宋云霄， 黃曉峰， 張海晨， 姚天悅， 袁文華， 趙智赟

（1.上海市徐匯區(qū)中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200031；2. 西藏日喀則市薩迦縣衛(wèi)生服務(wù)中心，西藏 日喀則 857800）

新生血管性青光眼（neovascularization glaucoma，NVG）是一種主要由視網(wǎng)膜靜脈阻塞（retinal vein occlusion，RVO）和糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy，DR）等缺血性視網(wǎng)膜病變引起虹膜及房角表面產(chǎn)生新生血管，導(dǎo)致房水回流障礙的一種繼發(fā)性青光眼[1]，具有破壞性強(qiáng)、致盲性高等特點(diǎn)，其發(fā)病率呈逐年遞增趨勢[2]。國內(nèi)外許多研究顯示，有多種細(xì)胞因子參與了NVG的發(fā)生、發(fā)展，細(xì)胞因子可調(diào)節(jié)眼內(nèi)新生血管的產(chǎn)生和炎癥免疫反應(yīng)，相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)失衡可促進(jìn)新生血管生成和炎癥的浸潤[3]。有研究結(jié)果顯示，NVG患者血清和房水中腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factoralpha，TNF-α）、白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-6、IL-8水平均高于對(duì)照組（P＜0.05），提示NVG患者體內(nèi)IL水平異常，可能通過炎癥免疫反應(yīng)參與NVG患者新生血管的產(chǎn)生[4-5]。目前，關(guān)于IL水平與NVG患者嚴(yán)重程度關(guān)系的研究較少。為此，本研究擬探討NVG患者血清IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、高敏C反應(yīng)蛋白（high-sensitivity C-reactive protein，hs-CRP）水平與NVG患者眼部參數(shù)的相關(guān)性及其用于NVG診斷的價(jià)值，為臨床早期預(yù)測、評(píng)估NVG病情和判斷預(yù)后提供相關(guān)理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2014年1月—2018年12月至上海市徐匯區(qū)中心醫(yī)院就診并確診為NVG的患者69例（NVG組），其中男40例、女29例，年齡（55.64±12.56）歲。所有患者都經(jīng)過詳細(xì)的眼科檢查，包括裂隙燈、房角鏡、眼底彩照、眼壓（intraocular pressure，IOP） 、中央角膜厚度（central corneal thickness，CCT）、垂直杯盤比（vertical cup-disc ratio，VCDR）、眼軸長度（axial length，AL）、前房深度（anterior chamber depth，ACD）、平均視野缺損（visual field mean defect，MD）、平均視敏度（visual field mean sensitivity，MS）等，若患者雙眼發(fā)病，則納入急性大發(fā)作眼睛或病情較重的眼睛。將NVG患者根據(jù)病因分為DR繼發(fā)性NVG組（37例）和RVO繼發(fā)性NVG組（32例）。選取同期上海市徐匯區(qū)中心醫(yī)院體檢中心體檢健康者39名（正常對(duì)照組），其中男24名、女15名，年齡（55.31±14.73）歲，初步眼科檢查（IOP和VCDR）均正常。記錄所有對(duì)象的體格檢查資料，包括年齡、性別、身高、體質(zhì)量、糖尿病史、高血壓史、血壓、胸部X光片、心電圖、肝功能、腎功能、傳染性疾病史等。2個(gè)組之間年齡、性別差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 NVG組 納入標(biāo)準(zhǔn)[6-7]：（1）NVG患者均為住院患者；（2）急性或慢性IOP升高[IOP≥2.79 kPa（21 mmHg）]；（3）由視網(wǎng)膜血管疾?。≧VO或DR）引起；（4）虹膜和/或房角有活躍的新生血管形成；（5）納入的患者包括新診斷的和轉(zhuǎn)診的NVG患者；（6）年齡＞18周歲；（7）自愿加入本研究且知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）患有任何可能影響視力或視野的眼部疾?。唬?）有眼部手術(shù)史；（3）患有系統(tǒng)性疾病，如急性傳染病、代謝綜合征、腎臟疾病、自身免疫性疾病和腫瘤等。

1.2.2 正常對(duì)照組 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡＞18周歲；（2）肝、腎功能正常；（3）IOP＜2.79 kPa；（4）VCDR＜0.7；（5）自愿加入本研究且知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）患有任何可能影響視力或視野的眼部疾??；（2）有眼部手術(shù)史；（3）患有系統(tǒng)性疾病，如急性傳染病、代謝綜合征、腎臟疾病、自身免疫性疾病和腫瘤等；（4）有青光眼家族史。

1.3 方法

采集所有對(duì)象靜脈血4 mL，2 300×g離心10 min，分離血清，3 h內(nèi)完成檢測。樣本均無脂血、溶血。采用IMMULITE1000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（德國西門子公司）及配套試劑（化學(xué)發(fā)光法）、質(zhì)控品檢測血清IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10水平，批內(nèi)、批間變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）為4%～5%。采用BS-2000M全自動(dòng)生化分析儀（深圳邁瑞公司）及配套試劑（免疫比濁法）、質(zhì)控品檢測血清hs-CRP水平，參考區(qū)間為0～3 mg/L，線性范圍為0.2～320.0 mg/L，批內(nèi)、批間CV為2%～3%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用K-S檢驗(yàn)進(jìn)行正態(tài)性分析。呈正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以x±s表示，2個(gè)組之間比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。呈非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以中位數(shù)（M）[四分位數(shù)（P25～P75）]表示，組間比較采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。采用Spearman相關(guān)分析評(píng)估各項(xiàng)指標(biāo)與NVG患者眼部參數(shù)的相關(guān)性。采用二分類Logistic回歸分析評(píng)估NVG發(fā)生的危險(xiǎn)因素。采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析各項(xiàng)指標(biāo)診斷NVG的價(jià)值。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NVG組與正常對(duì)照組一般資料的比較

NVG組有糖尿病史的比例顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.001），高血壓史比例、收縮壓、舒張壓、體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）2個(gè)組之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 NVG組與正常對(duì)照組一般資料的比較

2.2 NVG組與正常對(duì)照組血清IL和hs-CRP水平的比較

NVG組血清IL-6、IL-8和hs-CRP水平顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.01、P＜0.001），血清IL-1、IL-2和IL-10水平2個(gè)組之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 NVG組與正常對(duì)照組血清IL和hs-CRP水平的比較

2.3 DR繼發(fā)性NVG組與RVO繼發(fā)性NVG組血清IL和hs-CRP水平的比較

DR繼發(fā)性NVG組與RVO繼發(fā)性NVG組之間IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10和hs-CRP水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

2.4 NVG患者血清IL及hs-CRP水平與眼部參數(shù)的相關(guān)性

Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，NVG患者血清IL-6水平與MD水平呈正相關(guān) （r=0.257，P＜0.001），與MS水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.196，P＜0.001），血清IL-1、IL-2、IL-8、IL-10、hs-CRP水平與眼部參數(shù)均無相關(guān)性（P＞0.05）。見表4。

表3 DR繼發(fā)性NVG組與RVO繼發(fā)性NVG組血清IL和hs-CRP水平的比較

表4 血清IL及hs-CRP水平與眼部參數(shù)的相關(guān)性

2.5 NVG發(fā)病的危險(xiǎn)因素分析

以IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、hs-CRP為自變量，以有無NVG（有=1，無=0）為應(yīng)變量，建立二分類Logistic回歸模型。對(duì)年齡、性別（男=1，女=2）、BMI、收縮壓、舒張壓、糖尿病（有=1，無=0）、高血壓（有=1，無=0）進(jìn)行校正。結(jié)果顯示，IL-6[比值比（odds ratio，OR）=4.443，95%可信區(qū)間（confidence interval，CI）為1.207～16.40]、IL-8（OR=1.067，95%CI為1.001～1.237）、hs-CRP（OR=3.886，95%CI為1.191～12.683）是NVG發(fā)病的危險(xiǎn)因素。見表5。

表5 NVG發(fā)病危險(xiǎn)因素的二元Logistic回歸分析

2.6 IL-6、IL-8、hs-CRP單項(xiàng)及三者聯(lián)合檢測診斷NVG的效能

ROC曲線分析結(jié)果顯示，IL-6、IL-8、hs-CRP和三者聯(lián)合檢測診斷NVG的曲線下面積分別為0.773、0.873、0.760、0.902。聯(lián)合檢測的診斷效能優(yōu)于單項(xiàng)檢測。見表6、圖1。

表6 IL-6、IL-8、hs-CRP單項(xiàng)及三者聯(lián)合檢測診斷NVG的ROC參數(shù)

圖1 IL-6、IL-8、hs-CRP單項(xiàng)及三者聯(lián)合檢測診斷NVG的ROC曲線

3 討論

NVG是一種主要累及脈絡(luò)膜、視網(wǎng)膜的缺血性疾病，主要繼發(fā)于RVO和DR 2種視網(wǎng)膜缺血性疾病，具體發(fā)病機(jī)制尚不明確。目前認(rèn)為NVG的發(fā)病與長期眼內(nèi)的慢性炎癥環(huán)境密切相關(guān)，長期慢性炎癥可導(dǎo)致視網(wǎng)膜循環(huán)障礙，引起缺血、缺氧，繼而導(dǎo)致大量細(xì)胞因子釋放，形成惡性循環(huán)[8]。因此，相關(guān)炎癥因子與NVG的相關(guān)性值得被臨床關(guān)注。

IL-6是一種調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)及造血過程的多功能細(xì)胞因子，主要由活化的T細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞及纖維母細(xì)胞分泌。IL-6的作用主要包括以下3個(gè)方面[9]：（1）誘使大量的中性粒細(xì)胞向微血管系統(tǒng)聚集，從而引起微血管管腔狹窄，導(dǎo)致組織缺血、缺氧；（2）刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞收縮，通透性增加，使相關(guān)物質(zhì)進(jìn)入組織液；（3）引起炎性細(xì)胞脫顆粒，釋放貯存酶，進(jìn)而引起組織損傷，導(dǎo)致血管的滲出、增生及新生血管的形成。侯艷宏等[10]的研究結(jié)果顯示，NVG患者血漿IL-6水平明顯高于原發(fā)性開角型青光眼患者和年齡相關(guān)性白內(nèi)障患者（P＜0.05）。凌佼佼等[11]的研究結(jié)果顯示，NVG組外周血IL-6水平顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.05）。本研究結(jié)果顯示，NVG組血清IL-6水平顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.01），與文獻(xiàn)報(bào)道[10-11]一致。CHEN等[12]的研究結(jié)果顯示，中央靜脈阻塞繼發(fā)性NVG患者房水IL-6水平顯著升高（P＜0.001），提示IL-6及其他新生血管因子共同參與了NVG患者虹膜新生血管的生成。白玉星等[13]的研究結(jié)果顯示，NVG患者血清及房水IL-6水平均明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）。本研究結(jié)果顯示，NVG患者血清IL-6水平與MD呈正相關(guān)（r=0.257，P＜0.001），且IL-6是NVG發(fā)病的危險(xiǎn)因素（OR=4.443，95%CI為1.207～16.40）。因此，IL-6在NVG新生血管及疾病進(jìn)展中有一定作用。

IL-8屬于趨化因子家族成員，與腫瘤的轉(zhuǎn)移及血管形成密切相關(guān)[14]。有研究結(jié)果顯示，IL-8在內(nèi)皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和腫瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中可誘導(dǎo)、促進(jìn)新生血管的形成[15-17]。阿依努爾·艾買爾等[1]的研究結(jié)果顯示，NVG患者血清和房水中的IL-8水平明顯高于原發(fā)性開角型青光眼組和白內(nèi)障組（P＜0.05）。還有研究結(jié)果顯示，急性和慢性閉角型青光眼患者房水IL-8水平顯著高于白內(nèi)障組（P＜0.0167），但原發(fā)性開角型青光眼患者與白內(nèi)障患者之間房水IL-8水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）[18-19]。李臻等[20]的研究結(jié)果顯示，息肉狀脈絡(luò)膜血管病變患者房水中的IL-8 mRNA表達(dá)升高，與最佳矯正視力（最小分辨視角的對(duì)數(shù)）呈正相關(guān)（r=0.438，P＜0.01）。本研究結(jié)果顯示，NVG患者IL-8水平顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.001），且 IL-8是NVG發(fā)病的危險(xiǎn)因素（OR=1.067，95%CI為1.001～1.237）。由此可見，IL-8參與了NVG的發(fā)生，且與病程進(jìn)展有關(guān)。但到目前為止，IL-8水平與NVG關(guān)系的研究仍較少，IL-8在NVG發(fā)病中的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

hs-CRP主要用于感染性疾病的診斷，可以反映機(jī)體的免疫功能和炎癥水平。本研究結(jié)果顯示，NVG組血清hs-CRP水平顯著高于正常對(duì)照組（P=0.009），且hs-CRP是NVG發(fā)病的危險(xiǎn)因素（OR=3.886，95%CI為1.191～12.683）。由此可見，hs-CRP可與IL-6、IL-8相互作用，引起炎性細(xì)胞浸潤，從而釋放一系列促血管生成因子，加速新生血管的生成。

ROC曲線分析結(jié)果顯示，IL-6、IL-8和hs-CRP診斷NVG的曲線下面積分別為0.773、0.873、0.760，最佳臨界值分別為2.55 pg/mL、12.5 pg/mL、0.375 mg/L，敏感性分別為65.57%、85.25%、98.36%，特異性分別為87.18%、80.49%、92.31%。因此，IL-6、IL-8、hs-CRP對(duì)NVG均具有一定的診斷價(jià)值。3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測診斷NVG的曲線下面積為0.902，敏感性為80.33%，特異性為92.31%，其診斷效能優(yōu)于各項(xiàng)指標(biāo)的單項(xiàng)檢測。

目前，有關(guān)NVG的研究較少，且大多數(shù)研究的樣本量均較小，本研究的樣本量同樣也較小。因此，本研究的結(jié)論仍需前瞻性、大樣本的隊(duì)列研究進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。

綜上所述，IL-6、IL-8和hs-CRP對(duì)NVG均有一定的輔助診斷價(jià)值，可能與NVG的發(fā)生、發(fā)展有一定關(guān)系。