王 玨，何恩潔，尹兆正，陳玉銀＊

（1.浙江大學 動物科學學院，浙江 杭州 310058； 2.浙江省農(nóng)業(yè)技術推廣中心，浙江 杭州 310020）

家禽免疫問題一直以來是家禽養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的熱點問題[1]。免疫性疾病的頻發(fā)和難治導致經(jīng)濟利潤的降低，且頻繁注射疫苗不僅耗費巨大，對蛋雞本身的健康和產(chǎn)蛋性能也十分不利，通過在飼料中添加營養(yǎng)成分的方式來提高家禽自身免疫力，變得尤為重要?？咕氖墙陙韲鴥?nèi)外的研究熱點，在生物體的天然免疫中發(fā)揮著至關重要的功能。抗菌肽主要來源于昆蟲，動物，微生物及人工合成[2]，但到目前為止，即使用最新的化學合成或基因工程技術等方法都尚未達到產(chǎn)業(yè)化的規(guī)模，極大的限制了抗菌肽作為飼料添加劑在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中的應用。

家蠶自古以來吐絲作繭其蠶絲為人類所利用。但近來年隨著家蠶品種多元化選育的進步，一批非蠶絲生產(chǎn)為目的的家蠶新品種相繼育成，作為非蠶絲生產(chǎn)為目的家蠶研究也有較多報道。家蠶的營養(yǎng)成分主要為蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖類、維生素、無機鹽和水分[3]等。家蠶幼蟲含有各種必需氨基酸，是極易被吸收的全價蛋白質(zhì)[4]，蠶體加工后的純蠶粉一直被人類作為保健品來使用，對穩(wěn)定血液的膽固醇有良好的作用，被認為是優(yōu)質(zhì)蛋白源。天然彩色繭家蠶除了富含家蠶所有的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等，身體中還含有豐富的功能性物質(zhì)[5]，如葉黃素素、類胡蘿卜素以及黃酮類的含量遠高于普通家蠶。黃酮類色素是一類水溶性酚類物質(zhì)，研究表明黃酮類色素可與內(nèi)膜脂質(zhì)過氧化自由基和超氧化物發(fā)生反應，從而可切斷生物體內(nèi)衰老和疾病有關的脂質(zhì)過氧化連鎖反應，因此具有抗衰老、抗氧化、預防心血管疾病幾抗癌防癌等作用[6]。有研究發(fā)現(xiàn)這些功能性物質(zhì)還具有良好抑菌作用，對黃色葡萄糖球菌、綠膿菌、大腸桿菌等都有一定程度的抑制作用。家蠶本身所含有的天然抗菌類物質(zhì)，如：抗菌肽、抗真菌肽、溶菌酶等具有殺滅細菌真菌等微生物的功效[7]，用于養(yǎng)殖業(yè)，可以減少抗生素的使用，提高家禽的健康水平[8]。據(jù)報道家蠶在逆境下輻射、饑餓等都會誘導產(chǎn)生較多的抗菌肽，且饑餓誘導的效果尤為顯著[9]。因此活蠶作為養(yǎng)殖雞的動物性飼料添加，不僅可以提供優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)，還可以提高家禽自身免疫力[10]，并且綠色環(huán)保。

已有研究報道，在動物日糧中添加抗菌肽能夠改善其腸道菌群結構，提高腸道健康水平，對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和動物機體的免疫功能提高都具有較好的提高效果。家蠶的抗菌肽可以有效的預防真菌細菌和病毒引起的疾病，如雛雞的大腸桿菌感染、提高家禽的生產(chǎn)性能、改善血液生理生化指標、調(diào)節(jié)家禽的免疫健康[11]。但目前尚沒有對家禽食用活蠶添加飼料后的生產(chǎn)性能及免疫功能變化的報道，本試驗應用天然彩色繭的混合品種并進行饑餓誘導抗菌肽處理，以活蠶飼喂為實驗組，對蛋雞的生產(chǎn)性能，雞蛋品質(zhì)，以及蛋雞的生化指標[12]進行了初步的探索，以期為活飼料蠶飼喂蛋雞提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗用4齡眠起的活蠶，由浙江大學動物科學學院家蠶育種實驗室提供，將紅黃綠系列家蠶雜交種混合后一起飼養(yǎng)，按照家蠶雜交種普通飼養(yǎng)要求用桑葉飼養(yǎng)至4齡起蠶餉食后每d按試驗需求將405條蠶取出，饑餓24 h后喂桑葉，食桑6 h后喂蛋雞。

1.2 試驗設計與試驗飼糧

采用單因子試驗設計，選取健康的65周齡產(chǎn)蛋率和體重相近的海蘭白蛋雞270只，隨機分成2組：實驗組和對照組，每組設3個重復，每個重復為45只雞。對照組按標準飼喂基礎飼糧，試驗組在基礎飼糧上每日每只雞添加四齡活蠶3條（中午一次性飼喂）。試驗參照《雞飼養(yǎng)標準》（NY/T 33-2004）[13]并結合海蘭褐產(chǎn)蛋雞飼養(yǎng)手冊配制玉米-豆粕型基礎飼糧，飼料組分及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗用雞舍：半開放式3層立體階梯式雞籠，每個籠子（40 cm×37 cm×40 cm）飼養(yǎng)3只蛋雞。保證每天光照時間為16 h，早晚補光，室內(nèi)光照強度20 lx，相對濕度在50%～80%區(qū)間，橫向負壓通風和自然通風組合使用。專人管理，蛋雞自由采食和飲水；每天撿蛋2次，每周清理雞糞1次并進行帶雞消毒。

1.4 測定指標及方法

1.4.1 生產(chǎn)性能

試驗期間，以重復為單位每天記錄產(chǎn)蛋量、產(chǎn)蛋數(shù)，并計算每周的產(chǎn)蛋數(shù)、產(chǎn)蛋重和日均蛋重。

1.4.2 雞蛋品質(zhì)測定

在試驗結束的第5周末取雞蛋樣本，每個重復隨機抽取3枚雞蛋，蛋形指數(shù)采用日本富士坪公司生產(chǎn)的蛋形指數(shù)測定儀進行測定；雞蛋蛋白高度、哈氏單位和蛋黃顏色使用SONOVA蛋品質(zhì)自動分析儀進行測定；蛋殼強度用蛋殼強度分析儀進行測定；蛋殼厚度用蛋殼厚度測定儀測定，以上儀器均為日本Orka Technology Ltd生產(chǎn)。

表1 基礎日糧組成及營養(yǎng)水平（風干基礎）Table 1 Composition and Nutrient Levels of Basal Diets（Air Dry Basis）

1.4.3 血清生化指標

在試驗期最后1 d（即試驗第5周末）取血樣：在每個重復區(qū)隨機選取3只蛋雞，采用翅靜脈采血3 mL，靜置10 min，然后吸取上清液于離心管，2500 r/min離心10 min。離心后取其上清液于Eppendorf管-20℃保存，供后續(xù)分析測試用。分析測試的儀器為卓越300型全自動生化分析儀（上?？迫A），實驗所用試劑盒為上?？迫A生物工程股份有限公司生產(chǎn)，測定的生化指標有：血清GSH-PX酶活力單位、MDA含量、總超氧化物歧化酶T-SOD值、免疫相關的IgA、IgG、IgM、C3和C4含量，及血清總膽固醇（TC）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、高密度脂蛋白（HDL）、甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白（LDL）。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)經(jīng)Excel處理后，用Spss16.0的ANOVA程序進行單因子方差分析，采用t測驗，P＜0.05為顯著差異，P＜0.01為極顯著差異。表中數(shù)據(jù)的表示形式為平均值±標準差。

2 結果分析

2.1 蛋雞生產(chǎn)性能的結果分析

將試驗記載數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，活飼料蠶對蛋雞生產(chǎn)性能的影響見表2。從表數(shù)據(jù)看，除起始的第1周外，實驗組的每周日均產(chǎn)蛋量均略微高于對照組，且有隨著時間增加差值增大的趨勢，但統(tǒng)計檢驗都未達顯著水平。隨著實驗進展每周的日均產(chǎn)蛋量無論是實驗組還是對照組都有逐漸減少的趨勢，對每周的日均產(chǎn)蛋量進行統(tǒng)計分析，無顯著差異。對整個試驗期的日均蛋重進行統(tǒng)計分析，實驗組與對照組之間的數(shù)據(jù)雖有差異蛋未達統(tǒng)計顯著水平。

2.2 蛋品質(zhì)指標測定結果

在試驗結束的第5周末，取雞蛋樣本測定的蛋品質(zhì)結果見表3。由表3可見，除蛋白高度和哈氏單位外，其余蛋重、蛋殼強度等實驗組水平均高于對照組，但只有蛋殼強度達到了極顯著水平，蛋殼厚度達到了顯著水平。

2.3 蛋雞生化指標的測定結果

在試驗結束的第5周末，抽取蛋雞血液測定的血清生化指標結果如表4，實驗組蛋雞的血清生化指標與對照組有較顯著的差異。其中實驗組蛋雞血清中的GSH-PX、T-SOD含量均顯著高于對照組，MDA顯著低于對照組，說明了在雞飼料中添加活蠶能夠有效提高蛋雞的抗氧化能力。實驗組蛋雞血清中IgA、IgG的含量相比于對照組顯著提高，IgM、C3及C4與對照組差異不顯著但平均水平高于對照組，白蛋白含量比對照組高出11.09%，實驗組總蛋白含量超出8.91%，血清中尿素氮含量比對照組低23.61%。實驗組蛋雞血清中甘油三酯含量比對照組低6.96%，高密度脂蛋白比對照組高30.08%，低密度脂蛋白比對照組低32.23%，總膽固醇含量低于對照組37.45%。

表3 蛋品質(zhì)測定指標Table 3 Egg Quality Indicators

表4 蛋雞生化指標Table 4 Biochemical Indicators of Laying Hens

3 討論

3.1 活飼料蠶對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

在試驗期間，隨著實驗進展，實驗組和對照組日產(chǎn)蛋數(shù)量都有隨時間進展而減少的趨勢。原因分析可能是從五月到六月氣溫逐漸升高，且溫度升值較大，從而影響蛋雞的產(chǎn)蛋能力[14]。實驗組每周日產(chǎn)蛋數(shù)和日均蛋重雖然都略微高于對照組，且隨著試驗進展差值有增大的趨勢，但未達統(tǒng)計分析差異顯著水平，說明在本試驗活蠶飼料用量的水平對蛋雞的產(chǎn)蛋性能未有顯著增效，也有可能試驗的時間比較短，尚未充分表現(xiàn)出其作用，有待在每只雞的活蠶用量及食用時間上進行進一步的研究。

3.2 活飼料蠶對雞蛋品質(zhì)的影響

實驗組的蛋殼厚度和強度相較于對照組有了顯著和極顯著的提高，蛋殼厚度和強度能夠體現(xiàn)蛋抗破損能力，食用活飼料蠶能夠提高雞蛋的抗破損能力，在一定程度上改善了雞蛋品質(zhì)。這可能是因為家蠶生物體含有的生物堿容易被吸收，可以保持蛋雞血液中鈉離子濃度足夠，有利于蛋殼的形成[15]，也有可能是活蠶飼料促進了蛋雞的整體代謝水平，同時也提高了蛋雞對營養(yǎng)物質(zhì)的，如鈣、磷等營養(yǎng)元素的吸收，這些營養(yǎng)物質(zhì)在蛋殼形成過程中是極為重要的。蛋殼的抗破損能力的增強，有利于雞蛋的保存和運輸。

3.3 活飼料蠶對蛋雞血清生化指標的影響

抗氧化是動物機體維持正常代謝和健康防御的重要生理機制[16]，血清中MDA、GSH-PX、T-SOD的含量是衡量其抗氧化能力的重要指標，實驗末期對食用活蠶的實驗組和對照組蛋雞進行抽樣測定后發(fā)現(xiàn)，實驗組蛋雞血清中GSH-PX、T-SOD的含量均顯著高于對照組，MDA顯著低于對照組，說明活飼料蠶的食用可以提高蛋雞的抗氧化能力，分析原因可能是：活蠶中富有的氨基酸，生物堿、維生素等能促進蛋雞機體的代謝，提高健康水平。同時天然彩色繭蠶中豐富的黃酮類色素在清除生物體自由基和過氧化基的過程中也起到很大的作用[17]，有學者認為黃酮類物質(zhì)在降血糖、清除氧化自由基方面作用力很強，從而提高了蛋雞的抗氧化能力。

與免疫相關的指標中，實驗組的IgA、IgG含量極顯著地高于對照組，IgM、補體蛋白C3及C4也都高于對照組但未達顯著水平?？梢钥闯鍪秤没铒暳闲Q的蛋雞的免疫水平明顯高于對照組。分析原因可能是活蠶本身含有的豐富蛋白質(zhì)及氨基酸，黃酮、甾類、氨基酸、維生素、生物堿[18]等生物活性物質(zhì)有益于改善家禽的免疫系統(tǒng)。也有可能是家蠶生物體所含有的抗菌類物質(zhì)如抗菌肽，抵御細菌、真菌、病毒等物質(zhì)，從而幫助提高了蛋雞的抗病能力。

實驗組蛋雞血清中總蛋白含量也極顯著的高于對照組，而尿素氮含量則極顯著的低于對照組，說明實驗組蛋雞的肝臟和腎臟代謝水平顯著優(yōu)于對照組。實驗組與對照組比較，其蛋雞血清中的總膽固醇含量、甘油三酯和低密度脂蛋白含量均極顯著的降低，而高密度脂蛋白則極顯著的升高，說明活蠶生物體的所含的營養(yǎng)物質(zhì)，可以促進蛋雞的肝臟及腎臟健康，增強蛋雞的腎臟和肝臟的代謝功能。同時在降低蛋雞機體的脂肪方面也起到很大的作用，這可能是活蠶體內(nèi)含有的生物堿和黃酮類物質(zhì)所起的作用，蛋雞體內(nèi)的膽固醇[19]代謝也得到促進。但關于其降膽固醇的機制及如何影響膽固醇的代謝進程的還需要更深入的研究。

家禽疾病的防控和抗生素的濫用是目前我國養(yǎng)殖業(yè)的一大問題，近年來人們對抗生素的濫用及食品安全問題有了越來越多的關注，活飼料蠶對蛋雞抗氧化能力和免疫功能的改善在本實驗中具有顯著體現(xiàn)，活飼料蠶是一種綠色安全的家禽飼料，在綠色有機農(nóng)業(yè)中有很大的發(fā)展。

4 結論

在本試驗條件下，活蠶飼料對蛋雞的生產(chǎn)性能沒有顯著增效。但活蠶飼料可以在一定程度上改善雞蛋品質(zhì)，提高蛋殼的強度，提高其抗破損能力。飼料中添加活蠶，能改善蛋雞血清生化指標，提高其抗氧化和營養(yǎng)物質(zhì)代謝能力。關于蛋雞食用活蠶后是如何消化吸收的，如對雞腸道形態(tài)結構的影響，還需要更深入的試驗探究。