陳 浩，焦嬋媛，楊帥杰

(1 新疆產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，新疆 烏魯木齊 830011；2 新疆烏魯木齊市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，新疆 烏魯木齊 830011)

肟菌酯(trifloxystrobin)屬甲氧基丙烯酸類殺菌劑，通過鎖住細(xì)胞色素b與c1之間的電子傳遞而阻止細(xì)胞ATP合成，抑制其線粒體呼吸而發(fā)揮抑菌作用[1]。肟菌酯對(duì)幾乎所有真菌綱病害如白粉病[2]、銹病[3]、黑斑病[4]、霜霉病[5]等有良好的活性，被認(rèn)為是第2代甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑[6]。

本文根據(jù)CNAS-GL06《化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》和JJF1059.1-2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》規(guī)定的方法，建立數(shù)學(xué)模型，分析氣相色譜質(zhì)譜法測(cè)定芹菜中肟菌酯不確定度，并對(duì)各個(gè)不確定度分量進(jìn)行量化處理，為測(cè)定芹菜中的肟菌酯質(zhì)量控制提供一定的依據(jù)。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 儀器與試劑

氣相色譜質(zhì)譜儀(四級(jí)桿檢測(cè)器)，SHIMADEU公司；電子天平(±0.01 g)，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司；芹菜樣品(市售)；肟菌酯溶液標(biāo)準(zhǔn)樣品、環(huán)氧七氯溶液標(biāo)準(zhǔn)樣品，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所；乙腈(色譜純)；氯化鈉、甲苯為優(yōu)級(jí)純?cè)噭?；丙酮、無(wú)水硫酸鈉、正己烷均為分析純?cè)噭?/p>

1.2 樣品前處理

稱取20 g試樣(精確至0.01 g)于80 mL離心管中，加入50 mL乙腈，振蕩勻漿提取1 min，加入5 g氯化鈉，再勻漿提取1 min，將離心管放入離心機(jī)，在3000 r/min 離心5 min，取上清液25 mL，待凈化。將待凈化液經(jīng)固相萃取柱凈化后，收集所有流出物于雞心瓶中，并在40 ℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約0.5 mL。每次加入5 mL正己烷在40 ℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，進(jìn)行溶劑交換二次，最后使樣液體積約為1 mL，加入50 μL內(nèi)標(biāo)溶液，混勻，用于氣相色譜-質(zhì)譜測(cè)定。

1.3 氣相色譜質(zhì)譜測(cè)定條件

1.3.1 氣相色譜條件

色譜柱：Agilent DB-5 ms(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，載氣：高純氦氣(99.999%)，流速為1.0 mL/min，進(jìn)樣量為1.0 μL，不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣口溫度：280 ℃。檢測(cè)器溫度：250 ℃，升溫程序：50 ℃保持1 min，以30 ℃每分鐘的速度升溫至130 ℃，再以5 ℃每分鐘的速度升溫至250 ℃，再以10 ℃每分鐘的速度升溫至300 ℃，保持5 min。

1.3.2 質(zhì)譜條件

EI離子源，70 eV；SIM掃描模式；離子源溫度：250 ℃；肟菌酯的質(zhì)譜參數(shù)：保留時(shí)間為24.68 min，定量離子116，定量離子對(duì)222。

2 數(shù)學(xué)模型的建立

芹菜樣品中肟菌酯含量的計(jì)算公式為：

式中：X——樣品中肟菌酯的含量，mg/kg

c——樣品中肟菌酯峰面積對(duì)應(yīng)的濃度，μg/mL

v——樣品定容體積，mL

m——樣品質(zhì)量，g

f——回收率校正因子，即為回收率的倒數(shù)

測(cè)試樣品的相對(duì)合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算公式：

3 不確定度評(píng)定

3.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書，肟菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為100.00 μg/mL，證書提供的不確定度為±0.12 μg/mL，則相對(duì)不確定度為：

urel(標(biāo)物)=0.12 μg/mL/100.00 μg/mL=0.0012

3.2 標(biāo)準(zhǔn)工作液配制過程產(chǎn)生的不確定度評(píng)定

表1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制中玻璃量具引起的不確定度Table 1 Uncertainty caused by glass gauges in standard solution preparation

在標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋配制過程中，使用10 mL容量瓶3次，使用100 mL容量瓶2次，使用1 mL單標(biāo)吸量管3次，使用2 mL單標(biāo)吸量管1次，使用5 mL單標(biāo)吸量管1次，由表1數(shù)據(jù)合成的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋過程中溫度引入的不確定度

玻璃量器與移液管的檢定均在20 ℃下進(jìn)行，標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋配制過程中溫度控制在(20±5)℃，可以通過計(jì)算溫度范圍和體積膨脹系數(shù)，從而計(jì)算由溫度波動(dòng)引入的不確定度。由于玻璃的膨脹系數(shù)遠(yuǎn)小于液體的，所以對(duì)于玻璃的膨脹系數(shù)可以忽略不計(jì)。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液是用甲苯配制的，甲苯在20 ℃時(shí)的膨脹系數(shù)為1.09×10-3mL/℃，按照溫度變化為矩陣分布，由此可以計(jì)算各移液管和玻璃量器的不確定度，測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制中溫度引起的不確定度Table 2 Temperature-induced uncertainty in standard solution formulation

由表2中的數(shù)據(jù)合成標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋配制過程中，由于溫度變化引入的相對(duì)不確定度：

3.4 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線擬合的不確定度分量

表3 最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度-峰面積結(jié)果Table 3 Mass concentration-peak area results of standard solution fitted by least square method

用最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度-峰面積曲線，分別測(cè)定5種質(zhì)量濃度的肟菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，得到相應(yīng)的峰面積A，測(cè)定結(jié)果見表4。

由以上測(cè)量結(jié)果得到四螨嗪的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程為：

Y=2.304115X-0.047149，相關(guān)系數(shù)為0.9983

取勻質(zhì)好的芹菜樣品，分別稱7份20.00 g于具塞錐形瓶中，一份作為空白樣品，其余六份樣品分別加0.5 μg/mL肟菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL，則樣品中肟菌酯含量為25.0 μg/kg。運(yùn)用該曲線對(duì)芹菜加標(biāo)樣品及空白樣品進(jìn)行測(cè)定，被測(cè)芹菜樣品的測(cè)定次數(shù)為6，即p=6，則標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合得標(biāo)準(zhǔn)不確定度

式中：Ai——標(biāo)準(zhǔn)溶液各質(zhì)量濃度點(diǎn)測(cè)定的峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值

s——標(biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)物質(zhì)信號(hào)殘差的標(biāo)準(zhǔn)差，s=3.067

b——標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率，b=2.304115

p——芹菜樣品測(cè)定次數(shù)，p=6

n——標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合的總個(gè)數(shù)，n=5

m0——樣品測(cè)定6次的平均濃度為0.4805 μg/mL

mi——標(biāo)液濃度，μg/mL

則標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

因此，樣品在測(cè)定過程中，由標(biāo)準(zhǔn)溶液和校準(zhǔn)曲線各分量合成的不確定度為：

=0.0358

3.5 樣品稱量的不確定度

樣品的稱樣量為20.00 g時(shí)，則相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

urel(m)=0.00577 g/20.00 g=0.000288

3.6 樣品前處理過程體積引入的不確定度

樣品前處理過程中使用50 mL單標(biāo)吸量管1次，25 mL單標(biāo)吸量管1次，1 mL單標(biāo)吸量管1次，樣品前處理過程引入的相對(duì)不確定度見表5。

表4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制中玻璃量具引起的不確定度Table 4 Uncertainties caused by glass meters in standard solution preparation

由表5中的數(shù)據(jù)，合成前處理過程中，玻璃量器引入的相對(duì)不確定度為：

3.7 回收率因子的不確定度

urel(f)=0.256/96.1%=0.00266

3.8 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度各分量匯總

考慮待測(cè)組分含量，樣品前處理過程，樣品稱取，回收率因子的差異，各相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度見表5。

表5 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量Table 5 Relative standard uncertainty components

3.9 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度評(píng)定

由表6中各標(biāo)準(zhǔn)不確定度合成樣芹菜品中肟菌酯含量結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

3.10 擴(kuò)展不確定度評(píng)定

按照一般慣例，取包含因子k=2，則相對(duì)擴(kuò)展不確定度為urel(合成)×2= 0.0722，由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的平均值計(jì)算的芹菜樣品中肟菌酯含量最佳估算值為0.025 mg/kg，擴(kuò)展不確定度U=0.0722×0.025 mg/kg=0.001805 mg/kg≈0.002 mg/kg，因此氣相色譜質(zhì)譜法測(cè)定芹菜中肟菌酯含量X為0.025±0.002 mg/kg，k=2。

4 結(jié) 論

以氣相色譜質(zhì)譜法定量測(cè)定芹菜中肟菌酯含量討論了，芹菜中肟菌酯含量測(cè)定的不確定度的主要來(lái)源及其各不確定度分量的評(píng)定方法。當(dāng)取樣量為20.00 g，k=2(95%置信度) ，測(cè)量芹菜中的肟菌酯含量結(jié)果為(0.025±0.002)mg/kg。本次不確定度評(píng)定主要從標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制，標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的擬合，樣品稱取，以及回收率因子等方面對(duì)不確定度進(jìn)行評(píng)定。從各個(gè)不確定度分量來(lái)看，標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及回收率對(duì)擴(kuò)展不確定度的影響較大，而樣品稱取以及標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度對(duì)不確定度的來(lái)源影響較小。