翟思佳 黃巧 廖行偉 劉宇超 尹時(shí)華
廣西醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科(南寧530000)
水楊酸鈉作為臨床常用藥品之一,特別是在西方國(guó)家被廣泛大量使用。大劑量的水楊酸鈉可以對(duì)從耳蝸到中樞神經(jīng)的不同聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)層次造成聽(tīng)覺(jué)損害,對(duì)耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)的損傷尤甚[1,2],并可體現(xiàn)在聽(tīng)性腦干反應(yīng)(ABR)和畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射(DPOAE)的改變[3,4]。水楊酸鈉對(duì)聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)毒副作用中最明顯的三大癥狀是耳鳴、聽(tīng)力下降和言語(yǔ)認(rèn)知能力減低[5],長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)水楊酸鈉可以引起可逆性的耳鳴,有文獻(xiàn)報(bào)道給予水楊酸鈉200mg/日,持續(xù)兩周,即可建立耳鳴動(dòng)物模型[6]。目前對(duì)于水楊酸鈉的作用機(jī)制尚未完全明確,尚需進(jìn)一步研究。
死亡相關(guān)蛋白激酶1(death associated protein kinase 1,DAPK1)是一種鈣調(diào)蛋白調(diào)節(jié)的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,參與機(jī)體多種病理生理過(guò)程[7],其缺失與癌癥、炎癥[8]、腦卒中[9]、動(dòng)脈粥樣硬化、阿爾茨海默病[10]等疾病密切相關(guān)。那么DAPK1是否也參與了在水楊酸鈉誘導(dǎo)聽(tīng)覺(jué)損害的過(guò)程呢?為此,本研究采用水楊酸鈉誘導(dǎo)聽(tīng)覺(jué)損傷建立大鼠模型,通過(guò)ABR、DPOAE等電生理方法、HE染色及免疫組化等形態(tài)學(xué)方法檢測(cè)耳蝸的病理生理變化;基于DAPK1的轉(zhuǎn)錄表達(dá)情況,探討水楊酸鈉能否調(diào)控DAPK1表達(dá)。
1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
40只耳廓反應(yīng)靈敏,未暴露于噪聲及耳毒性藥物環(huán)境的健康雄性SD大鼠(體重約300 g)購(gòu)自廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
1.1.2 主要試劑
DAPK1兔抗鼠多克隆抗體購(gòu)自boster公司;SBAC二抗試劑盒購(gòu)自boster公司;TRIZOL購(gòu)自TaKaRa公司;逆轉(zhuǎn)錄盒與熒光定量PCR試劑盒均購(gòu)于天根生化科技有限公司。
2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及造模
實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行雙側(cè)ABR和DPOAE測(cè)試,選取反應(yīng)閾小于40dB和耳聲發(fā)射篩查通過(guò)的大鼠40只,隨機(jī)分為兩組,每組20只。A組為等量生理鹽水對(duì)照組;B組為水楊酸鈉給藥實(shí)驗(yàn)組,給藥方式為腹腔注射。水楊酸鈉注射量為350mg/kg/d,連續(xù)注射7天。
2.1.2 ABR檢測(cè)
于實(shí)驗(yàn)前及給藥結(jié)束后動(dòng)物處死前對(duì)對(duì)照組及水楊酸鈉組大鼠雙耳分別進(jìn)行ABR和DPOAE測(cè)試。麻醉后的大鼠置于隔聲室,記錄電極扎入額頂正中,參考電極接同側(cè)耳廓,鼻尖接地。click短聲刺激,刺激率21次/秒,帶通濾波300~3000Hz,觀察時(shí)程15ms,疊加次數(shù)1024次,強(qiáng)度從90dB SPL開(kāi)始遞減,以能引出可分辨Ⅱ波的最小刺激強(qiáng)度為ABR反應(yīng)閾,并重復(fù)檢測(cè)2次。
2.1.3 DPOAE檢測(cè)
于實(shí)驗(yàn)前及給藥結(jié)束后動(dòng)物處死前對(duì)對(duì)照組及水楊酸鈉組大鼠雙耳分別進(jìn)行DPOAE測(cè)試。麻醉后的大鼠置于隔聲室,刺激聲強(qiáng)度L1=65dB SPL,L2=70dB SPL,取2k、3k、4k、6k、8k、10k共6個(gè)頻率點(diǎn)進(jìn)行測(cè)試,記錄各頻率左、右耳的平均DPOAE反應(yīng)幅值。
2.1.4 標(biāo)本取材及切片制備
最后一次水楊酸鈉給藥12h后,待大鼠麻醉充分后,打開(kāi)胸腔進(jìn)行心臟灌注,待眼珠、四肢末端發(fā)白后快速斷頭,取出聽(tīng)泡后剝離出耳蝸,在解剖顯微鏡下于蝸尖處挑開(kāi)小孔,用1mL注射器由蝸?lái)敼嘧?%多聚甲醛固定液,再將標(biāo)本置于4%多聚甲醛中,在4℃冰箱內(nèi)固定48h。隨后將耳蝸置于10%EDTA溶液室溫脫鈣1個(gè)月,隔天更換一次脫鈣液。乙醇梯度脫水、二甲苯透明、石蠟定向包埋后平行耳蝸縱軸連續(xù)切片,片厚4μm。
2.1.5 HE染色
石蠟切片置于60℃烤箱30min,將切片取出進(jìn)行二甲苯脫蠟和梯度酒精水化;蒸餾水沖洗,蘇木素染色1min,水洗;蒸餾水浸泡1min;1%鹽酸酒精分化數(shù)秒,自來(lái)水返藍(lán)30min,伊紅染色2min;梯度酒精脫水,二甲苯透明,晾干封片,鏡檢。
2.1.6 免疫組化
切片常規(guī)脫蠟后,用過(guò)氧化物室溫孵育10分鐘以滅活內(nèi)源性酶,蒸餾水洗3次。然后進(jìn)行抗原修復(fù):將切片浸入EDTA修復(fù)液中,微波爐中高火加熱至沸騰后斷電,間隔1-5min,中高火8min,自然冷卻,PBS洗三次。滴加封閉液于37℃放置30分鐘,甩去多余液體。滴加稀釋比為1:25的一抗(空白對(duì)照組在此步驟以PBS緩沖液代替一抗進(jìn)行孵育),37℃2小時(shí),PBS洗7分鐘×3次。滴加二抗,37℃30分鐘,PBS洗7分鐘×3次。滴加試劑SABC,37℃30分鐘,PBS洗7分鐘×3次。使用DAB顯色劑室溫顯色,蒸餾水洗滌。蘇木素復(fù)染,酒精分化,反藍(lán),封片。顯微鏡觀察。細(xì)胞胞漿有棕黃色顆粒者為陽(yáng)性表達(dá),無(wú)棕黃色者為陰性表達(dá)。在200倍鏡視野下拍照,采用Image-Pro Plus6.0圖像分析軟件測(cè)定單位面積陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)的平均光密度值(Average optical densities,AOD)。
2.1.7 RNA提取
將大鼠麻醉后迅速取出雙側(cè)耳蝸,置入RNA保存液中,在解剖顯微鏡下剝離蝸殼,取出膜迷路組織,迅速放入已加入300μl TRIZOL的1.5mLEP管中,用玻璃研磨棒在EP管中快速研磨碎,另加入700μl TRIZOL,冰上放置10min。4℃ 12000g,離心5min,吸取上清液到另一無(wú)酶EP管中,加入200μl氯仿,震蕩15s,冰上靜置5min。4℃ 12000g,離心15min,小心吸取上層清液入新的無(wú)酶EP管中,切勿吸取到中間層。耳蝸組織中膠原含量高,本實(shí)驗(yàn)采用mRNA改良提取法:用200μl異丙醇與200μl高鹽溶液(0.8mol/L檸檬酸鈉與1.2mol/L NaCl的混合液)沉淀RNA,提高RNA純度,顛倒混勻后冰上靜置10min。4℃12000g離心10min,棄上清保留沉淀,加入75%乙醇1mL洗滌沉淀。4℃12000g離心5min,倒去乙醇,用小槍頭吸取殘留液體,室溫晾干,然后將RNA溶于無(wú)酶水中,微量核酸蛋白檢測(cè)儀測(cè)定RNA濃度,OD260/OD280比值必須在1.7~2.0之間。
2.1.8 熒光定量PCR
將mRNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,RT-PCR檢測(cè)各樣本DAPK1表達(dá),反應(yīng)條件:95℃30s,95℃5s,56℃30s,72℃30s,總共38個(gè)循環(huán)。以GPHAD為內(nèi)參對(duì)照,每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔,重復(fù)3次,計(jì)算平均值。引物序列:DAPK1 F:5'-AAGGCCTCCTCTGTGTTCAAG-3',R:5'-CCCTTGCACGTCAGTCCATAA-3'。GPHAD F:5'-AGTGCCAGCCTCGTCTCATA-3';R:5'-TGAACTTGCCGTGGGTAGAG3-3'。
用ABR評(píng)估給藥前后各組大鼠的聽(tīng)力情況(如圖1及圖2)。給藥前大鼠閾值為31.79±4.13 dB SPL,造模第7天對(duì)照組動(dòng)物ABR閾值為32.14±3.78 dB SPL,實(shí)驗(yàn)組為50±4.8dB SPL,給藥前、后對(duì)照組聽(tīng)力閾值變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),而給藥后水楊酸鈉組大鼠聽(tīng)閾較給藥前及對(duì)照組均顯著升高,采用獨(dú)立t檢驗(yàn),t=-10.931,P<0.001。且隨給聲刺激強(qiáng)度減小,各波潛伏期延長(zhǎng),波形分化逐漸變差,至閾值以下,波形不能辨認(rèn)。這與吳莎[11]、陳抗松[12]等人的研究結(jié)果一致,大劑量注射水楊酸鈉明顯影響大鼠ABR閾值及波形,說(shuō)明造模成功,大劑量水楊酸鈉對(duì)大鼠聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)造成了一定損傷。
圖1 水楊酸鈉給藥前后各組大鼠ABR檢測(cè)結(jié)果波形變化A動(dòng)物給藥前的測(cè)試波形;B給藥后對(duì)照組動(dòng)物動(dòng)物ABR波形;C給藥后水楊酸鈉組動(dòng)物ABR波形。Fig.1 Waveform changes in ABR test results of rats in each group before and after salicylate administration.A shows the test waveform before animal administration;B shows the waveform of ABR in the control animal after administration;C is the the ABR waveform of the sodium salicylate group animal after administration.
圖2 水楊酸鈉給藥前后各組ABR反應(yīng)閾檢測(cè)情況(n=40,control group為對(duì)照組,SS group為水楊酸鈉組;橫坐標(biāo)為水楊酸鈉給藥時(shí)間,縱坐標(biāo)為ABR聽(tīng)力閾值。給藥后control組動(dòng)物ABR閾值為32.14±3.78 dB SPL,SS組為50±4.8dB SPL,SS組較control組顯著升高,且P<0.01,t=-10.931,P=0.000)。Fig.2 Detection of ABR response threshold before and after sodium salicylate administration(n=40,SS group is sodium salicylate group;abscissa is sodium salicylate administration time,ordinate is ABR hearing threshold.After administration,the ABR threshold of the control group was 32.14±3.78 dB SPL,and the SS group was 50±4.8dB SPL.The SS group was significantly higher than the control group,and P<0.01 t=-10.931,P=0.000).
于給藥前選擇耳聲發(fā)射篩查通過(guò)的大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn),給藥結(jié)束后再次對(duì)各組大鼠進(jìn)行耳聲發(fā)射檢測(cè),采用獨(dú)立t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,發(fā)現(xiàn)造模7天后水楊酸鈉組大鼠較給藥前及對(duì)照組2k(t=3.131,P=0.004)、3k(t=2.909,P=0.008)、4k(t=3.530 P=0.002)、6K(t=2.340,P=0.029)、8k(t=3.676,P=0.001)DPOAE幅值顯著下降,而對(duì)照組給藥前后DPOAE幅值無(wú)明顯變化,P>0.05(如表1與圖3所示),提示大劑量水楊酸鈉給藥造成了聽(tīng)力損失,聽(tīng)覺(jué)損傷[13]。
圖3 水楊酸鈉給藥前后各組DPOAE檢測(cè)情況(before modeling為給藥前大鼠(n=40),control group為對(duì)照組(n=20),SS-group為水楊酸鈉組(n=20);橫坐標(biāo)為耳聲發(fā)射頻率,縱坐標(biāo)為DP值。給藥后水楊酸鈉組較給藥前及對(duì)照組2k(t=3.131,P=0.004)、3k(t=2.909,P=0.008)、4k(t=3.530 P=0.002)、6k(t=2.340,P=0.029)、8k(t=3.676,P=0.001)DPOAE幅值顯著下降,且P<0.05;而對(duì)照組較給藥前DPOAE幅值無(wú)明顯變化,P>0.05。)Fig.3 Detection of DPOAE in each group before and after salicylate administration(SS group is sodium salicylate group;abscissa is DPOAE frequency,ordinate is DP value.The amplitude of DPOAE in the SS group(n=20)was significantly lower than animals before SS administrator(n=40)and the control group(n=20)in 2k(t=3.131,P=0.004),3k(t=2.909,P=0.008),4k(t=3.530 P=0.002),6k(t=2.340,P=0.029),8k(t=3.676,P=0.001),and P<0.05.However,the control group had no significant change in the amplitude of DPOAE compared to animals before modeling,P>0.05.
造模7d后,通過(guò)HE染色觀察各組大鼠耳蝸損傷情況,可以觀察到對(duì)照組耳蝸結(jié)構(gòu)正常(如圖4A);而水楊酸鈉組耳蝸SNG細(xì)胞明顯變形,移位,部分溶解消失,Corti器也存在有一定程度的細(xì)胞萎縮,螺旋緣、血管紋未見(jiàn)明顯變化(如圖4B)。說(shuō)明造模后水楊酸鈉組大鼠較對(duì)照組的顯著損傷主要集中在SNG區(qū)域,大劑量注射水楊酸鈉明顯影響大鼠聽(tīng)覺(jué)器官耳蝸。
圖4 HE染色觀察各組耳蝸損傷情況A箭頭所指為給藥后對(duì)照組耳蝸SNG區(qū)域;B箭頭所指為給藥后水楊酸鈉組耳蝸SNG區(qū)域;C箭頭所指為給藥后對(duì)照組Corti器;D箭頭所指為水楊酸鈉組Corti器。A,B×400;C,D×200。Fig.4 HE staining was used to observe the cochlear injury in each group A arrow indicates the cochlear SNG area of the control group after administration;B arrow indicates the cochlea SNG area of sodium salicylate group after administration.;C arrows refer to the Corti device in the control group;D arrows refer to the Corti device in the sodium salicylate group.A,B×400;C,D×200.)
表1 水楊酸鈉給藥前后各組大鼠耳聲發(fā)射檢測(cè)結(jié)果變化Table 1 Changes in DPOAE test results of rats in each group before and after salicylate administration
造模成功后,運(yùn)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)各組耳蝸中DAPK1蛋白表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)DAPK1在對(duì)照組和水楊酸鈉組的大鼠耳蝸中均有表達(dá),主要表達(dá)于螺旋神經(jīng)節(jié)(SNG)處,以及螺旋緣(SLM)、血管紋(StV)、Corti器(OC)也有一定表達(dá)。在圖5A正常對(duì)照組中各區(qū)域呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),圖5B水楊酸鈉組中呈弱陽(yáng)性表達(dá),5C空白陰性對(duì)照組中呈陰性表達(dá),其中實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組DAPK1表達(dá)明顯減少,發(fā)生DAPK1表達(dá)差異變化的區(qū)域與HE觀測(cè)到的水楊酸鈉誘導(dǎo)的耳蝸組織細(xì)胞損傷的部位大致相同,主要集中于SNG區(qū)域,這說(shuō)明水楊酸鈉致耳蝸SNG損傷的同時(shí)下調(diào)了該區(qū)域的DAPK1表達(dá),二者具有緊密關(guān)聯(lián)。進(jìn)行光密度計(jì)數(shù),正常對(duì)照組的平均光密度值(AOD)為0.022±0.002,水楊酸鈉組為0.012±0.003,采用獨(dú)立t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)水楊酸鈉組表達(dá)較正常對(duì)照組表達(dá)減少(t=8.687,P=0.000),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見(jiàn)圖6)。
圖5 免疫組化染色檢測(cè)各組DAPK1表達(dá)情況A正常對(duì)照組;B水楊酸鈉給藥組;C空白陰性對(duì)照組。紅色箭頭所示為SNG,藍(lán)色箭頭為OC,綠色箭頭為StV,黑色箭頭為SLM。A,B,C×200。Fig.5 Immunohistochemical staining for the expression of DAPK1 in each group A normal control group,B sodium salicylate administration group,C blank negative control group.The red arrow shows SNG,blue arrow is OC,green arrow is StV,black arrow is SLM.A,B,C×200.
圖6 各組大鼠耳蝸DAPK1表達(dá)平均光密度計(jì)數(shù)(AOD)control:對(duì)照組(n=10),SS:水楊酸鈉組(n=10),橫坐標(biāo)為組別,縱坐標(biāo)為AOD值,*P<0.01。Fig.6 Mean optical density count(AOD)of DAPK1 in the cochlea of each group was detected control:the control group(n=10),SS:the sodium salicylate administrator group(n=10),abscissa is group,ordinate isAOD value,*P<0.01.
提取DAPK1 mRNA OD260/OD280比值在1.7~2.0之間,熒光定量反應(yīng)曲線見(jiàn)圖7,計(jì)算2-△CT作為DAPK1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量,control組的相對(duì)表達(dá)量為1.03±0.33,SS組為0.10±0.04。采用獨(dú)立t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)水楊酸鈉組mRNA相對(duì)表達(dá)量較對(duì)照組表達(dá)減少(t=7.891,P=0.000),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見(jiàn)圖8),L.WEI等人曾發(fā)現(xiàn)耳蝸器官體外培養(yǎng)過(guò)程中,經(jīng)水楊酸鈉處理12h后PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)DAPK1基因下調(diào)[14],這與本研究關(guān)于耳蝸的動(dòng)物在體研究的結(jié)果相一致,均提示聽(tīng)覺(jué)耳蝸損傷伴隨DAPK1的下調(diào)。
圖7 熒光定量PCR反應(yīng)曲線A對(duì)照組擴(kuò)增曲線;B對(duì)照組溶解曲線;C為水楊酸鈉組擴(kuò)增曲線;D為水楊酸鈉組溶解曲線。對(duì)照組DAPK1 mRNA的△CT為4.54±0.56,水楊酸鈉組為7.94±0.62。Fig.7 Fluorescence quantitative PCR reaction curve A control curve of the control group;B dissolution curve of the control group;C amplification curve of the sodium salicylate group;D dissolution curve of the sodium salicylate group.The DAPK1 mRNA of the control group△CT was 4.54±0.56,and sodium salicylate group was 7.94±0.62.
圖8 各組DAPK1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量control:對(duì)照組(n=10),SS:水楊酸鈉組(n=10),橫坐標(biāo)為組別,縱坐標(biāo)為mRNA相對(duì)表達(dá)量,*P<0.01。Fig.8 Relative expression of DAPK1 mRNA in each group control:the control group,SS:the sodium salicylate group,abscissa is group,ordinate is mRNA relative expression,*P<0.01.
大劑量的水楊酸鈉可以對(duì)從耳蝸到中樞神經(jīng)的不同聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)層次造成聽(tīng)覺(jué)損害,尤其損傷耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié),造成耳鳴、聽(tīng)力下降和言語(yǔ)認(rèn)知能力減低。本研究通過(guò)電生理檢測(cè)發(fā)現(xiàn)SS組的ABR閾移變大、DP幅度下降,說(shuō)明水楊酸鈉給藥造成動(dòng)物模型聽(tīng)覺(jué)損傷。通過(guò)形態(tài)學(xué)方法觀測(cè)耳蝸組織切片,發(fā)現(xiàn)SS給藥后耳蝸的細(xì)胞損傷主要在SNG區(qū)域,Corti器也有一定程度萎縮,其余部位螺旋緣、血管紋等形態(tài)學(xué)變化并不明顯。而免疫組化、熒光定量PCR結(jié)果顯示SS組DAPK1的轉(zhuǎn)錄表達(dá)較control組顯著下調(diào),并且下調(diào)改變集中在耳蝸的螺旋神經(jīng)節(jié)(SNG)區(qū)域,以及螺旋緣(SLM)、血管紋(StV)、Corti器(OC),發(fā)生DAPK1表達(dá)差異變化的部位與HE觀測(cè)到的水楊酸鈉誘導(dǎo)的耳蝸組織細(xì)胞損傷的部位大致相同,均主要集中于SNG區(qū)域,這說(shuō)明水楊酸鈉致耳蝸SNG損傷的同時(shí)下調(diào)了該區(qū)域的DAPK1表達(dá),二者具有緊密關(guān)聯(lián)。L.WEI等人[14]也曾發(fā)現(xiàn)耳蝸SNG原代細(xì)胞體外培養(yǎng)過(guò)程中,經(jīng)水楊酸鈉處理12h后PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在螺旋神經(jīng)節(jié)損傷的同時(shí)SNG細(xì)胞中的DAPK1基因下調(diào),本研究的結(jié)果與其相一致。綜上所述,我們證實(shí)在動(dòng)物模型聽(tīng)覺(jué)損傷過(guò)程中,螺旋神經(jīng)節(jié)損傷的同時(shí)SNG細(xì)胞中的DAPK1表達(dá)下降,水楊酸鈉可能通過(guò)調(diào)節(jié)SNG中DAPK1的轉(zhuǎn)錄表達(dá)而損傷聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng),繼而造成耳鳴、聽(tīng)力下降和言語(yǔ)認(rèn)知能力減低等癥狀出現(xiàn)。
DAPK1具有在細(xì)胞凋亡和炎性調(diào)節(jié)的雙重作用。一方面,DAPK1作為γ-干擾素誘導(dǎo)的程序性細(xì)胞死亡的陽(yáng)性介質(zhì),在各類疾病研究中往往作為正性促凋亡因子,參與細(xì)胞凋亡通路[15]。而本課題組前期研究證實(shí)水楊酸鈉誘導(dǎo)SNG凋亡[16],結(jié)合DAPK1在水楊酸鈉模型中的下調(diào),DAPK1可能具有雙重凋亡調(diào)控作用,既可促進(jìn)凋亡,亦可抑制凋亡,但DAPK1負(fù)性調(diào)控凋亡的文章至今鮮有報(bào)道,尚需進(jìn)一步探討研究。另一方面,DAPK1扮演炎性調(diào)節(jié)角色,既具有產(chǎn)生IL-1β和IL-18等促炎信號(hào)傳導(dǎo)的作用,同時(shí)也可以負(fù)調(diào)控多種炎癥基因[17],例如DAPK1抑制腫瘤壞死因子-α(TNF-α)或脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的NF-κB活化和促炎細(xì)胞因子的表達(dá)[18],因此DAPK1在炎性反應(yīng)調(diào)節(jié)過(guò)程中對(duì)不同細(xì)胞類型和環(huán)境因素的改變將會(huì)做出不同的調(diào)節(jié)反應(yīng)。其中DAPK1作為抗炎因子參與多種疾病[8,19]。在DAPK敲除鼠模型中,LPS誘導(dǎo)NF-κB表達(dá),加劇了肺的炎癥反應(yīng)[20]。在腸道炎癥中,DAPK甲基化導(dǎo)致DAPK低表達(dá),使炎癥的嚴(yán)重程度增加[21]。
最新研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)炎癥是水楊酸鈉誘導(dǎo)聽(tīng)覺(jué)損傷的新機(jī)制,水楊酸鈉會(huì)導(dǎo)致多種炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-1在耳蝸中上調(diào)[22,23],而DAPK1作為抗炎因子可抑制多種炎癥因子,結(jié)合本研究發(fā)現(xiàn)DAPK1由于水楊酸鈉的耳毒性作用而表達(dá)下調(diào),我們不妨推測(cè)DAPK1在水楊酸鈉模型中對(duì)螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞扮演著抑制炎性反應(yīng)的角色,水楊酸鈉可能通過(guò)下調(diào)DAPK1而使耳蝸的促炎因子過(guò)表達(dá),造成耳蝸的炎性反應(yīng),繼而導(dǎo)致聽(tīng)覺(jué)損傷。因此,我們認(rèn)為DAPK1參與水楊酸鈉致聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)損傷繼而發(fā)生耳鳴、聽(tīng)力下降的過(guò)程,尤其是螺旋神經(jīng)節(jié)的損傷。并推測(cè)水楊酸鈉可能通過(guò)下調(diào)DAPK1誘導(dǎo)耳蝸炎癥因子的產(chǎn)生來(lái)完成這個(gè)過(guò)程,但其具體調(diào)節(jié)機(jī)制仍需進(jìn)一步探究。