前言

本標準按照GB/T 1.1-2009給出的規(guī)則起草。

本標準由中國輕工業(yè)聯(lián)合會提出。

本標準由全國口腔護理用品標準化技術(shù)委員會牙膏分技術(shù)委員會(SAC/TC492/SC1)歸口。

本標準起草單位：廣州薇美姿實業(yè)有限公司、廣州質(zhì)量監(jiān)督檢測研究院、廣州立白企業(yè)集團有限公司、云南白藥集團股份有限公司、浙江方圓檢測集團股份有限公司、國家輕工業(yè)牙膏蠟制品質(zhì)量監(jiān)督檢測中心。

本標準主要起草人：陳敏珊、李林、陶麗、郭長虹、穆可云、高鷹、胡丹、吳智慧、張勁松。

本標準為首次發(fā)布。

1 范圍

本標準規(guī)定了高效液相色譜法測定牙膏中十六烷基氯化吡啶的方法要點、試劑與標準物質(zhì)、儀器、分析步驟、結(jié)果計算、回收率、標準偏差和允許差。

本標準適用于牙膏和漱口水中十六烷基氯化吡啶含量的測定。

本標準十六烷基氯化吡啶的檢出濃度為0.2 μg/mL，最低定量濃度為0.70 μg/mL。若取0.5 g牙膏樣品，加提取液25mL，十六烷基氯化吡啶的檢測限為10.0 mg/kg，定量限為35.0 mg/kg；若取2.5 g漱口水樣品，加提取液10mL，十六烷基氯化吡啶的檢測限為0.8 mg/kg，定量限為2.8 mg/kg。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。

3 方法要點

將牙膏用80%甲醇水溶液分散，超聲波提取其中的十六烷基氯化吡啶成分，然后過濾處理；漱口水樣品用甲醇稀釋定容后過濾。濾液用帶紫外檢測器的高效液相色譜儀分析測定，外標法通過峰面積進行定量計算。

4 試劑與標準物質(zhì)

4.1 除非另有說明，所用試劑均為分析純的試劑，水為符合GB/T 6682規(guī)定的一級水。

4.2 甲醇

色譜純。

4.3 80%甲醇水溶液

甲醇+水=80+20(體積分數(shù))。

4.4 十六烷基氯化吡啶對照品

含量99.9%。

4.5 25 mmol/L四甲基氫氧化銨(五水合物)溶液

稱取四甲基氫氧化銨五水合物4.53 g(精確至0.000 1g)，用水溶解并定容至1 000 mL，乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.0，經(jīng)0.45μm水相濾膜過濾，并超聲脫氣5 min。

4.6 水相濾膜

0.45 μm。

4.7 有機相濾膜

0.45 μm。

4.8 標準儲備液

稱取十六烷基氯化吡啶對照品100.0 mg(精確至0.000 1g)，置于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，作為含十六烷基氯化吡啶1 000.0 μg/mL標準儲備液。

4.9 標準工作液

標準儲備液用甲醇稀釋，配制成濃度為6.25 μg/mL、12.50 μg/mL、25.00 μg/mL、50.00μg/mL、100.00 μg/mL、200.00 μg/mL的標準工作液。

5 儀器

5.1 高效液相色譜儀，配紫外檢測器。

5.2 氰基色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，或具備同等分離效果色譜柱。

5.3 渦旋震蕩器。

5.4 超聲波清洗器：功率400W。

5.5 分析天平：精度0.000 1 g。

5.6 離心機，轉(zhuǎn)速不小于5 000 r/min。

6 分析步驟

6.1 樣品處理

6.1.1 牙膏樣品處理

牙膏試樣先擠去大約20mm，再稱取0.5 g(精確至0.000 1g)試樣于50 mL離心管中，加入數(shù)顆研磨玻璃珠(直徑2～3mm)，用移液管移入80%甲醇水溶液(10 mL)，渦旋震蕩至牙膏完全分散，超聲提取10 min，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，定容。取試樣溶液5 000 r/min離心5 min，取上清液過0.45 μm有機相濾膜，備用。

6.1.2 漱口水樣品處理

精密稱取漱口水樣品2.5 g(精確至0.000 1g)于10 mL容量瓶中，甲醇定容，充分混勻后取上清液過0.45 μm有機相濾膜，備用。

6.2 測定

6.2.1 液相色譜參考條件

按照表1設(shè)定液相色譜條件。

表1 液相色譜條件

6.2.2 標準曲線

準確吸取4.9制備的標準工作液20 μL，分別注入液相色譜儀，按照表1的色譜條件進行測定。以十六烷基氯化吡啶的濃度為x軸，其相應(yīng)的峰面積為y軸，繪制標準曲線。

十六烷基氯化吡啶標準溶液的液相色譜圖，參照附錄A中圖A.1。

6.2.3 測定

準確吸取20 μL經(jīng)6.1處理的樣品溶液，注入液相色譜儀測定十六烷基氯化吡啶峰面積，由標準曲線計算出試樣溶液中十六烷基氯化吡啶的濃度。

樣品溶液的液相色譜圖，參照附錄A中圖A.2。

7 結(jié)果計算

試樣中十六烷基氯化吡啶的含量X(mg/kg)，按公式(1)計算：

(1)

式中：X——試樣中十六烷基氯化吡啶的含量，單位為毫克每千克(mg/kg)；

c——試樣溶液中十六烷基氯化吡啶的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL)；

V——試樣定容體積，單位為毫升(mL)；

N——稀釋倍數(shù)；

K——標準對照品中十六烷基氯化吡啶的純度；

m——試樣質(zhì)量，單位為克(g)。

計算結(jié)果保留一位小數(shù)。

8 回收率

十六烷基氯化吡啶在添加濃度1.96 μg/mL～200 μg/mL范圍內(nèi)，本標準方法的回收率為93.8%～100.2%。

9 標準偏差

本標準方法的相對標準偏差小于5%(n=6)。

10 允許差

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算數(shù)平均值的10%。

附 錄A

(資料性附錄)

液相色譜參考譜圖

圖A.1 液相色譜圖

圖A.2 牙膏樣品液相色譜譜圖