李民超

北京市門頭溝區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，北京 100000

布魯氏菌病（也稱布氏桿菌病，簡(jiǎn)稱布病）是由布魯氏菌引起的一種人畜共患病。按照北京市動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫實(shí)施方案的要求，門頭溝區(qū)對(duì)轄區(qū)內(nèi)羊只進(jìn)行布魯氏菌病集中免疫。本文利用動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)GB/T 18646-2018 中的虎紅平板凝集試驗(yàn)、試管凝集試驗(yàn)常量法和競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，檢測(cè)轄區(qū)內(nèi)羊群布魯氏菌病口服免疫后抗體水平。并根據(jù)陽(yáng)性判定的準(zhǔn)確率的差異問(wèn)題，分析比較，從而選擇更準(zhǔn)確更適合的檢測(cè)方法。

1 布病集中免疫情況

門頭溝區(qū)使用的免疫疫苗是北京市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心采購(gòu)的中牧實(shí)業(yè)股份有限公司的布氏菌病活疫苗（S2 株），規(guī)格為80 頭份/瓶。依據(jù)北京市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心指導(dǎo)要求，采取口服免疫的方式，山羊和綿羊不論年齡大小，一律口服100 億CFU/頭只。

2 材料與方法

2.1 材料

結(jié)合門頭溝區(qū)實(shí)際情況，羊養(yǎng)殖存欄較小、全部是散養(yǎng)模式，區(qū)疫控中心選擇存欄較多的養(yǎng)殖戶開(kāi)展抗體監(jiān)測(cè)。按時(shí)間順序，未免疫血清26 份；免疫后1 個(gè)月血清43 份，免疫后2 個(gè)月血清15 份，免疫后3 個(gè)月血清16 份，免疫后4 個(gè)月血清11 份。

診斷試劑：中監(jiān)所的虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原、試管凝集試驗(yàn)抗原，蘭獸研cELISA 試劑盒。

2.2 檢測(cè)方法

虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)均按照《動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)》（GB/T18646-2018）進(jìn)行檢測(cè)和結(jié)果判定。競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)按照《動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)》（GB/T18646-2018）和試劑盒說(shuō)明書(shū)開(kāi)展檢測(cè)和結(jié)果判定[1]。

3 檢測(cè)結(jié)果及分析

3.1 檢測(cè)結(jié)果

未免疫散養(yǎng)戶26 份血清，三種檢測(cè)方法陽(yáng)性數(shù)量均為0。免疫后各月份檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 免疫后各月份檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

3.2 結(jié)果分析

通過(guò)上述數(shù)據(jù)來(lái)看，非免疫的羊血清三種檢測(cè)方法的陽(yáng)性率均為0%；而免疫后的羊群布魯氏菌病抗體陽(yáng)性的情況為：競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的檢測(cè)陽(yáng)性率大于虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)。

通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的結(jié)果來(lái)看，隨時(shí)間的推移，抗體陽(yáng)性率越來(lái)越低。雖然免疫后第一個(gè)月是抗體產(chǎn)生的高峰，但通過(guò)虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)來(lái)看，免疫后第1 個(gè)月陽(yáng)性率僅為20.93%和16.28%；從免疫后2 個(gè)月開(kāi)始至免疫后4 個(gè)月，虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)的陽(yáng)性檢出率幾乎為0。

4 討論

數(shù)據(jù)表明，常規(guī)血清學(xué)診斷中虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)抗體檢測(cè)效果不佳，而競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)卻是效果良好。

抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生大量抗體，這些抗原存在于機(jī)體時(shí)產(chǎn)生能夠與凝集試驗(yàn)抗原所結(jié)合的抗體，因此試管凝集和虎紅平板凝集試驗(yàn)?zāi)軌虺霈F(xiàn)部分陽(yáng)性現(xiàn)象。隨著大量抗體的產(chǎn)生，抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物后被消滅，抗原數(shù)量大量下降，沒(méi)有了抗原的刺激，虎紅平板凝集和試管凝集試驗(yàn)就檢測(cè)不出對(duì)應(yīng)的抗體了，因而無(wú)法檢測(cè)出陽(yáng)性。而競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)出的抗體是抗原特定位置或結(jié)構(gòu)產(chǎn)生的，這一類特定抗體在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)存在時(shí)間也就是4 個(gè)月左右[2]。

經(jīng)上述討論與分析，得出的結(jié)論是經(jīng)過(guò)布魯氏菌疫苗免疫后的羊群，在檢測(cè)抗體時(shí)可以優(yōu)先選擇競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法，在未發(fā)生免疫的養(yǎng)殖場(chǎng)戶中可以使用虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)進(jìn)行陽(yáng)性判定，如果實(shí)驗(yàn)室條件允許的情況下使用PCR 確診。