急性胰腺炎(AP)是消化系統(tǒng)常見(jiàn)的疾病，臨床特征主要為急性上腹痛及血清淀粉酶、脂肪酶水平升高等[1-2]。AP具有起病急、進(jìn)展快、并發(fā)癥多等特點(diǎn)[3]。近年來(lái)，AP的發(fā)病率逐年升高，5%～10%可進(jìn)展為重癥AP[4]。研究表明，AP的嚴(yán)重程度與其預(yù)后轉(zhuǎn)歸關(guān)系密切，其中重癥AP的預(yù)后較差，隨病情進(jìn)展可引起持續(xù)性全身器官功能?chē)?yán)重障礙，病死率高達(dá)30%[5]。目前AP的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，自噬引起腺泡細(xì)胞內(nèi)胰蛋白酶原的異常激活是AP的主要發(fā)病機(jī)制之一，AP的病情進(jìn)展和轉(zhuǎn)歸與自噬通路的狀態(tài)密切相關(guān)[6]。Dang等[7]指出，miR-142-3p可通過(guò)調(diào)節(jié)ATG16L1基因抑制自噬過(guò)程。由此推測(cè)miR-142-3p可能參與了AP的進(jìn)展過(guò)程，但目前相關(guān)報(bào)道較少。本文探究了miR-142-3p在AP患者血清中的表達(dá)水平及其與預(yù)后的關(guān)系，以期為臨床評(píng)估AP的預(yù)后提供幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年9月至2019年9月在東陽(yáng)市人民醫(yī)院接受治療的307例AP患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)AP診斷符合《急性胰腺炎診治指南(2014)》[8]；(2)發(fā)病72 h內(nèi)入院；(3)首次發(fā)?。?4)伴有典型的上腹痛癥狀；(5)患者或家屬簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并胰腺腫瘤；(2)合并其他感染性疾病；(3)伴有慢性肝病、肝硬化；(4)合并凝血功能障礙；(5)妊娠期及哺乳期婦女。307例AP患者中男性139例，女性168例；年齡32～61歲，平均年齡(48.23±11.09)歲；其中膽源性AP者183例，高脂血癥AP者 96例，乙醇性AP者 28例。本研究獲得東陽(yáng)市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 臨床資料收集

收集受試者的年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、高血壓、糖尿病、飲酒、吸煙、發(fā)病至入院時(shí)間、病因、ICU住院時(shí)間、脂肪酶、淀粉酶、急性生理與慢性健康(APACHE)Ⅱ評(píng)分、急性胰腺炎嚴(yán)重程度床邊指數(shù)(BISAP)評(píng)分等資料。采用復(fù)診及電話隨訪等方式了解患者的預(yù)后情況，隨訪終點(diǎn)為死亡。隨訪截止至2019年11月4日。

1.3 血清miR-142-3p相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)

采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(RT-qPCR)檢測(cè)血清miR-142-3p的相對(duì)表達(dá)量。抽取患者入組后空腹靜脈血10 mL，室溫下4 000 r/min離心15 min，離心半徑10 cm，分離上層血清，置于-20 ℃冰箱待測(cè)。采用Trizol試劑提取血清中總RNA，將2 μg的總RNA添加至20 μL反應(yīng)液中，采用Prime Script逆轉(zhuǎn)錄酶反向轉(zhuǎn)錄合成cDNA，最后PCR擴(kuò)增。反應(yīng)條件為：95 ℃ 10 min預(yù)變性，之后60 ℃ 1 min，95 ℃ 10 s，共40個(gè)循環(huán)，然后65 ℃ 45 s退火、72 ℃ 10 min延伸。以GAPDH為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt表示血清miR-142-3p的相對(duì)表達(dá)量。見(jiàn)表1。

表1 引物序列

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組基本資料比較

307例AP患者在隨訪期間死亡27例(8.79%)，生存280例(91.21%)。死亡組與生存組在年齡、性別、BMI、吸煙、飲酒、高血壓、糖尿病、病因、ICU住院時(shí)間方面比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，死亡組發(fā)病至入院時(shí)間、脂肪酶水平、淀粉酶水平高于生存組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2 兩組的基本資料比較

2.2 兩組患者血清miR-142-3p的相對(duì)表達(dá)量

死亡組患者血清miR-142-3p的相對(duì)表達(dá)量為0.65±0.17，低于生存組(1.18±0.30)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.032，P<0.001)。

2.3 影響AP患者預(yù)后的因素

將發(fā)病至入院時(shí)間、脂肪酶、淀粉酶、miR-142-3p作為自變量，α入=0.05，α出=0.10，將AP患者預(yù)后(生存=0，死亡=1)作為因變量納入多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示發(fā)病至入院時(shí)間、miR-142-3p與AP患者的預(yù)后關(guān)系密切。見(jiàn)表3。

2.4 血清miR-142-3p、模型A、BISAP評(píng)分、APACHE Ⅱ評(píng)分預(yù)測(cè)AP患者預(yù)后的價(jià)值

采用二元Logistic回歸分析構(gòu)建miR-142-3p、發(fā)病至入院時(shí)間預(yù)測(cè)AP患者預(yù)后的模型，F(xiàn)=-12.082+0.283×發(fā)病至入院時(shí)間+1.963×miR-142-3p，將其命名為模型A。模型A預(yù)測(cè)AP患者預(yù)后的ROC曲線下面積(AUC)高于miR-142-3p、BISAP評(píng)分、APACHE Ⅱ評(píng)分(Z=1.968，P=0.049；Z=4.192，P<0.001；Z=2.795，P=0.005)。血清miR-142-3p預(yù)測(cè)AP患者預(yù)后的AUC高于BISAP評(píng)分、APACHE Ⅱ評(píng)分，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=2.292，P=0.022；Z=1.990，P=0.047)，BISAP評(píng)分與APACHE Ⅱ評(píng)分預(yù)測(cè)AP患者預(yù)后的AUC比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=0.322，P=0.748)。詳見(jiàn)表4、圖2。

表3 影響AP患者預(yù)后的多因素Logistic回歸分析

表4 血清miR-142-3p、模型A、BISAP評(píng)分、APACHE Ⅱ評(píng)分預(yù)測(cè)AP患者預(yù)后的效能

圖2血清miR-142-3p、模型A、BISAP評(píng)分、APACHE Ⅱ評(píng)分預(yù)測(cè)AP患者預(yù)后的ROC曲線

3 討論

自噬與AP的病理生理學(xué)過(guò)程密切相關(guān)，正常情況下自噬可通過(guò)調(diào)節(jié)炎性因子的表達(dá)，增加腺泡細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力引起高鈣血癥，進(jìn)而激活胰蛋白酶原，降低胰腺腺泡細(xì)胞活力，誘導(dǎo)AP的發(fā)生[9]。此外，自噬與核因子κB(NF-κB)信號(hào)通路的活化有關(guān)，可誘導(dǎo)腫瘤壞死因子-α表達(dá)，導(dǎo)致胰蛋白酶原過(guò)早激活，而激活的胰蛋白酶原可進(jìn)一步激活NF-κB信號(hào)通路，形成惡性循環(huán)，加重AP病情[10]。因此，探究自噬狀態(tài)與AP的關(guān)系，有助于了解患者的預(yù)后。有研究表明，miR-142-3p的過(guò)表達(dá)可通過(guò)抑制高遷移率族蛋白1的水平，從而抑制自噬過(guò)程[11]。由此推測(cè)，miR-142-3p可能通過(guò)調(diào)節(jié)自噬過(guò)程參與AP的進(jìn)展。

周圓圓等[12]的研究指出，AP患者的病死率約為3.20%。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，307例AP患者在隨訪期間的病死率約為8.79%，略高于既往研究，可能與納入病例的個(gè)體差異及疾病病情有關(guān)。進(jìn)一步比較不同預(yù)后患者血清miR-142-3p的相對(duì)表達(dá)量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)死亡組患者血清miR-142-3p的相對(duì)表達(dá)量低于生存組，表明血清miR-142-3p可能與AP患者的預(yù)后有關(guān)。本研究進(jìn)一步采用Logistic回歸方法分析影響AP患者預(yù)后的因素，結(jié)果顯示發(fā)病至入院時(shí)間、miR-142-3p與AP患者的預(yù)后關(guān)系密切，提示檢測(cè)血清miR-142-3p的相對(duì)表達(dá)量可能有助于評(píng)估AP患者的預(yù)后。目前臨床上有多個(gè)評(píng)分系統(tǒng)可用于AP患者的預(yù)后評(píng)估，其中APACHE Ⅱ評(píng)分及BISAP評(píng)分較為常用。APACHE Ⅱ評(píng)分是目前公認(rèn)并應(yīng)用最多的AP評(píng)分系統(tǒng)，受到多項(xiàng)指南的推薦[13-14]。BISAP評(píng)分在2008年被提出，該評(píng)分操作相對(duì)簡(jiǎn)單，在預(yù)測(cè)早期發(fā)病的AP患者預(yù)后時(shí)具有較高價(jià)值[15]。李曼等[16]采用APACHE Ⅱ評(píng)分及BISAP評(píng)分預(yù)測(cè)不同入院時(shí)間AP患者的預(yù)后情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種評(píng)分在預(yù)測(cè)入院至就診時(shí)間≤3 d的AP患者的AUC分別為0.823和0.832，均有較高價(jià)值。本研究分別采用miR-142-3p、模型A、APACHE Ⅱ評(píng)分及BISAP評(píng)分預(yù)測(cè)AP患者的預(yù)后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型A預(yù)測(cè)患者預(yù)后的效能較高，提示聯(lián)合miR-142-3p檢測(cè)更有利于評(píng)估預(yù)后。同時(shí)，本研究結(jié)果還顯示，miR-142-3p預(yù)測(cè)AP患者預(yù)后的AUC高于APACHE Ⅱ評(píng)分和BISAP評(píng)分，提示miR-142-3p預(yù)測(cè)AP患者預(yù)后的效能較高，可能作為新的血清學(xué)標(biāo)志物用于AP的預(yù)后評(píng)估。

綜上所述，miR-142-3p與AP患者的預(yù)后關(guān)系密切，檢測(cè)血清miR-142-3p水平有助于評(píng)估AP患者的預(yù)后情況。今后將開(kāi)展研究進(jìn)一步分析miR-142-3p影響AP患者預(yù)后的病理生理學(xué)機(jī)制。