表5 君藥中有效成分含量、含量均勻度測定結果(n=10)

注：藥片的含量均勻度滿足A+2.2S≤15的關系，藥片的含量均勻度符合藥典規(guī)定

3.5 釋放性能測定結果

片劑具有較好的藥物釋放性能,并具有緩釋作用。見表6。

表6 片劑釋放性能測定結果(n=3)

3.6 釋藥曲線測定結果

采用黏附材料阿拉伯膠制備的片劑，體外釋藥曲線平緩，無突釋，樣品(n=3)在2、6h的釋放量為標示量的30%以上、60% 以上，符合緩釋制劑的基本要求。釋放數(shù)據(jù)用SPSS19.0對其進行釋放方程的擬合，釋放方程選用Higuchi方程、一級方程、零級方程、Ritger-peppas方程。最終結果顯示采用Ritger-peppas方程擬合相關系數(shù)最高，方程為：Q=13.834t1.0886，r=0.9981(Q為t時間的兒茶素累計釋放率);Q=12.988t1.1223，r=0.9973(Q為t時間的靛藍累計釋放率)；相關性顯著，釋放參數(shù)n>0.89，片劑主要以骨架溶蝕機制進行釋放。見圖1。

圖1 自制片劑l～6h釋藥曲線的測定

4 結論

黏附材料PEG、HEC、卡波姆無法滿足生產(chǎn)過程中的流動性需求而被篩除；黏附劑明膠由于味臭而被篩除；黏附劑HPMC和L-HPC黏附力太低而被篩除。

最終確定優(yōu)化處方及制備工藝為，原料：青黛20g、兒茶15g、硼砂15g、冰片5g、風化硝10g、人中白25g;輔料：阿拉伯膠270g;潤滑劑：硬脂酸鎂1.0g。采用等量倍增法混合均勻，采用粉末直接壓片法在60N的壓力下壓制成直徑為8mm、厚度為3mm、重為0.15g的圓片，加上藥料的損耗，共壓制2200片。處方與制備工藝的確定，為以后黛茶貼片的進一步優(yōu)化提供了基礎。

自制片劑的黏附力強，體外黏附時間達720min以上；體外累積溶出時間達6h，呈現(xiàn)出緩釋效果，其中兩味君藥的主要成分兒茶素和靛藍的釋放參數(shù)n均大于0.89，表明片劑主要以骨架溶蝕機制進行釋放，達到了延長給藥時間的目的。