翟思佳 黃巧 廖行偉 劉宇超 尹時(shí)華

廣西醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科(南寧530000)

水楊酸鈉作為臨床常用藥品之一，特別是在西方國(guó)家被廣泛大量使用。大劑量的水楊酸鈉可以對(duì)從耳蝸到中樞神經(jīng)的不同聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)層次造成聽(tīng)覺(jué)損害，對(duì)耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)的損傷尤甚[1,2]，并可體現(xiàn)在聽(tīng)性腦干反應(yīng)（ABR）和畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射(DPOAE)的改變[3,4]。水楊酸鈉對(duì)聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)毒副作用中最明顯的三大癥狀是耳鳴、聽(tīng)力下降和言語(yǔ)認(rèn)知能力減低[5]，長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)水楊酸鈉可以引起可逆性的耳鳴，有文獻(xiàn)報(bào)道給予水楊酸鈉200mg/日，持續(xù)兩周，即可建立耳鳴動(dòng)物模型[6]。目前對(duì)于水楊酸鈉的作用機(jī)制尚未完全明確，尚需進(jìn)一步研究。

死亡相關(guān)蛋白激酶1(death associated protein kinase 1，DAPK1)是一種鈣調(diào)蛋白調(diào)節(jié)的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，參與機(jī)體多種病理生理過(guò)程[7]，其缺失與癌癥、炎癥[8]、腦卒中[9]、動(dòng)脈粥樣硬化、阿爾茨海默病[10]等疾病密切相關(guān)。那么DAPK1是否也參與了在水楊酸鈉誘導(dǎo)聽(tīng)覺(jué)損害的過(guò)程呢？為此，本研究采用水楊酸鈉誘導(dǎo)聽(tīng)覺(jué)損傷建立大鼠模型，通過(guò)ABR、DPOAE等電生理方法、HE染色及免疫組化等形態(tài)學(xué)方法檢測(cè)耳蝸的病理生理變化；基于DAPK1的轉(zhuǎn)錄表達(dá)情況，探討水楊酸鈉能否調(diào)控DAPK1表達(dá)。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

40只耳廓反應(yīng)靈敏，未暴露于噪聲及耳毒性藥物環(huán)境的健康雄性SD大鼠(體重約300 g)購(gòu)自廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.1.2 主要試劑

DAPK1兔抗鼠多克隆抗體購(gòu)自boster公司；SBAC二抗試劑盒購(gòu)自boster公司；TRIZOL購(gòu)自TaKaRa公司；逆轉(zhuǎn)錄盒與熒光定量PCR試劑盒均購(gòu)于天根生化科技有限公司。

2.1 研究方法

2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及造模

實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行雙側(cè)ABR和DPOAE測(cè)試，選取反應(yīng)閾小于40dB和耳聲發(fā)射篩查通過(guò)的大鼠40只，隨機(jī)分為兩組，每組20只。A組為等量生理鹽水對(duì)照組；B組為水楊酸鈉給藥實(shí)驗(yàn)組，給藥方式為腹腔注射。水楊酸鈉注射量為350mg/kg/d，連續(xù)注射7天。

2.1.2 ABR檢測(cè)

于實(shí)驗(yàn)前及給藥結(jié)束后動(dòng)物處死前對(duì)對(duì)照組及水楊酸鈉組大鼠雙耳分別進(jìn)行ABR和DPOAE測(cè)試。麻醉后的大鼠置于隔聲室,記錄電極扎入額頂正中，參考電極接同側(cè)耳廓，鼻尖接地。click短聲刺激，刺激率21次／秒，帶通濾波300～3000Hz，觀察時(shí)程15ms，疊加次數(shù)1024次,強(qiáng)度從90dB SPL開(kāi)始遞減,以能引出可分辨Ⅱ波的最小刺激強(qiáng)度為ABR反應(yīng)閾，并重復(fù)檢測(cè)2次。

2.1.3 DPOAE檢測(cè)

于實(shí)驗(yàn)前及給藥結(jié)束后動(dòng)物處死前對(duì)對(duì)照組及水楊酸鈉組大鼠雙耳分別進(jìn)行DPOAE測(cè)試。麻醉后的大鼠置于隔聲室,刺激聲強(qiáng)度L1=65dB SPL,L2=70dB SPL,取2k、3k、4k、6k、8k、10k共6個(gè)頻率點(diǎn)進(jìn)行測(cè)試,記錄各頻率左、右耳的平均DPOAE反應(yīng)幅值。

2.1.4 標(biāo)本取材及切片制備

最后一次水楊酸鈉給藥12h后，待大鼠麻醉充分后，打開(kāi)胸腔進(jìn)行心臟灌注，待眼珠、四肢末端發(fā)白后快速斷頭，取出聽(tīng)泡后剝離出耳蝸，在解剖顯微鏡下于蝸尖處挑開(kāi)小孔，用1mL注射器由蝸?lái)敼嘧?%多聚甲醛固定液，再將標(biāo)本置于4%多聚甲醛中，在4℃冰箱內(nèi)固定48h。隨后將耳蝸置于10%EDTA溶液室溫脫鈣1個(gè)月，隔天更換一次脫鈣液。乙醇梯度脫水、二甲苯透明、石蠟定向包埋后平行耳蝸縱軸連續(xù)切片，片厚4μm。

2.1.5 HE染色

石蠟切片置于60℃烤箱30min，將切片取出進(jìn)行二甲苯脫蠟和梯度酒精水化；蒸餾水沖洗，蘇木素染色1min，水洗；蒸餾水浸泡1min；1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，自來(lái)水返藍(lán)30min，伊紅染色2min；梯度酒精脫水，二甲苯透明，晾干封片，鏡檢。

2.1.6 免疫組化

切片常規(guī)脫蠟后，用過(guò)氧化物室溫孵育10分鐘以滅活內(nèi)源性酶，蒸餾水洗3次。然后進(jìn)行抗原修復(fù)：將切片浸入EDTA修復(fù)液中,微波爐中高火加熱至沸騰后斷電，間隔1-5min，中高火8min，自然冷卻，PBS洗三次。滴加封閉液于37℃放置30分鐘，甩去多余液體。滴加稀釋比為1:25的一抗（空白對(duì)照組在此步驟以PBS緩沖液代替一抗進(jìn)行孵育），37℃2小時(shí)，PBS洗7分鐘×3次。滴加二抗，37℃30分鐘，PBS洗7分鐘×3次。滴加試劑SABC,37℃30分鐘，PBS洗7分鐘×3次。使用DAB顯色劑室溫顯色，蒸餾水洗滌。蘇木素復(fù)染，酒精分化，反藍(lán)，封片。顯微鏡觀察。細(xì)胞胞漿有棕黃色顆粒者為陽(yáng)性表達(dá)，無(wú)棕黃色者為陰性表達(dá)。在200倍鏡視野下拍照，采用Image-Pro Plus6.0圖像分析軟件測(cè)定單位面積陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)的平均光密度值（Average optical densities，AOD）。

2.1.7 RNA提取

將大鼠麻醉后迅速取出雙側(cè)耳蝸，置入RNA保存液中，在解剖顯微鏡下剝離蝸殼，取出膜迷路組織，迅速放入已加入300μl TRIZOL的1.5mLEP管中，用玻璃研磨棒在EP管中快速研磨碎，另加入700μl TRIZOL，冰上放置10min。4℃ 12000g，離心5min，吸取上清液到另一無(wú)酶EP管中，加入200μl氯仿，震蕩15s，冰上靜置5min。4℃ 12000g，離心15min，小心吸取上層清液入新的無(wú)酶EP管中，切勿吸取到中間層。耳蝸組織中膠原含量高，本實(shí)驗(yàn)采用mRNA改良提取法：用200μl異丙醇與200μl高鹽溶液（0.8mol/L檸檬酸鈉與1.2mol/L NaCl的混合液）沉淀RNA，提高RNA純度，顛倒混勻后冰上靜置10min。4℃12000g離心10min，棄上清保留沉淀，加入75%乙醇1mL洗滌沉淀。4℃12000g離心5min，倒去乙醇，用小槍頭吸取殘留液體，室溫晾干，然后將RNA溶于無(wú)酶水中，微量核酸蛋白檢測(cè)儀測(cè)定RNA濃度，OD260/OD280比值必須在1.7～2.0之間。

2.1.8 熒光定量PCR

將mRNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，RT-PCR檢測(cè)各樣本DAPK1表達(dá)，反應(yīng)條件:95℃30s，95℃5s，56℃30s，72℃30s，總共38個(gè)循環(huán)。以GPHAD為內(nèi)參對(duì)照，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，重復(fù)3次，計(jì)算平均值。引物序列:DAPK1 F:5'-AAGGCCTCCTCTGTGTTCAAG-3'，R:5'-CCCTTGCACGTCAGTCCATAA-3'。GPHAD F:5'-AGTGCCAGCCTCGTCTCATA-3'；R:5'-TGAACTTGCCGTGGGTAGAG3-3'。

2 結(jié)果

2.1 原給藥后各組動(dòng)物ABR閾值比較

用ABR評(píng)估給藥前后各組大鼠的聽(tīng)力情況（如圖1及圖2）。給藥前大鼠閾值為31.79±4.13 dB SPL，造模第7天對(duì)照組動(dòng)物ABR閾值為32.14±3.78 dB SPL，實(shí)驗(yàn)組為50±4.8dB SPL，給藥前、后對(duì)照組聽(tīng)力閾值變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而給藥后水楊酸鈉組大鼠聽(tīng)閾較給藥前及對(duì)照組均顯著升高,采用獨(dú)立t檢驗(yàn)，t=-10.931，P＜0.001。且隨給聲刺激強(qiáng)度減小，各波潛伏期延長(zhǎng)，波形分化逐漸變差，至閾值以下，波形不能辨認(rèn)。這與吳莎[11]、陳抗松[12]等人的研究結(jié)果一致，大劑量注射水楊酸鈉明顯影響大鼠ABR閾值及波形，說(shuō)明造模成功，大劑量水楊酸鈉對(duì)大鼠聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)造成了一定損傷。

圖1 水楊酸鈉給藥前后各組大鼠ABR檢測(cè)結(jié)果波形變化A動(dòng)物給藥前的測(cè)試波形；B給藥后對(duì)照組動(dòng)物動(dòng)物ABR波形；C給藥后水楊酸鈉組動(dòng)物ABR波形。Fig.1 Waveform changes in ABR test results of rats in each group before and after salicylate administration.A shows the test waveform before animal administration;B shows the waveform of ABR in the control animal after administration;C is the the ABR waveform of the sodium salicylate group animal after administration.

圖2 水楊酸鈉給藥前后各組ABR反應(yīng)閾檢測(cè)情況（n=40,control group為對(duì)照組，SS group為水楊酸鈉組；橫坐標(biāo)為水楊酸鈉給藥時(shí)間，縱坐標(biāo)為ABR聽(tīng)力閾值。給藥后control組動(dòng)物ABR閾值為32.14±3.78 dB SPL，SS組為50±4.8dB SPL，SS組較control組顯著升高，且P＜0.01,t=-10.931，P=0.000）。Fig.2 Detection of ABR response threshold before and after sodium salicylate administration(n=40,SS group is sodium salicylate group;abscissa is sodium salicylate administration time,ordinate is ABR hearing threshold.After administration,the ABR threshold of the control group was 32.14±3.78 dB SPL,and the SS group was 50±4.8dB SPL.The SS group was significantly higher than the control group,and P＜0.01 t=-10.931，P=0.000).

2.2 原給藥后各組動(dòng)物DPOAE值比較

于給藥前選擇耳聲發(fā)射篩查通過(guò)的大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，給藥結(jié)束后再次對(duì)各組大鼠進(jìn)行耳聲發(fā)射檢測(cè)，采用獨(dú)立t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)造模7天后水楊酸鈉組大鼠較給藥前及對(duì)照組2k（t=3.131,P=0.004）、3k（t=2.909,P=0.008）、4k（t=3.530 P=0.002）、6K（t=2.340,P=0.029）、8k（t=3.676,P=0.001）DPOAE幅值顯著下降，而對(duì)照組給藥前后DPOAE幅值無(wú)明顯變化，P＞0.05（如表1與圖3所示），提示大劑量水楊酸鈉給藥造成了聽(tīng)力損失，聽(tīng)覺(jué)損傷[13]。

圖3 水楊酸鈉給藥前后各組DPOAE檢測(cè)情況（before modeling為給藥前大鼠(n=40),control group為對(duì)照組(n=20)，SS-group為水楊酸鈉組(n=20)；橫坐標(biāo)為耳聲發(fā)射頻率，縱坐標(biāo)為DP值。給藥后水楊酸鈉組較給藥前及對(duì)照組2k（t=3.131,P=0.004）、3k（t=2.909,P=0.008）、4k（t=3.530 P=0.002）、6k（t=2.340,P=0.029）、8k（t=3.676,P=0.001）DPOAE幅值顯著下降，且P＜0.05；而對(duì)照組較給藥前DPOAE幅值無(wú)明顯變化，P＞0.05。）Fig.3 Detection of DPOAE in each group before and after salicylate administration(SS group is sodium salicylate group;abscissa is DPOAE frequency,ordinate is DP value.The amplitude of DPOAE in the SS group(n=20)was significantly lower than animals before SS administrator(n=40)and the control group(n=20)in 2k（t=3.131,P=0.004）,3k（t=2.909,P=0.008）,4k（t=3.530 P=0.002）,6k（t=2.340,P=0.029）,8k（t=3.676,P=0.001）,and P＜0.05.However,the control group had no significant change in the amplitude of DPOAE compared to animals before modeling,P＞0.05.

2.3 HE染色觀測(cè)給藥后各組動(dòng)物耳蝸損傷情況

造模7d后，通過(guò)HE染色觀察各組大鼠耳蝸損傷情況，可以觀察到對(duì)照組耳蝸結(jié)構(gòu)正常（如圖4A）；而水楊酸鈉組耳蝸SNG細(xì)胞明顯變形，移位，部分溶解消失，Corti器也存在有一定程度的細(xì)胞萎縮，螺旋緣、血管紋未見(jiàn)明顯變化（如圖4B）。說(shuō)明造模后水楊酸鈉組大鼠較對(duì)照組的顯著損傷主要集中在SNG區(qū)域，大劑量注射水楊酸鈉明顯影響大鼠聽(tīng)覺(jué)器官耳蝸。

圖4 HE染色觀察各組耳蝸損傷情況A箭頭所指為給藥后對(duì)照組耳蝸SNG區(qū)域；B箭頭所指為給藥后水楊酸鈉組耳蝸SNG區(qū)域；C箭頭所指為給藥后對(duì)照組Corti器；D箭頭所指為水楊酸鈉組Corti器。A，B×400；C，D×200。Fig.4 HE staining was used to observe the cochlear injury in each group A arrow indicates the cochlear SNG area of the control group after administration;B arrow indicates the cochlea SNG area of sodium salicylate group after administration.;C arrows refer to the Corti device in the control group;D arrows refer to the Corti device in the sodium salicylate group.A,B×400;C,D×200.)

表1 水楊酸鈉給藥前后各組大鼠耳聲發(fā)射檢測(cè)結(jié)果變化Table 1 Changes in DPOAE test results of rats in each group before and after salicylate administration

2.4 免疫組化檢測(cè)各組大鼠耳蝸中DAPK1蛋白表達(dá)

造模成功后，運(yùn)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)各組耳蝸中DAPK1蛋白表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)DAPK1在對(duì)照組和水楊酸鈉組的大鼠耳蝸中均有表達(dá)，主要表達(dá)于螺旋神經(jīng)節(jié)(SNG)處，以及螺旋緣(SLM)、血管紋（StV）、Corti器(OC)也有一定表達(dá)。在圖5A正常對(duì)照組中各區(qū)域呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，圖5B水楊酸鈉組中呈弱陽(yáng)性表達(dá)，5C空白陰性對(duì)照組中呈陰性表達(dá)，其中實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組DAPK1表達(dá)明顯減少，發(fā)生DAPK1表達(dá)差異變化的區(qū)域與HE觀測(cè)到的水楊酸鈉誘導(dǎo)的耳蝸組織細(xì)胞損傷的部位大致相同，主要集中于SNG區(qū)域，這說(shuō)明水楊酸鈉致耳蝸SNG損傷的同時(shí)下調(diào)了該區(qū)域的DAPK1表達(dá)，二者具有緊密關(guān)聯(lián)。進(jìn)行光密度計(jì)數(shù)，正常對(duì)照組的平均光密度值（AOD）為0.022±0.002，水楊酸鈉組為0.012±0.003,采用獨(dú)立t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)水楊酸鈉組表達(dá)較正常對(duì)照組表達(dá)減少（t=8.687，P=0.000），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見(jiàn)圖6）。

圖5 免疫組化染色檢測(cè)各組DAPK1表達(dá)情況A正常對(duì)照組；B水楊酸鈉給藥組；C空白陰性對(duì)照組。紅色箭頭所示為SNG，藍(lán)色箭頭為OC，綠色箭頭為StV，黑色箭頭為SLM。A,B,C×200。Fig.5 Immunohistochemical staining for the expression of DAPK1 in each group A normal control group,B sodium salicylate administration group,C blank negative control group.The red arrow shows SNG,blue arrow is OC,green arrow is StV,black arrow is SLM.A,B,C×200.

圖6 各組大鼠耳蝸DAPK1表達(dá)平均光密度計(jì)數(shù)（AOD）control：對(duì)照組(n=10)，SS：水楊酸鈉組(n=10)，橫坐標(biāo)為組別，縱坐標(biāo)為AOD值，*P＜0.01。Fig.6 Mean optical density count(AOD)of DAPK1 in the cochlea of each group was detected control:the control group(n=10),SS:the sodium salicylate administrator group(n=10),abscissa is group,ordinate isAOD value,*P＜0.01.

2.5 熒光定量PCR

提取DAPK1 mRNA OD260/OD280比值在1.7～2.0之間，熒光定量反應(yīng)曲線見(jiàn)圖7，計(jì)算2-△CT作為DAPK1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量，control組的相對(duì)表達(dá)量為1.03±0.33，SS組為0.10±0.04。采用獨(dú)立t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)水楊酸鈉組mRNA相對(duì)表達(dá)量較對(duì)照組表達(dá)減少（t=7.891，P=0.000），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見(jiàn)圖8），L.WEI等人曾發(fā)現(xiàn)耳蝸器官體外培養(yǎng)過(guò)程中，經(jīng)水楊酸鈉處理12h后PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)DAPK1基因下調(diào)[14]，這與本研究關(guān)于耳蝸的動(dòng)物在體研究的結(jié)果相一致，均提示聽(tīng)覺(jué)耳蝸損傷伴隨DAPK1的下調(diào)。

圖7 熒光定量PCR反應(yīng)曲線A對(duì)照組擴(kuò)增曲線；B對(duì)照組溶解曲線；C為水楊酸鈉組擴(kuò)增曲線；D為水楊酸鈉組溶解曲線。對(duì)照組DAPK1 mRNA的△CT為4.54±0.56，水楊酸鈉組為7.94±0.62。Fig.7 Fluorescence quantitative PCR reaction curve A control curve of the control group;B dissolution curve of the control group;C amplification curve of the sodium salicylate group;D dissolution curve of the sodium salicylate group.The DAPK1 mRNA of the control group△CT was 4.54±0.56,and sodium salicylate group was 7.94±0.62.

圖8 各組DAPK1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量control:對(duì)照組(n=10)，SS:水楊酸鈉組(n=10)，橫坐標(biāo)為組別，縱坐標(biāo)為mRNA相對(duì)表達(dá)量，*P＜0.01。Fig.8 Relative expression of DAPK1 mRNA in each group control:the control group,SS:the sodium salicylate group,abscissa is group,ordinate is mRNA relative expression,*P＜0.01.

3 討論

大劑量的水楊酸鈉可以對(duì)從耳蝸到中樞神經(jīng)的不同聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)層次造成聽(tīng)覺(jué)損害，尤其損傷耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)，造成耳鳴、聽(tīng)力下降和言語(yǔ)認(rèn)知能力減低。本研究通過(guò)電生理檢測(cè)發(fā)現(xiàn)SS組的ABR閾移變大、DP幅度下降，說(shuō)明水楊酸鈉給藥造成動(dòng)物模型聽(tīng)覺(jué)損傷。通過(guò)形態(tài)學(xué)方法觀測(cè)耳蝸組織切片，發(fā)現(xiàn)SS給藥后耳蝸的細(xì)胞損傷主要在SNG區(qū)域，Corti器也有一定程度萎縮，其余部位螺旋緣、血管紋等形態(tài)學(xué)變化并不明顯。而免疫組化、熒光定量PCR結(jié)果顯示SS組DAPK1的轉(zhuǎn)錄表達(dá)較control組顯著下調(diào),并且下調(diào)改變集中在耳蝸的螺旋神經(jīng)節(jié)(SNG)區(qū)域，以及螺旋緣(SLM)、血管紋（StV）、Corti器(OC)，發(fā)生DAPK1表達(dá)差異變化的部位與HE觀測(cè)到的水楊酸鈉誘導(dǎo)的耳蝸組織細(xì)胞損傷的部位大致相同，均主要集中于SNG區(qū)域，這說(shuō)明水楊酸鈉致耳蝸SNG損傷的同時(shí)下調(diào)了該區(qū)域的DAPK1表達(dá)，二者具有緊密關(guān)聯(lián)。L.WEI等人[14]也曾發(fā)現(xiàn)耳蝸SNG原代細(xì)胞體外培養(yǎng)過(guò)程中，經(jīng)水楊酸鈉處理12h后PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在螺旋神經(jīng)節(jié)損傷的同時(shí)SNG細(xì)胞中的DAPK1基因下調(diào)，本研究的結(jié)果與其相一致。綜上所述，我們證實(shí)在動(dòng)物模型聽(tīng)覺(jué)損傷過(guò)程中，螺旋神經(jīng)節(jié)損傷的同時(shí)SNG細(xì)胞中的DAPK1表達(dá)下降，水楊酸鈉可能通過(guò)調(diào)節(jié)SNG中DAPK1的轉(zhuǎn)錄表達(dá)而損傷聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)，繼而造成耳鳴、聽(tīng)力下降和言語(yǔ)認(rèn)知能力減低等癥狀出現(xiàn)。

DAPK1具有在細(xì)胞凋亡和炎性調(diào)節(jié)的雙重作用。一方面，DAPK1作為γ-干擾素誘導(dǎo)的程序性細(xì)胞死亡的陽(yáng)性介質(zhì)，在各類疾病研究中往往作為正性促凋亡因子，參與細(xì)胞凋亡通路[15]。而本課題組前期研究證實(shí)水楊酸鈉誘導(dǎo)SNG凋亡[16]，結(jié)合DAPK1在水楊酸鈉模型中的下調(diào)，DAPK1可能具有雙重凋亡調(diào)控作用，既可促進(jìn)凋亡，亦可抑制凋亡，但DAPK1負(fù)性調(diào)控凋亡的文章至今鮮有報(bào)道，尚需進(jìn)一步探討研究。另一方面，DAPK1扮演炎性調(diào)節(jié)角色，既具有產(chǎn)生IL-1β和IL-18等促炎信號(hào)傳導(dǎo)的作用，同時(shí)也可以負(fù)調(diào)控多種炎癥基因[17]，例如DAPK1抑制腫瘤壞死因子-α（TNF-α）或脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的NF-κB活化和促炎細(xì)胞因子的表達(dá)[18]，因此DAPK1在炎性反應(yīng)調(diào)節(jié)過(guò)程中對(duì)不同細(xì)胞類型和環(huán)境因素的改變將會(huì)做出不同的調(diào)節(jié)反應(yīng)。其中DAPK1作為抗炎因子參與多種疾病[8,19]。在DAPK敲除鼠模型中，LPS誘導(dǎo)NF-κB表達(dá)，加劇了肺的炎癥反應(yīng)[20]。在腸道炎癥中，DAPK甲基化導(dǎo)致DAPK低表達(dá)，使炎癥的嚴(yán)重程度增加[21]。

最新研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)炎癥是水楊酸鈉誘導(dǎo)聽(tīng)覺(jué)損傷的新機(jī)制，水楊酸鈉會(huì)導(dǎo)致多種炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-1在耳蝸中上調(diào)[22,23]，而DAPK1作為抗炎因子可抑制多種炎癥因子，結(jié)合本研究發(fā)現(xiàn)DAPK1由于水楊酸鈉的耳毒性作用而表達(dá)下調(diào)，我們不妨推測(cè)DAPK1在水楊酸鈉模型中對(duì)螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞扮演著抑制炎性反應(yīng)的角色，水楊酸鈉可能通過(guò)下調(diào)DAPK1而使耳蝸的促炎因子過(guò)表達(dá)，造成耳蝸的炎性反應(yīng)，繼而導(dǎo)致聽(tīng)覺(jué)損傷。因此，我們認(rèn)為DAPK1參與水楊酸鈉致聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)損傷繼而發(fā)生耳鳴、聽(tīng)力下降的過(guò)程，尤其是螺旋神經(jīng)節(jié)的損傷。并推測(cè)水楊酸鈉可能通過(guò)下調(diào)DAPK1誘導(dǎo)耳蝸炎癥因子的產(chǎn)生來(lái)完成這個(gè)過(guò)程，但其具體調(diào)節(jié)機(jī)制仍需進(jìn)一步探究。