李 瑪， 蘇 鈦， 李 云， 熊永興， 邱 斌,4

(1.云南省藥物研究所， 昆明 650111； 2.云南白藥集團(tuán)創(chuàng)新研發(fā)中心， 昆明 650111；3.云南省中藥和民族藥新藥創(chuàng)制企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 昆明 650111； 4.云南中醫(yī)藥大學(xué)， 昆明 650500)

滇重樓(ParispolyphyllaSmith var.yunnanensis)為百合科重樓屬多年生宿根性草本植物[1]，以干燥根莖入藥，其根莖含有多種甾體皂苷，占總化合物的80%以上[2]，具有清熱解毒、消腫止痛、涼肝定驚之功效，用于癰腫、咽喉腫痛、毒蛇咬傷、跌打傷痛、驚風(fēng)抽搐等癥，是藥材重樓的原植物來源之一[4]。隨著研究的深入，重樓在抗腫瘤、止血止痛、抑菌消炎、調(diào)節(jié)免疫、抗氧化、保護(hù)肝臟與腎臟等方面的作用不斷被發(fā)現(xiàn)，目前以重樓為原料已開發(fā)有多種中藥制劑用于疾病的治療[5-7]。隨著醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)對(duì)重樓藥材需求量的逐年增長，重樓藥材來源已從野生資源轉(zhuǎn)變?yōu)槿斯ぴ耘嗵峁?。最主要的栽培方式為種子育苗移栽，滇重樓種子播種后，經(jīng)過3年的生長發(fā)育，方可對(duì)種苗進(jìn)行移栽。種苗是優(yōu)良藥材生產(chǎn)的源頭，優(yōu)質(zhì)中藥材種苗是提高藥材產(chǎn)量、質(zhì)量和用藥安全性的根本保障[8]，有了科學(xué)的種苗質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，才能對(duì)種苗質(zhì)量進(jìn)行正確的測(cè)定，檢驗(yàn)結(jié)果才有可靠性。一直以來，滇重樓種苗主要是藥農(nóng)自產(chǎn)自用，沒有相應(yīng)的種苗檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，移栽前未進(jìn)行科學(xué)的分級(jí)篩選，在實(shí)際生產(chǎn)中很難對(duì)滇重樓種苗的質(zhì)量進(jìn)行有效控制，嚴(yán)重影響了重樓藥材的產(chǎn)量和質(zhì)量。鑒于此，對(duì)不同種源的滇重樓種苗質(zhì)量分級(jí)進(jìn)行系統(tǒng)的研究，以期為滇重樓的規(guī)范化栽培及種苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)。

1 材 料

實(shí)驗(yàn)材料為在云南省大理州、麗江市各滇重樓栽培區(qū)收集的成熟滇重樓種苗23批次(見表1)，每個(gè)批次100株。

2 方 法

移栽前，隨機(jī)選取各批次滇重樓種苗30株，分別測(cè)定每株種苗的株高、株重、地徑、根莖直徑、不定根數(shù)、根莖重。株高測(cè)定采用鋼卷尺量取根莖基部至莖頂端的長度；株重測(cè)定采用電子天平稱取種苗整株重量；地徑測(cè)定采用游標(biāo)卡尺量取種苗莖基部1 cm處的直徑；根莖直徑測(cè)定采用游標(biāo)卡尺量取根莖最粗處直徑；不定根數(shù)測(cè)定為數(shù)取根莖上生出細(xì)根的條數(shù)；根莖重測(cè)定采用電子天平稱取地下部分的重量。運(yùn)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)分析軟件分別對(duì)上述指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述、相關(guān)性分析和聚類分析，最后根據(jù)聚類分析結(jié)果和生產(chǎn)實(shí)際按照最低級(jí)原則制定滇重樓種苗質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。

3 結(jié)果與分析

3.1 滇重樓種苗質(zhì)量指標(biāo)測(cè)定結(jié)果

23批不同來源的滇重樓種苗質(zhì)量指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果見表2。

表1 滇重樓種苗材料采集信息

編號(hào)采集時(shí)間/(年-月)采集地點(diǎn)經(jīng)緯度海拔/m12017-09大理云龍25°57'28″N99°17'52″E291522017-09大理云龍26°17'28″N99°22'38″E291032017-09麗江玉龍26°44'56″N100°1'14″E283042017-09麗江玉龍26°44'56″N100°1'15″E283052017-09麗江玉龍26°45'56″N100°1'16″E283062017-09麗江玉龍26°38'56″N100°1'17″E283072017-09麗江玉龍26°47'56″N100°1'17″E283082017-09麗江永勝26°2'22″N100°38'19″E286092017-09麗江永勝26°48'12″N100°50'52″E2680102017-09麗江永勝26°49'12″N100°50'52″E2680112017-09麗江永勝26°57'14″N100°31'14″E2670122017-09麗江玉龍26°55'14″N100°31'15″E2670編號(hào)采集時(shí)間/(年-月)采集地點(diǎn)經(jīng)緯度海拔/m132017-09麗江玉龍26°46'56″N100°1'17″E2830142017-09香格里拉維西24°57'14″N100°31'15E″3000152017-09大理巍山23°48'12″N100°50'52″E2680162017-09大理云龍25°57'28″N99°17'52″E2915172017-09大理云龍26°17'28″N99°22'38″E2910182017-09大理云龍26°116'28″N99°22'52″E2915192017-09大理云龍26°15'28″N99°22'52″E2915202017-09大理下關(guān)24°17'28″N99°22'38″E2910212017-09大理下關(guān)24°46'56″N100°1'14″E2830222017-09大理永平27°46'56″N100°1'15″E2830232017-09大理祥云24°46'56″N100°1'16″E2830

表2 滇重樓種苗檢驗(yàn)結(jié)果

編號(hào)株高/cm地徑/mm根莖直徑/mm株重/g不定根/條根莖重/g111.60±1.701.90±0.3710.43±2.192.43±1.048.28±2.211.60±0.81214.76±3.142.53±0.5810.78±2.123.88±1.778.45±2.552.54±1.19311.52±4.382.72±0.6410.13±1.473.06±1.2311.09±3.581.68±0.65412.33±2.672.22±0.3315.70±1.835.27±2.3211.43±2.113.53±1.04515.09±2.592.27±0.4014.84±2.145.45±1.8813.10±2.863.87±1.42613.82±3.762.84±0.4416.82±2.877.30±2.5115.88±3.495.41±1.9679.79±2.052.10±0.299.97±1.332.45±0.799.46±3.011.63±0.53812.05±2.743.12±0.5613.55±2.425.85±2.189.85±3.584.03±1.67917.95±4.474.06±0.6917.73±3.0111.79±4.3815.97±4.147.71±2.891013.10±1.902.15±0.319.71±2.582.48±0.9611.00±2.511.49±0.681110.22±1.792.11±0.2414.55±1.553.85±0.8512.25±2.492.91±0.651217.74±3.052.84±0.4613.85±2.706.22±2.4814.50±3.093.94±1.811316.83±5.422.34±0.4411.34±2.054.29±2.108.80±2.892.56±1.441420.96±3.713.09±0.6115.97±3.519.45±5.4811.65±3.905.75±3.30157.86±1.731.48±0.277.75±1.011.01±0.345.21±1.380.69±0.241613.42±2.381.88±0.2911.24±2.562.52±1.1810.35±2.291.70±0.851712.92±2.884.02±0.6016.11±2.538.61±3.2211.08±3.745.76±2.461811.96±2.602.35±0.429.73±1.983.14±1.328.30±2.212.02±0.871914.85±3.782.51±0.5212.34±2.994.27±2.688.03±2.642.70±1.83209.24±2.481.96±0.359.76±1.751.93±0.907.40±1.881.25±0.612110.55±2.242.28±0.3811.33±2.092.76±1.189.10±2.181.73±0.82224.47±0.882.80±0.519.30±1.211.95±0.568.97±3.001.37±0.442318.85±3.893.48±0.6218.92±3.5312.78±6.4113.10±3.608.22±4.40

3.2 方差分析及相關(guān)性分析

統(tǒng)計(jì)描述和方差分析結(jié)果(表3)顯示，各質(zhì)量指標(biāo)變異幅度分別為：株高3.20～34.20 cm，地徑1.03～5.92 mm，根莖直徑1.36～27.11 mm，株重0.40～35.10 g，不定根數(shù)2.00～26.00條，根莖重0.10g～25.80 g，不同來源的種苗株高、地徑、根莖直徑、株重、不定根、根莖重這6項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)到極顯著差異水平(p<0.01)，說明這些指標(biāo)均可作為滇重樓種苗質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù)。

相關(guān)性分析結(jié)果(表4)表明：除株高與地徑呈顯著相關(guān)外，其余質(zhì)量指標(biāo)間均為極顯著相關(guān)關(guān)系，其中，株重與根莖重和根莖直徑的相關(guān)系數(shù)分別為0.980和0.960，根莖重和根莖直徑相關(guān)系數(shù)為0.962。

表3 滇重樓種苗各質(zhì)量指標(biāo)描述統(tǒng)計(jì)和方差分析

指標(biāo)最大值最小值均值標(biāo)準(zhǔn)差F株高/cm34.203.2013.324.8849.56**地徑/mm5.921.032.610.8264.16**根莖直徑/mm27.111.3612.873.9257.13**株重/g35.100.408.714.3251.36**不定根數(shù)/條26.002.0010.764.0226.51**根莖重/g25.800.101.772.8547.63**

注：“**”表示p<0.01。

結(jié)合方差分析和相關(guān)性分析結(jié)果，為了便于生產(chǎn)實(shí)施，采用株重、根莖重、根莖直徑指標(biāo)進(jìn)行滇重樓種苗分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的研究。

表4 各指標(biāo)相關(guān)性分析

指標(biāo)株高地徑根莖直徑株重不定根數(shù)根莖重株高1.000地徑0.637*1.000根莖直徑0.761**0.857**1.000株重0.802**0.913**0.960**1.000不定根數(shù)0.639**0.655**0.817**0.736**1.000根莖重0.784**0.907**0.962**0.980**0.763**1

注：“**”極顯著(p<0.01，雙尾)，“*”顯著(p<0.05，雙尾)。

3.3 滇重樓種苗質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的制定

采用K類聚類分析方法，對(duì)滇重樓種苗的株重、根莖重、根莖直徑3個(gè)質(zhì)量指標(biāo)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析，得到滇重樓種苗各分級(jí)指標(biāo)的3個(gè)最終聚類中心(見表5)。

表5 K類中心聚類的最終聚類中心值

類別株重/g根莖重/g根莖直徑/mm1類10.666.8617.182類5.663.9514.893類2.781.7710.29

以滇重樓種苗株重、根莖重、根莖直徑3項(xiàng)指標(biāo)的聚類中心值作為滇重樓種苗分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的參考值，結(jié)合滇重樓種苗的生產(chǎn)實(shí)際和可操作性，劃分出滇重樓種苗質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果見表6。

表6 滇重樓種苗質(zhì)量分級(jí)劃分

指標(biāo)級(jí)別一級(jí)二級(jí)三級(jí)株重(g)≥10.00≥5.00≥2.00根莖重(g)≥7.00≥4.00≥1.00根莖直徑(mm)≥17.00≥14.00≥10.00

4 討 論

在中藥材的規(guī)范化栽培過程中，優(yōu)良的種子和種苗是提高藥材產(chǎn)量和質(zhì)量的重要前提和保障[9]。正確的中藥材種子種苗質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)是獲得高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)藥材最主要的前提條件[10]。與農(nóng)作物種苗標(biāo)準(zhǔn)相比，我國中藥材種苗標(biāo)準(zhǔn)研究相對(duì)滯后，目前僅有人參種苗[11]通過研究并頒布了國家標(biāo)準(zhǔn)。隨著國家中藥材標(biāo)準(zhǔn)化戰(zhàn)略的推進(jìn)，中藥材種子種苗標(biāo)準(zhǔn)研究的重要性日益凸顯，先后有學(xué)者對(duì)高良姜[12]、廣藿香[13]、知母[14]、金錢草[15]、祁菊花[16]等藥材的種苗標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，并取得了一定的成果。本研究根據(jù)滇重樓不同批次種苗質(zhì)量指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果，將滇重樓種苗分為3個(gè)等級(jí)，種苗的株重、根莖重、根莖直徑作為滇重樓種苗質(zhì)量分級(jí)的主要指標(biāo)，能直觀的反應(yīng)種苗的大小、形狀和儲(chǔ)存生物量的多少，在生產(chǎn)實(shí)踐中具有一定的可操作性。在實(shí)際生產(chǎn)中，選擇種苗時(shí)，除考慮分級(jí)指標(biāo)外，還應(yīng)考慮種苗的外觀形態(tài)是否完好，是否存在機(jī)械損傷、霉變、蟲蛀、病蟲害感染等因素。

云南作為滇重樓重要的道地產(chǎn)區(qū)，已形成了相當(dāng)規(guī)模的規(guī)范化種植基地，并向全國提供重樓藥材，因此，從源頭上管控種苗的質(zhì)量就顯得尤為重要，本標(biāo)準(zhǔn)的制定，能夠?yàn)榈嶂貥巧a(chǎn)經(jīng)營者判斷種苗的優(yōu)劣提供理論依據(jù)，同時(shí)為規(guī)范滇重樓栽培過程，促進(jìn)重樓藥材生產(chǎn)水平的提高提供有力的保障。