陳 瑜，金 雷，陳 思，郭遠(yuǎn)明，朱敬萍

（浙江海洋大學(xué)海洋與漁業(yè)研究所，浙江省海洋水產(chǎn)研究所，浙江省海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江舟山 316021）

厚殼貽貝Mytilus coruscus，其干制品為淡菜，雅稱“東海夫人”。厚殼貽貝中含蛋白質(zhì)10.2%～14.6%，還含有各種微量元素，如VB2、VB12、VA、VD、VE 等，又含有人體所需的金屬元素鈣、鐵、鋅等以及各種氨基酸等，其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值之高，藥用范圍之廣，深受人們喜愛。近年來(lái)，厚殼貽貝產(chǎn)業(yè)依靠其顯著的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益、生態(tài)效益，已當(dāng)之無(wú)愧地成為了嵊泗縣重要海洋支柱產(chǎn)業(yè)。嵊泗縣一直將助推貽厚殼貝特色產(chǎn)業(yè)發(fā)展作為重點(diǎn)工作來(lái)抓，通過(guò)綜合施策，精心扶持，全力打造嵊泗傳統(tǒng)優(yōu)勢(shì)產(chǎn)業(yè)“金名片”。目前，全縣共有厚殼貽貝養(yǎng)殖戶860 家，貽貝深加工生產(chǎn)線24 條，解決就業(yè)6 000 余人。2017 年，嵊泗全縣厚殼貽貝養(yǎng)殖面積有2.03 hm2，占養(yǎng)殖面積的90.6%，總產(chǎn)量逾12×104t，總產(chǎn)值達(dá)4 億多元[1]。嵊泗厚殼貽貝的養(yǎng)殖區(qū)域主要集中在枸杞、嵊山、壁下、綠華四島。

然而，厚殼貽貝屬于濾食性生物，在濾食餌料生物的同時(shí)，會(huì)將水體中的微生物吸入體內(nèi)，食用病原微生物寄生的貝類極易引發(fā)疾病，從而暴發(fā)貝類中毒事件。同時(shí)，厚殼貽貝還會(huì)富集養(yǎng)殖水體及餌料中的重金屬，一旦污染或進(jìn)入食物鏈就很難消除，這些都增加了其食用風(fēng)險(xiǎn)。近年來(lái)我國(guó)貝類中毒的事件頻繁發(fā)生，對(duì)消費(fèi)者的身體健康、生命安全和貝類產(chǎn)品出口構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅，對(duì)國(guó)家和人民群眾造成重大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。本研究于2016-2018 年對(duì)嵊泗縣的枸杞、嵊山、壁下、綠華四島養(yǎng)殖厚殼貽貝抽樣監(jiān)測(cè)，了解嵊泗近年厚殼貽貝生產(chǎn)的衛(wèi)生安全狀況，旨在對(duì)其食用安全性做出正確的評(píng)價(jià)和為各種中毒事件的處理提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 采樣站位的設(shè)置

于2016-2018 年連續(xù)3 年對(duì)嵊泗縣境內(nèi)枸杞、嵊山、壁下、綠華四島進(jìn)行采樣，采樣時(shí)間選擇在6 月和8 月，這兩個(gè)時(shí)間段分別為貝類的生長(zhǎng)期和收獲期，監(jiān)測(cè)結(jié)果作為劃型依據(jù)，能反映貝類的整體質(zhì)量狀況。共設(shè)30 個(gè)站位點(diǎn)，采集樣品數(shù)量180 個(gè)，見表1。

表1 嵊泗四島貝類監(jiān)測(cè)站點(diǎn)Tab.1 Shellfish monitoring stations on four islands in Shengsi

1.2 材料與試劑

采集嵊泗貝類養(yǎng)殖區(qū)的厚殼貽貝，每個(gè)站位點(diǎn)采集1 個(gè)樣品，每個(gè)樣品抽樣量為(1 000±200) g。樣品先用海水洗凈后，裝在聚乙烯袋中冷藏，保存于泡沫箱中，盡快送回實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)[3]。

月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯、EC 肉湯（E.coli Broth）、伊紅美藍(lán)（EMB）瓊脂、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、平板計(jì)數(shù)瓊脂（PCA）、HBI 生化鑒定試劑盒均購(gòu)自青島海博生物技術(shù)有限公司（所有培養(yǎng)基均需121 ℃高壓滅菌20 min）[4]；硝酸(優(yōu)級(jí)純及以上)、丙酮、無(wú)水乙醚、吐溫-60、氯化鈉均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；鉛和鎘標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液(1 000 μg·mL-1)均購(gòu)自國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心；實(shí)驗(yàn)用水，符合GB/T 6682-2008 二級(jí)水要求。

1.3 主要儀器及型號(hào)

隔水式恒溫培養(yǎng)箱GHP-9270；智能光照培養(yǎng)箱GXZ；生物安全柜BSC-1000ⅡA2；立式高壓蒸汽滅菌器LDZX-30FB；原子吸收光譜儀 安捷倫AA240；微波消解儀ETHOS 1；微控?cái)?shù)顯電熱板及蒸酸架EH20A plus；其余均為試驗(yàn)室常用設(shè)備。

1.4 檢測(cè)方法和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)及健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方法

重金屬及貝類毒素測(cè)定前直接將貝類活體剝殼，取肉進(jìn)行勻漿后測(cè)定[5]。

1.4.1 大腸桿菌和菌落總數(shù)的測(cè)定

大腸桿菌按照GB 4789.38-2012 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸埃希氏菌計(jì)數(shù)。稱取25 g 貝肉，放入盛有225 mL 磷酸鹽緩沖液中均質(zhì)，制作成1:10 的樣品勻液。選擇3 個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液，每個(gè)稀釋度接種3 管，然后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。經(jīng)過(guò)初發(fā)酵、復(fù)發(fā)酵和生理生化試驗(yàn)，計(jì)數(shù)陽(yáng)性管數(shù)，查MPN 表。

菌落總數(shù)按照GB 4789.2-2010 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定。稱取25 g 貝肉，放入盛有225 mL磷酸鹽緩沖液中均質(zhì)，制作成1:10 的樣品勻液。然后，選擇合適的3 個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度做2 個(gè)平板，用滅菌冷卻至46 ℃的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，（30±1）℃培養(yǎng)（72±3）h。選擇菌落數(shù)在30～300 CFU 之間連續(xù)兩個(gè)稀釋度的平板，按公式計(jì)算2 個(gè)平板菌落數(shù)的平均值[4]。

1.4.2 重金屬的測(cè)定

采用微波消解進(jìn)行前處理，稱取0.5 g 左右貝肉于微波消解罐中，加入5.0 mL 硝酸輕搖后靜置過(guò)夜，按設(shè)定的消解工作程序進(jìn)行消解。消解完畢后將消解罐置于控溫蒸酸架上趕酸至其內(nèi)樣液剩1～2 mL 左右。冷卻后將消解液移入25 mL 具塞比色管內(nèi)用蒸餾水稀釋至刻度線[5]，待測(cè)。本實(shí)驗(yàn)采用GB 5009.268-2016 中第一法ICP-MS 法進(jìn)行鉛、鎘含量的測(cè)定。

1.4.3 腹瀉性貝類毒素測(cè)定

腹瀉性貝類毒素按照GB 5009.212-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)貝類中腹瀉性貝類毒素的測(cè)定中小鼠生物法進(jìn)行測(cè)定。用丙酮提取貝類中腹瀉性貝類毒素，經(jīng)無(wú)水乙醚分配，減壓蒸干后，再以含1%吐溫-60 的生理鹽水為分散介質(zhì)，制成混懸液。將混懸液注射入小鼠腹腔，觀察小鼠存活情況，計(jì)算其毒力。

1.4.4 鉛和鎘污染程度評(píng)價(jià)方法

為客觀評(píng)價(jià)2016-2018 年嵊泗4 島養(yǎng)殖貽貝中鉛和鎘的污染程度，依據(jù)GB 2762-2017《食品中污染物限量》，采用單因子污染指數(shù)對(duì)貽貝樣品進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。按下式計(jì)算：

式中：Pi為單因子污染指數(shù)；Ci為水產(chǎn)品中可食部分中某種重金屬含量mg·kg-1；Si為該種水產(chǎn)品評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)值最高允許值mg·kg-1。

依據(jù)“海洋生物污染評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)”[6]，當(dāng)Pi＜0.2 時(shí)，表明該種重金屬含量處于正常范圍，為未污染水平；0.2≤Pi≤0.6 時(shí)，表明處于輕污染水平；0.6＜Pi＜1.0 時(shí)，為中度污染水平；Pi＞1.0 時(shí)，則為重度污染。

1.4.5 鉛和鎘健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型

美國(guó)環(huán)境保護(hù)署（USEPA）用靶標(biāo)危險(xiǎn)系數(shù)法（THQs）評(píng)估人體通過(guò)每日食物中攝取重金屬所造成的健康風(fēng)險(xiǎn)水平，按下式計(jì)算[7]：

式中：EF 為人群暴露頻率（365 d·a-1）；ED 為暴露年限（按人類平均壽命年齡76.34 計(jì)[8]）；FIR 為食物攝取率（根據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織FAO 的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，軟體類為每人9.8 g·d-1[9]）；c 為食物中的重金屬含量（mg·kg-1）；RFD 為每日參考劑量（鉛：0.004 mg·kg-1；鎘：0.001 mg·kg-1）WAB 為成人平均體重（按60 kg 計(jì)）；TA 為非致癌源的平均暴露時(shí)間(365 d·a-1×ED)。

假定人體攝入劑量等于吸收劑量，以測(cè)定的攝入量與參考劑量的比值作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，若THQ 比值＜1，一般評(píng)價(jià)暴露人群無(wú)明顯健康風(fēng)險(xiǎn)，反之則存在健康風(fēng)險(xiǎn)。

2 結(jié)果與討論

2.1 近3 年監(jiān)測(cè)結(jié)果比較

2.1.1 微生物監(jiān)測(cè)結(jié)果

根據(jù)農(nóng)業(yè)部《海水貝類養(yǎng)殖生產(chǎn)區(qū)劃型要求》，分析大腸桿菌3 年數(shù)據(jù)，在貝類養(yǎng)殖區(qū)中2016 年貝類樣品大腸桿菌指標(biāo)達(dá)一類標(biāo)準(zhǔn)為34 個(gè)，比例為56.7%，2017 年貝類樣品大腸桿菌指標(biāo)達(dá)一類標(biāo)準(zhǔn)為51個(gè)，比例為85.0%，2018 年貝類樣品大腸桿菌指標(biāo)達(dá)一類標(biāo)準(zhǔn)為52 個(gè)，比例為86.7%，2018 年與2016 年相比，上升了52.9%。查閱2017 和2018 年舟山市天氣氣候公報(bào)[11-12]發(fā)現(xiàn)2017 年舟山市年降水量平均為1 411.8 mm，同比上年減少173.5 mm，偏少11%；2018 年舟山市年降水量平均為1 345.6 mm，同比上年減少66.2 mm，偏少5%。因此分析原因，2017 和2018 年大腸桿菌指標(biāo)達(dá)一類區(qū)比例大幅上升可能與近年雨水較少，被雨水沖刷攜帶生活污水等地表徑流的流入量隨之減少，微生物生長(zhǎng)緩慢有關(guān)[13]。

2016 年和2017 年批次貝類樣品菌落總數(shù)指標(biāo)最高數(shù)值分別為4.7×105和1.1×105CFU·g-1，均小于5×105CFU·g-1的限量值[14]。而2018 年菌落總數(shù)最高數(shù)值為1.2×106CFU·g-1，并且有3 個(gè)樣品超過(guò)最大限量值。同時(shí)2018 年嵊泗縣養(yǎng)殖厚殼貽貝菌落總數(shù)均值最高，主要原因可能是當(dāng)年夏季枸杞島游客數(shù)量同比上年度增長(zhǎng)迅速，游客在短期內(nèi)的上升和海上活動(dòng)增加，污染了養(yǎng)殖區(qū)環(huán)境，導(dǎo)致2018 年菌落總數(shù)均值偏高，見表2。

表2 3 年嵊泗縣貽貝微生物監(jiān)測(cè)結(jié)果Tab.2 Monitoring results of mussel microorganisms in Shengsi county in recent three years

2.1.2 重金屬監(jiān)測(cè)結(jié)果

由圖1 可知，嵊泗縣養(yǎng)殖厚殼貽貝中鎘含量逐年下降，2018 年比2016 年下降了41.7%，鉛含量均值2017 年最低為0.056 mg·kg-1，2018 年略有回升，與2016 年相比下降37.5%。結(jié)合圖2 分析發(fā)現(xiàn)，四島中厚殼貽貝鉛含量均呈先下降后緩慢上升的趨勢(shì)，而鎘含量除枸杞島呈逐年下降趨勢(shì)外其他三島均與鉛含量變化趨勢(shì)相同。不難看出，正是因?yàn)?018 年枸杞島厚殼貽貝鎘含量的下降，導(dǎo)致2018 年厚殼貽貝鎘含量均值比2017 年低23.6%。180 個(gè)樣品鎘含量均符合《食品中污染物限量》（GB 2762-2017）要求，近3 年樣品最高含量值發(fā)生在2017 年，為1.9 mg·kg-1，與2016 年樣品最高含量值1.2 mg·kg-1相比，增加了58.3%。180 個(gè)樣品鉛含量均符合《食品中污染物限量》（GB 2762-2017）要求，近3 年樣品最高含量值發(fā)生在2018 年，為0.33 mg·kg-1，與2016 年樣品最高含量值0.24 mg·kg-1相比，略有上升。

圖1 3 年嵊泗縣厚殼貽貝中鎘、鉛含量平均值趨勢(shì)圖Fig.1 Analysis chart of Cd and Pb in mussels in Shengsi county from 2016-2018

2.1.3 腹瀉性貝類毒素監(jiān)測(cè)結(jié)果

近3 年經(jīng)檢測(cè)60 個(gè)厚殼貽貝樣品腹瀉性貝類毒素全部為未檢出，合格率100%，符合農(nóng)漁發(fā)[2018]5號(hào)文件要求。

2.2 四島厚殼貽貝衛(wèi)生監(jiān)測(cè)結(jié)果比較

2.2.1 微生物監(jiān)測(cè)結(jié)果

如表3 所示，2016-2018 年各島一類養(yǎng)殖區(qū)數(shù)量均有大幅提高，2017 年壁下和枸杞島一類養(yǎng)殖區(qū)個(gè)數(shù)達(dá)到100%；2018 年嵊山島和綠華島一類區(qū)個(gè)數(shù)同比上年增加57.3%和12.4%，壁下和枸杞島一類養(yǎng)殖區(qū)比例略有回落；對(duì)比菌落總數(shù)的數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，總的來(lái)看近3 年綠華和壁下兩島菌落總數(shù)均值相對(duì)較低，2018 年枸杞島有3 個(gè)樣品菌落總數(shù)超標(biāo)，超標(biāo)率達(dá)12.5%，導(dǎo)致枸杞島菌落總數(shù)平均值大幅上升。分析以上監(jiān)測(cè)結(jié)果的原因，2018 年壁下、枸杞兩島一類養(yǎng)殖區(qū)個(gè)數(shù)略有下降，菌落總數(shù)均值有所上升，可能與嵊泗縣旅游業(yè)發(fā)展，游客涌入人數(shù)逐年增加導(dǎo)致島上生活垃圾激增、海上活動(dòng)頻繁有關(guān)；由于嵊山和綠華島游客相對(duì)較少以及舟山市文明城市建設(shè)與整治生活垃圾工作的推進(jìn)，嵊山島一類養(yǎng)殖區(qū)逐年增加，2018年突破90%，綠華島亦有所增加。

表3 嵊泗縣四島貽貝微生物監(jiān)測(cè)結(jié)果Tab.3 Microbial monitoring results of mussels on four islands in Shengsi

2.2.2 重金屬監(jiān)測(cè)結(jié)果

研究嵊泗四島2016-2018 年養(yǎng)殖厚殼貽貝中重金屬變化，發(fā)現(xiàn)在2017 年鉛含量均為最低值，隨時(shí)間呈先下降后小幅回升趨于穩(wěn)定，并且在3 年內(nèi)，一直維持綠華、壁下、嵊山、枸杞四島貽貝鉛含量從低到高的規(guī)律；由圖2 可知，除枸杞島外，其余三島貽貝鎘含量亦呈先下降后小幅上升趨向穩(wěn)定，且枸杞島在2016 年和2017 年貽貝鎘含量均值為四島最高。枸杞島上有4 家水產(chǎn)企業(yè)，貽貝養(yǎng)殖區(qū)內(nèi)有少量航道，且是4 個(gè)島當(dāng)中旅游開發(fā)最早、游客數(shù)量最多的一個(gè)島，地區(qū)經(jīng)濟(jì)發(fā)展，生活污水、工業(yè)廢水、農(nóng)業(yè)面源污染物等排放入海，由于貝類對(duì)水體重金屬的富集作用，貽貝中重金屬含量相較其他3 島略高。然而到2018 年枸杞島貽貝鎘含量降至0.38 mg·kg-1，僅比壁下島高出0.07 mg·kg-1，推斷可能與2018 年舟山市倡導(dǎo)文明城市建設(shè)，該島整治工業(yè)廢水、農(nóng)業(yè)面源污染治理的推進(jìn)以及近年來(lái)廢水中鎘含量減少有關(guān)。

圖2 3 年嵊泗四島貽貝中鉛、鎘含量趨勢(shì)圖Fig.2 Trend map of Pb and Cd in Mussels on four islands in Shengsi from 2016-2018

2.2.3 鉛、鎘污染程度評(píng)價(jià)和健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

2.2.3.1 鉛、鎘污染程度評(píng)價(jià)

采用單因子評(píng)價(jià)模式對(duì)厚殼貽貝樣品的鉛、鎘含量水平進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示2017 年壁下島和嵊山島厚殼貽貝中鉛的污染指數(shù)Pi小于0.2，說(shuō)明厚殼貽貝樣品未受污染，2016 年枸杞島厚殼貽貝中鉛的污染指數(shù)Pi大于0.6，屬于中度污染水平，其他站點(diǎn)樣品Pi 均在0.2～0.6 范圍內(nèi)，判斷為鉛輕度污染；2017、2018年壁下島和2018 年枸杞島厚殼貽貝樣品鎘污染指數(shù)Pi小于0.2，說(shuō)明厚殼貽貝樣品未受污染，其他站點(diǎn)樣品Pi為0.2～0.6，為鎘輕度污染，見表4?？傮w而言，嵊泗縣厚殼貽貝中鉛和鎘受污染程度不高，屬于輕度污染水平，僅個(gè)別站點(diǎn)中鉛屬于中度污染水平。

表4 厚殼貽貝樣品中鉛、鎘污染因子的污染指數(shù)（Pi）Tab.4 The pollution (Pi) index of Pb and Cd pollution factors in mussel samples

2.2.3.2 鉛、鎘健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

由表5 可知，綠華、壁下、嵊山和枸杞島的養(yǎng)殖厚殼貽貝中鉛和鎘的THQ 均遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于1，說(shuō)明四島厚殼貽貝中鉛和鎘含量處于安全水平，無(wú)健康風(fēng)險(xiǎn)。

表5 嵊泗厚殼貽貝Pb、Cd 健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)(THQ)Tab.5 health risk assessment of heavy metals in mussels in Shengsi（THQ）

3 結(jié)論

本文分不同時(shí)間和不同島嶼對(duì)嵊泗縣厚殼貽貝養(yǎng)殖區(qū)衛(wèi)生現(xiàn)狀進(jìn)行調(diào)查分析，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)2016～2018年嵊泗縣貝類養(yǎng)殖區(qū)中厚殼貽貝樣品大腸桿菌指標(biāo)達(dá)一類區(qū)整體比例從2016 年的56.7%上升到2018 年的86.7%，提高了52.9%；綠華、嵊山島一類養(yǎng)殖區(qū)個(gè)數(shù)逐年增加，其它兩島在2017 年一類養(yǎng)殖區(qū)比例為100%，至2018 年稍有回落，總體趨于平穩(wěn)。養(yǎng)殖厚殼貽貝中鎘含量逐年下降，鉛含量呈先下降后緩慢上升的趨勢(shì)；分析嵊泗四島厚殼貽貝中重金屬含量，綠華和壁下2 島相對(duì)較低，4 個(gè)島厚殼貽貝中鉛含量均隨時(shí)間變化所呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)，與年度總體變化趨勢(shì)一致，綠華、壁下、嵊山3 島厚殼貽貝鎘含量隨時(shí)間變化呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)，枸杞島厚殼貽貝鎘含量呈逐年下降趨勢(shì)。通過(guò)對(duì)鉛、鎘污染程度評(píng)價(jià)和健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估發(fā)現(xiàn)除2016 年枸杞島厚殼貽貝中鉛的污染指數(shù)Pi＞0.6，屬于中度污染水平，其他站點(diǎn)樣品Pi≤0.6，說(shuō)明嵊泗縣厚殼貽貝中鉛和鎘受污染程度不高，屬于輕度污染水平。4 個(gè)島厚殼貽貝重金屬THQ＜1，說(shuō)明四島厚殼貽貝中鉛和鎘含量處于安全水平，無(wú)健康風(fēng)險(xiǎn)。通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不難看出，嵊泗縣厚殼貽貝養(yǎng)殖區(qū)的養(yǎng)殖環(huán)境在不斷改善，一類養(yǎng)殖區(qū)個(gè)數(shù)逐年提高，食用嵊泗厚殼貽貝引起的鉛和鎘的暴露較輕微，無(wú)明顯健康危險(xiǎn)[15]。