李俐睿，李敏，周瀟瀟，李桂黎，岳建國，張定

（四川省成都市動物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041）

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。主要感染牛、豬等偶蹄類動物，主要臨床特征為成年動物的口舌黏膜、皮膚、蹄部形成糜爛、潰瘍病灶，幼齡動物多因心肌炎而致死亡率升高。該病對生豬養(yǎng)殖業(yè)的危害極大，我國將其列為一類疫病，在《2017年國家動物疫病強制免疫計劃》文件中口蹄疫繼續(xù)作為強制免疫的病種。

為做好重大動物疫病的防疫工作，成都市于2019 年春秋兩季為管轄的15 個區(qū)（市）縣發(fā)放了豬O型口蹄疫疫苗，并進行集中免疫。為及時評估免疫效果，我們對所有發(fā)放該疫苗的區(qū)（市）縣的部分規(guī)模化養(yǎng)豬場、散養(yǎng)戶和屠宰廠的豬只進行血清樣品采集和疫抗體水平監(jiān)測。現(xiàn)報告如下：

1 材料

1.1 檢測試劑 豬O 型口蹄疫病毒抗體檢測ELISA試劑盒，無錫優(yōu)聯(lián)生物科技有限公司生產(chǎn)，批號：190403。

1.2 樣品 血清樣品采集自成都市管轄的15個區(qū)（市）縣的規(guī)?；i場、散養(yǎng)戶和屠宰廠，共計1 980份樣品。

2 方法

2.1 檢測準備

2.1.1 在使用前，所有的試劑盒組分都必須恢復(fù)到室溫（20～25 ℃）。

2.1.2 洗滌液稀釋：使用前，20倍洗滌液應(yīng)搖動至沉淀的鹽溶解（最好在不超過40 ℃水中加熱5～10 min），然后用蒸餾水或去離子水作20 倍稀釋（如：50mL的20倍洗滌液加入950mL蒸餾水中）。

血清樣品稀釋：在血清稀釋板中按1∶40稀釋（如：195 μL樣品稀釋液中加5 μL待檢血清）。

對照血清稀釋：在血清稀釋板中按1∶4 稀釋（如：180 μL樣品稀釋液中加60 μL對照血清）。

2.2 操作步驟

2.2.1 根據(jù)檢測樣品數(shù)量取出對應(yīng)的檢測板條，每孔加入稀釋好的工作洗滌液200 μL，重復(fù)洗板2次，最后一次在吸水材料上拍干。

2.2.2 將稀釋好的待檢血清、陰性對照和陽性對照各取100 μL 加至抗原包被板中，待檢血清設(shè)1孔，陰性、陽性對照血清各設(shè)2孔。輕輕搖勻孔中樣品，置37 ℃溫育30 min。

2.2.3 甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的工作洗滌液200 μL，甩掉板孔中的溶液，最后一次在吸水材料上用力扣板，盡可能不要有殘留液體，共計洗滌5次。

2.2.4 每孔中加酶標抗體100 μL，置于37 ℃溫育30 min。

2.2.5 甩掉板孔中的溶液，洗滌5次，洗滌方法同2.2.3。

2.2.6 每孔加顯色液A 50 μL，再加顯色液B 50 μL，室溫（20～25 ℃）避光反應(yīng)10 min。

2.2.7 每孔加終止液50 μL，10 min 內(nèi)測定結(jié)果（測定前在震蕩器上輕輕震動一下）。

2.3 結(jié)果判定 在酶標儀上用630 nm 波長測各孔吸光OD值（650 nm波長也可以）。

2.3.1 成立條件 陽性對照平均OD630nm值與陰性對照平均OD630nm值之差＞0.5。

2.3.2 計算公式 S/P＝樣品OD630nm值÷陽性對照孔平均OD630nm值

2.3.3 陰、陽性判定 如果S/P≥0.20，樣品判為陽性；如果S/P＜0.20，樣品判為陰性。

3 結(jié)果

3.1 共檢測免疫豬O 型口蹄疫血清樣品1 980份，合格1 752 份，平均合格率為88.48%。詳見表1。

3.2 在435份規(guī)模場豬血清中，合格407份，平均合格率為93.56%。

3.3 在735份散養(yǎng)戶豬血清中，合格653份，平均合格率為88.84%。

3.4 在810份屠宰廠豬血清中，合格692份，平均合格率為85.43%。

4 分析討論

4.1 口蹄疫的日常預(yù)防 口蹄疫病毒具備高度傳染性，環(huán)境適應(yīng)性強，在生豬排泄物和分泌物中能長時間生存，在高溫和低溫環(huán)境中依舊具備感染性，但對于酸堿性環(huán)境的適應(yīng)比較差［2］。因此在飼養(yǎng)過程中，需要注意保持圈舍衛(wèi)生，及時清理糞便，并定期對場內(nèi)公共環(huán)境和圈舍使用過氧乙酸或燒堿等酸堿溶液進行消毒處理。

4.2 疫苗免疫 目前，豬O型口蹄疫是成都地區(qū)要求強制免疫的血清型。養(yǎng)殖中疫苗的預(yù)防接種并不是接種次數(shù)越多越好，需先做好流行病學(xué)調(diào)查，摸清本地流行的血清型毒株，再制定科學(xué)的免疫程序。在全國其他地區(qū)，豬口蹄疫病毒毒株從O型到多種毒株型不等，比如A型病毒暴發(fā)的概率正在增加。豬口蹄疫變種病毒增多，口蹄疫滅活疫苗的類型隨之增多［3］，因此做好本地疫病的流行病學(xué)調(diào)查十分重要。

不同飼養(yǎng)階段的豬群，其免疫效果也存在較大的差距。黃寶學(xué)等［4］研究發(fā)現(xiàn)，母豬的O 型口蹄疫免疫抗體合格率最高，這可能與常年的春秋集中反復(fù)免疫有關(guān)，其后依次為仔豬、公豬、后備豬、育肥豬和保育豬。保育豬在斷奶后母源抗體逐漸消失，在集中免疫后效果也不好，因此保育豬就成為了口蹄疫抗體水平較低、抗病力最薄弱的豬群，此時做好加強免疫十分重要。同時需要注意的是，部分母源抗體水平較高的仔豬進行首免后，其抗體水平因疫苗的干擾也有可能會暫時下降［5-6］，這時不能盲目地做加強免疫，而是注重飼養(yǎng)管理，控制好環(huán)境溫度，在飼料及飲水中添加黃芪多糖等預(yù)防藥物，以提升豬群非特異性免疫能力，避免應(yīng)激，防止繼發(fā)感染［7-8］。

5 結(jié)論

本研究對1 980 份不同來源的豬血清O 型口蹄疫病毒抗體進行了檢測，其中檢出陽性1 752份，平均合格率為88.48%。達到了O型口蹄疫免疫抗體平均合格率70%以上的標準，符合農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的要求，在臨床上能對豬群產(chǎn)生相應(yīng)的免疫保護作用，表明成都市在2019年對豬O型口蹄疫的強制免疫工作達到了預(yù)期的效果。同時從表1 可以看出，規(guī)模場的免疫效果明顯好于散養(yǎng)戶。這與規(guī)模場的規(guī)范化養(yǎng)殖、疫苗的規(guī)范化保存、制定科學(xué)的免疫程序以及專業(yè)防疫人員的免疫操作水平有一定的關(guān)系。若發(fā)生口蹄疫，散養(yǎng)戶是最危險的薄弱環(huán)節(jié)，對整個地區(qū)的疫病防控具有嚴重的潛在威脅［1］。

表1 2019年成都市豬O型口蹄疫免疫抗體檢測結(jié)果

本次檢測成都市15 個區(qū)縣的1 980 份豬血清樣品中，雖然豬O型口蹄疫病毒抗體的平均合格率都在80%以上，但還是有少量不合格的免疫豬群。鑒于口蹄疫病毒的高度接觸性和對養(yǎng)殖業(yè)的巨大危害，仍需要積極探討在飼養(yǎng)和防疫過程中出現(xiàn)的各種問題，縣級相關(guān)部門要做好本區(qū)域的流行病學(xué)調(diào)查，科學(xué)地開展防疫工作。同時，散養(yǎng)戶作為常態(tài)化的防控薄弱環(huán)節(jié)應(yīng)重點關(guān)注，這就要加強基層防疫員的管理和定期培訓(xùn)。在春秋集中免疫工作中，由于基層防疫員免疫注射工作量大，可能會出現(xiàn)疫苗保存是否妥當(dāng)，免疫時是否按最新的程序操作，養(yǎng)殖戶補欄后補免工作是否跟進等問題，縣級相關(guān)部門應(yīng)定期組織基層防疫員和養(yǎng)殖戶培訓(xùn)學(xué)習(xí)，強化規(guī)范免疫意識，從而保障成都地區(qū)生豬生產(chǎn)的健康發(fā)展。