吉維民
(江蘇省寶應(yīng)縣人民醫(yī)院,江蘇 寶應(yīng))
臨床實驗室經(jīng)常見到粘液型細菌生長,粘液型細菌較常見的有,肺炎克雷伯菌,銅綠假單胞菌,肺炎鏈球菌,少見的有,腦膜炎奈瑟菌,流感嗜血桿菌,金黃色葡萄球菌。粘液型細菌的粘液組成,主要是細菌的莢膜,由粘多糖構(gòu)成主要成份[1],因為粘液有其疏水性,細菌懸濁液0.5 麥氏單位,準確配制有實際困難。我們根據(jù)多年的經(jīng)驗,進行一些實驗,以便能在實驗中有所發(fā)現(xiàn),找出簡便可行的辦法。
取我院近年來培養(yǎng)出的,很明顯的粘液型細菌,用無菌棉簽沾取目標菌,與無菌生理鹽水充分混勻,孵育一定時間進行比濁,比濁儀使用梅里埃產(chǎn)品。配制一定濁度的粘液型細菌菌懸液,在37度孵育時間與濁度變化,如表1。常見粘液型細菌與非粘液型同期同種細菌,體外藥敏試驗結(jié)果比較,結(jié)果見表2。藥敏結(jié)果判讀按CLSIC2018,微生物實驗操作按《全國臨床檢測操作規(guī)程》第4版操作規(guī)范。統(tǒng)計學方法:采用SSPS 20.0 進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學分析。
表1 主要粘液型細菌菌懸液在37℃孵育時間與濁度變化(n=20,濃度:麥氏單位)
結(jié)果表明:孵育30 分后,所配菌懸液,混合較均勻,可調(diào)至0.5麥氏單位,無肉眼可見凝塊,統(tǒng)計學分析有顯著意義P<0.05。沒有孵育的或孵育時間較短的樣本,不易形成均勻菌懸液,孵育時間過長,菌懸液的濃度不易掌握,臨床實驗室操作起來也不方便。因此建議對粘液型細菌菌懸液的配制采用本方法。粘液狀細菌其折光強粘液樣的外層為莢膜層,莢膜是由疏水性多肽糖物質(zhì)構(gòu)成,是細菌的毒力因子。
細菌在感染人體時,會產(chǎn)生或丟失一部份莢膜,也就是常說的細菌的毒力變異,在革蘭染色中,有一層厚厚的折光層,莢膜幫助細菌抵制外來因素,從而逃避藥物的作用[2],使感染細菌的毒力增強,它又稱為毒力因子。我們在工作中發(fā)現(xiàn),莢膜厚度與毒力呈正相關(guān),而在實驗檢測中,因為配制懸濁液與普通易散于生理鹽水中的細菌,不一樣的是,直接做藥敏試驗,無論是K-B 法還是MIC法,結(jié)果都有一定影響,通過孵育能使實驗配制菌懸液操作容易些,還可使一部份細菌增加親水性,孵育與否的結(jié)果,兩者有一定差異[3]。按照本方法,使用生理鹽水配制,以防富營養(yǎng)物質(zhì)促使細菌分裂生長,使得濃度不易掌握,又能使得細菌分散開來,雖然不能洗脫外層莢膜,但能使細菌表層的莢膜變小。
粘液型病原菌,相對同種非粘液型對抗生素較敏感,在三代頭孢菌素上表現(xiàn)的更明顯,差異有顯著性,大多數(shù)抗生素相對粘液型細菌更敏感,總體來看還是比較接近[4],粘液型細菌藥敏試驗,一致性較難掌握,實驗須更加細心,特別是懸制液的配制,起著很重要的作用。我們采取的方法能很好的解決這部分問題,具體規(guī)范化還需進一步研究,以使實驗重復性達到要求[5]。回顧性分析本院的粘液型細菌檢出率有增加趨勢。粘液層使細菌耐受環(huán)境的能力變強,對藥物滲透入細菌形成障礙,可表現(xiàn)為藥敏試驗?zāi)退幮栽鰪姟6鴮嶒炇宜幬锝y(tǒng)計分析并非如此,耐藥性分析的結(jié)果,反而是粘液型細菌較敏感,統(tǒng)計學分析有顯著意義P<0.05。原因可能是粘液型細菌大多數(shù)是野生菌株所致。
表2 主要常見粘液型細菌與非粘液型同期同種細菌藥敏結(jié)果比較(耐藥率%)
據(jù)報道肺炎克雷伯菌的拉絲長度和它的毒力強度呈正相關(guān)[6],我們工作中發(fā)現(xiàn)有一定道理。我們發(fā)現(xiàn)銅綠假單的水溶性色素和粘液呈負相關(guān),水滴狀的銅綠少見明顯金屬光澤的色素,偶見有粘液樣的金黃色葡萄球菌,鏡下并不見像其它幾種水滴樣細菌有厚厚的折光層,根據(jù)本文可得出,經(jīng)過37℃孵育30 分鐘的菌懸液效果最好,因此,一般工作中可采用37℃孵育30 分鐘。有莢膜細菌大都屬野生菌株,且在多種標本中都算病原菌,比如痰,分泌物等,臨床屬病原菌[7],根據(jù)對這幾種臨床常見病原菌的耐藥性分析,區(qū)分粘液型與否對感染病原菌與否,對毒性分析,對藥物敏感性都有價值。
綜上所述,粘液型細菌是值得重視的病原菌,本文所用方法,所統(tǒng)計的結(jié)果,在臨床上用一定的應(yīng)用價值,對感染性疾病的治療,預后都有指導意義。