李珂，趙蓉，嚴(yán)紅亞，王天葆，2，李廷翠，3，陳富珍，張剛，常志順，信愛國(guó)*

(1.云南省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院養(yǎng)禽與禽病研究所，云南 昆明 650224；2.廣南縣舊莫鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，云南 廣南 663302； 3.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650201；4.大理農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院，云南 大理 671003)

沙門氏菌病(Salmonellosis)是由沙門氏菌屬(Salmonella.sp)細(xì)菌引起人和動(dòng)物多種疾病的人畜共患病，具有重要的公共衛(wèi)生意義。人感染沙門氏菌最主要是食用了受沙門氏菌污染的雞肉和雞蛋制品[1，2]，每年全球約有9380萬(wàn)人因感染沙門氏菌引起腹瀉[3]。雞沙門氏菌病常由雞白痢、雞傷寒或禽副傷寒沙門氏菌中的一種或多種相互作用引起疾病發(fā)生，給養(yǎng)雞業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[4]。雞白痢沙門氏菌(Salmonellapullorum)可引起雛雞發(fā)生嚴(yán)重白痢，大批死亡，成年雞多呈隱性感染，可長(zhǎng)期帶毒、排毒，既能通過(guò)空氣、飲水、飼料等水平傳播，又能通過(guò)種雞垂直傳播，出現(xiàn)死胚、死雛和弱雛[5]。雞傷寒沙門氏菌(Salmonellagallinarum)對(duì)雛雞、成年雞均可致病，常引起以貧血、白細(xì)胞增多、出血為特征的急性膿毒敗血癥, 死亡率可高達(dá)100%[6]。禽副傷寒沙門氏菌帶鞭毛能運(yùn)動(dòng)，如腸炎沙門氏菌，是重要的食源性人獸共患細(xì)菌病之一，雛雞感染后可引起下痢及大量死亡，病雞耐過(guò)后生長(zhǎng)發(fā)育受阻，成為無(wú)癥狀排菌者，使此病難以根除。據(jù)對(duì)2008—2017年我國(guó)部分地區(qū)禽源沙門氏菌流行病學(xué)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，所分離的90株禽源沙門氏菌的優(yōu)勢(shì)血清型為腸炎沙門氏菌(S.Enteritidis)[7]。迄今尚不清楚云南省地方品種雞群沙門氏菌感染情況。2019年3—12月，我們對(duì)云南9個(gè)不同地方品種雞種雞場(chǎng)(群)進(jìn)行了沙門氏菌血清抗體檢測(cè)，開展沙門氏菌血清學(xué)調(diào)查，為下一步地方雞品種保存及利用、沙門氏菌防控及凈化工作提供流行病學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)樣品

2019年采自云南鹽津?yàn)蹼u、南澗烏雞、武定雞、尼西雞、青花雞、綠春黃連雞、文山土雞、寧蒗高原雞、云龍矮腳雞等9個(gè)地方雞種雞場(chǎng)(戶)，雞翅靜脈采集5804份血清樣品(其中：鹽津?yàn)蹼u2192份、南澗烏雞1938份、武定雞504份、尼西雞440份、青花雞441份、綠春黃連雞52份、文山土雞97份、寧蒗高原雞28份、云龍矮腳雞112份)。

1.1.2試驗(yàn)試劑

雞沙門氏菌(SSYN001株)微量凝集試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)抗原，為0.5%苯酚生理鹽水細(xì)菌懸液(10億個(gè)/mL)，由本實(shí)驗(yàn)室制備保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)方法

采用本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的沙門氏菌微量凝集試驗(yàn)方法進(jìn)行。96孔U型反應(yīng)板中加入25μL/孔的0.5%苯酚生理鹽水；每行第一孔加入待檢血清25μL，倍比稀釋至第6孔，棄去25μL；最后按25μL/孔加入上述制備的雞沙門氏菌微量凝集試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)抗原，同時(shí)設(shè)立陽(yáng)性和陰性血清對(duì)照，置濕盒中37℃培養(yǎng)18～24h，觀察試驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)參照NY/T 2838—2015和美國(guó)國(guó)家家禽改良計(jì)劃[8]，微孔板的孔中出現(xiàn)明顯的絮狀沉淀為陽(yáng)性反應(yīng)；孔中出現(xiàn)大而明顯的紐扣狀沉淀為陰性反應(yīng)；記錄樣品陽(yáng)性反應(yīng)凝集孔數(shù)n，當(dāng)n≥4時(shí)，判定為陽(yáng)性(+)，當(dāng)n≤3時(shí)，判為陰性(-)。

1.2.2數(shù)據(jù)分析

將檢測(cè)結(jié)果錄入Excel，按區(qū)域和場(chǎng)點(diǎn)類別對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和描述，分析得出不同地區(qū)、不同品種雞群沙門氏菌的感染情況。

2 結(jié)果

2.1 各雞場(chǎng)雞群檢測(cè)結(jié)果

本次調(diào)查共檢測(cè)9個(gè)地方雞品種的28個(gè)場(chǎng)群5804份雞血清樣品。檢出陽(yáng)性場(chǎng)群27個(gè)，場(chǎng)群陽(yáng)性率96.43%，陽(yáng)性場(chǎng)的場(chǎng)內(nèi)個(gè)體陽(yáng)性率介于0.89%～53.57%；共檢出陽(yáng)性樣品1 339份，個(gè)體平均陽(yáng)性率為23.07%。其中，云龍矮腳雞最低為0.89%，寧蒗高原雞最高為53.57%，見表1。

2.2 各雞場(chǎng)公母雞群檢測(cè)結(jié)果

對(duì)9個(gè)地方雞的9個(gè)種雞場(chǎng)中的10 個(gè)種公雞群和 18個(gè)種母雞群進(jìn)行了沙門氏菌抗體檢測(cè)，結(jié)果顯示，除綠春黃連雞外，其余地方雞表現(xiàn)為母雞群沙門氏菌抗體陽(yáng)性率普遍高于公雞群，見表2。

表1 2019年云南地方雞各場(chǎng)雞群沙門氏菌檢測(cè)結(jié)果

表2 2019年云南地方雞各場(chǎng)公母雞群沙門氏菌抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 不同飼養(yǎng)模式雞群檢測(cè)結(jié)果

按照不同飼養(yǎng)模式對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)：先籠養(yǎng)后散養(yǎng)雞群的沙門氏菌感染率明顯低于先散養(yǎng)后籠養(yǎng)雞群，純籠養(yǎng)雞群沙門氏菌的感染率明顯低于純散養(yǎng)雞群，見表3。

2.4 各地區(qū)雞群檢測(cè)結(jié)果

按滇東(昭通、文山)、滇西(大理)、滇中(昆明)、滇南(紅河綠春)和滇北(麗江、迪慶)5個(gè)地區(qū)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)：雞沙門氏菌在全省范圍內(nèi)普遍流行，場(chǎng)群陽(yáng)性率為85.71%～100%；個(gè)體陽(yáng)性率介于5.80%～40.32%，其中滇東地區(qū)個(gè)體陽(yáng)性率最高，滇南地區(qū)個(gè)體陽(yáng)性率最低，但滇南地區(qū)樣品采集數(shù)偏小，不具有代表性。2019年云南省不同地區(qū)雞沙門氏菌檢測(cè)結(jié)果見表4。

表3 不同飼養(yǎng)模式雞群檢測(cè)結(jié)果

表4 2019年云南省不同地區(qū)雞沙門氏菌檢測(cè)結(jié)果

3 討論

對(duì)2019年采自云南省9個(gè)地方雞品種的28個(gè)種雞群的5804份血清樣品采用沙門氏菌微量凝集試驗(yàn)進(jìn)行血清抗體檢測(cè)。結(jié)果顯示，所檢測(cè)的云南地方雞種雞群總體場(chǎng)群陽(yáng)性率為 96.43 %，個(gè)體平均陽(yáng)性率為23.07%。不同地區(qū)、不同品種地方雞沙門氏菌個(gè)體陽(yáng)性率存在一定的差異；滇東地區(qū)最高為40.32%，滇南地區(qū)最低為5.80%，但滇南地區(qū)樣品采集數(shù)偏小，不具有代表性；地方雞群中，寧蒗高原雞沙門氏菌個(gè)體陽(yáng)性率最高為53.57%，云龍矮腳雞沙門氏菌個(gè)體陽(yáng)性率最低為0.89%，而在同一品種中，除綠春黃連雞外，母雞個(gè)體陽(yáng)性率普遍高于公雞個(gè)體陽(yáng)性率。飼養(yǎng)方式上，籠養(yǎng)雞群體沙門氏菌感染陽(yáng)性率顯著低于地面散養(yǎng)群體。值得注意的是，根據(jù)沙門氏菌菌體抗原和鞭毛抗原差異分為若干個(gè)血清群，其中雞白痢、禽傷寒和腸炎沙門氏菌均屬于D血清群。檢測(cè)雞沙門氏菌的抗原菌SSYN001株屬于腸炎沙門氏菌，與大多數(shù)雞白痢和禽傷寒菌株是具有相同抗原O抗原(1，9，12)，但不排除菌株對(duì)于一些雞沙門氏菌變異株檢測(cè)會(huì)存在假陰性結(jié)果。綠春樣品檢測(cè)陰性，與采樣地養(yǎng)殖場(chǎng)邊遠(yuǎn)山區(qū)、環(huán)境封閉、未受感染有關(guān)。該場(chǎng)農(nóng)戶散養(yǎng)，雞數(shù)量稀少，不具有代表性。

云南地方雞沙門氏菌血清學(xué)調(diào)查結(jié)果提示了雞沙門氏菌感染率高、流行情況較為嚴(yán)重。對(duì)照雞白痢凈化標(biāo)準(zhǔn)[9]，國(guó)家規(guī)定原種雞場(chǎng)全部為陰性，祖代種雞場(chǎng)陽(yáng)性率低于0.2%，父母代種雞場(chǎng)陽(yáng)性率低于0.5%。說(shuō)明云南地方種雞實(shí)施雞沙門氏菌凈化需要從種源抓起，對(duì)種雞開展檢疫，淘汰陽(yáng)性雞，并持續(xù)不斷對(duì)不同代次開展檢疫凈化工作。實(shí)施 “一場(chǎng)一策”，規(guī)模養(yǎng)殖，構(gòu)建綜合生物安全措施，改善養(yǎng)殖設(shè)施條件，如添置滅蚊蠅燈、滅鼠和擋鼠板的使用、加裝防鳥網(wǎng)和帶雞消毒等方法，達(dá)到有效控制雞沙門氏菌的發(fā)生。

回溯地方種雞群采樣場(chǎng)群發(fā)現(xiàn)，不同養(yǎng)殖環(huán)境、不同種雞品種及其飼養(yǎng)模式等與沙門氏菌的感染情況密切相關(guān)。因此，在開展云南地方品種雞保種選育及開發(fā)利用過(guò)程中，針對(duì)不同地區(qū)和不同品種，制定合理的防控和凈化措施；改善飼養(yǎng)條件，堅(jiān)持籠養(yǎng)；加強(qiáng)持續(xù)不斷地監(jiān)測(cè)，及時(shí)淘汰陽(yáng)性雞；加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生，逐步實(shí)現(xiàn)對(duì)雞沙門氏菌病的凈化。

防控沙門氏菌病，目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)獲得批準(zhǔn)使用的相關(guān)疫苗[10]，主要依靠抗生素藥物治療和不斷檢疫淘汰陽(yáng)性雞進(jìn)行控制?？股厮幬锬苡行Э刂粕抽T氏菌，但卻難以消除病原，且易產(chǎn)生耐藥性，并對(duì)人類造成一定的影響[11]。據(jù)報(bào)道，我國(guó)禽源沙門氏菌對(duì)大部分抗生素的耐藥率呈上升趨勢(shì)[7]。與常規(guī)雞白痢、禽傷寒沙門氏菌凈化相比，采用雞腸炎沙門菌檢測(cè)，檢測(cè)范圍更廣，是下一步雞沙門氏菌凈化的目標(biāo)，對(duì)動(dòng)物源性食品安全具有重要的意義。