蘇妙鈴，楊健妮，周秀悄，惠 陽，高敏敏，陳文豪

(海南師范大學(xué)熱帶藥用資源化學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南師范大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，海南 ?？?571127)

青金桔為蕓香科(Rutaceae)金柑屬(Fortunella)，又名青桔、山桔、年桔、綠桔，其主要種植于中國海南省，青金桔精油含量豐富，味道具有誘人的橘子類清香，據(jù)研究報(bào)道，青金桔皮多酚提取物具有較強(qiáng)的清除DPPH自由基和ABTS自由基能力[1]。青金桔色素對于H2O2的抗氧化能力較強(qiáng)，對于DPPH和羥基自由基的清除率都較高，但還原能力小于Vc[2]。此外，對水蒸氣蒸餾法、頂空固相微萃取法和同時(shí)蒸餾萃取法提取的青金桔揮發(fā)性成分進(jìn)行比較分析，3種提取物含有大量共有成分，但在組分和相對質(zhì)量分?jǐn)?shù)上存在一定差異[3]。

本實(shí)驗(yàn)利用氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用技術(shù)對青金桔果皮精油中化學(xué)成分進(jìn)行分離分析，以期為青金桔的進(jìn)一步開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 儀器、材料和試劑

7890A/5975C-GC/MSD氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國安捷倫公司；數(shù)顯恒溫水浴鍋，江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司。

無水乙醚(分析純)，天津市福晨化學(xué)試劑廠；無水硫酸鈉(分析純)，廣州化學(xué)試劑廠。青金桔2019年4月購買于海南省?？谑泄鹆盅筠r(nóng)貿(mào)市場。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 青金桔果皮精油的提取

青金桔洗凈晾干，剝果皮稱重237.220 g圓底燒瓶加入石油醚浸沒青金桔皮，然后分3次超聲共2 h，取三次青金桔皮的超聲浸出液進(jìn)行旋蒸濃縮，得到黃綠色具有柑橘類芬芳的油狀液體，稱重計(jì)算其產(chǎn)率。

1.2.2 青金桔果皮精油GC-MS測試

GC條件：石英毛細(xì)管柱HP-FFAP(30 m×0.25 mm，0.25 m)，程序升溫：柱初溫50 ℃，以5 ℃/min升到260 ℃，運(yùn)行時(shí)間52 min，載氣為He(99.99%)，柱流量1.0 mL/min，進(jìn)樣口溫度320 ℃，柱箱最高溫度325 ℃，分流比10:1，滯留時(shí)間1.3719 min，實(shí)驗(yàn)通過面積歸一化進(jìn)行定量。

MS條件：EI源，電子能量為70 eV，離子源溫度為230 ℃，四級桿溫度為150 ℃，溶劑延遲2.00 min，全掃描(Scan)采集模式，質(zhì)量范圍m/z 35～650 amu。

1.2.3 青金桔揮發(fā)油中檸檬烯的分離提純及結(jié)構(gòu)鑒定

稱取1.056 g青金桔精油溶解于石油醚，按質(zhì)量比1:1添加硅膠拌樣后，采用硅膠色譜柱進(jìn)行分離，以石油醚為洗脫溶劑，該洗脫部位經(jīng)薄層硅膠板檢測為單一化合物，該化合物采用核磁共振波譜(1H-NMR，13C-NMR)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定[4]。剩余樣品采用乙酸乙酯洗脫，真空濃縮后乙醚溶解，再進(jìn)行GC-MS分析，其GC條件和MS條件同上青金桔精油總油GC-MS測試。

2 結(jié)果與討論

2.1 青金桔果皮精油提取及GC-MS測試數(shù)據(jù)

從青金桔果皮中提取得到揮發(fā)油稱重為3.281 g，出油率為1.38%。

采用GC-MS聯(lián)用儀分析該揮發(fā)油的化學(xué)成分，經(jīng)化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)和用面積歸一化法從其總離子流圖(圖1)中計(jì)算各組分百分含量，按各峰的質(zhì)譜圖經(jīng)計(jì)算機(jī)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索，結(jié)合有關(guān)質(zhì)譜碎片峰，確定了其中49個(gè)化合物(表1)，占揮發(fā)油總量的87.54%。其中相對質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高的成分有：檸檬烯(51.06%)、1-甲基-5-亞甲基-8-(1-甲基乙基)-1E,6E-環(huán)十二烯(6.51%)、3,7-二甲基-1,6-辛二烯-3-醇(4.18%)等。

圖1 青金桔果皮精油GC-MS總離子流圖Fig.1 Total ion chromatogram of GC-MS of the volatile oil from the peel of green kumquat

表1 青金桔果皮精油化學(xué)成分的GC-MS分析Table 1 GC-MS analysis the constituents of the volatile oil from the peel of green kumquat

續(xù)表1

2.2 檸檬烯的核磁共振碳譜數(shù)據(jù)[4]

13C NMR (101 MHz, CDCl3)δ150.2, 133.7, 120.6, 108.3, 41.1, 30.8, 29.7, 26.9, 23.4, 20.8。

2.3 提取檸檬烯后剩余青金桔精油GC-MS的測試結(jié)果

其總離子流圖見圖2，各峰的質(zhì)譜圖經(jīng)計(jì)算機(jī)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索，結(jié)合有關(guān)質(zhì)譜碎片峰，確定了其中75個(gè)化合物(表2)，占揮發(fā)油總量的81.14%。其中相對質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高的成分有：十氫-α, α, 4a-三甲基-8-亞甲基-2-萘甲醇(13.63%)、乙酸-(E)-3,7-二甲基-2,6-辛二烯酯(9.87%)、3,7-二甲基-1,6-辛二烯-3-醇(7.21%)、鄰苯二甲酸二正辛酯(7.27%)等。

圖2 分離檸檬烯后青金桔果皮精油GC-MS總離子流圖Fig.2 Total ion chromatogram of GC-MS of the volatile oil from the peel of green kumquat after extraction of limonene

表2 分離檸檬烯后青金桔果皮精油化學(xué)成分GC-MS分析Table 2 GC-MS analysis the constituents of volatile oil from the peel of green kumquat after isolation of limonene

續(xù)表2

3 結(jié) 論

實(shí)驗(yàn)采用超聲波輔助有機(jī)溶劑取法從青金桔果皮中提取精油，精油提取率為1.38%，采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)對青金桔果皮精油成分進(jìn)行鑒定，確定了其中49個(gè)化合物，占揮發(fā)油總量的87.54%，檸檬烯含量最高，達(dá)51.06%，檸檬烯用途廣泛，如可用于配制香料，可以作為堿性清潔劑在家庭和機(jī)械中使用，在食品添加劑和生物農(nóng)藥中也廣泛使用[4-5]。經(jīng)硅膠柱色譜及核磁共振技術(shù)完成該化合物的分離及結(jié)構(gòu)鑒定。并對提取檸檬烯后的油樣采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行再次分析，共鑒定出70種化合物，占鑒定精油總量的81.14%。本實(shí)驗(yàn)對青金桔果皮精油中的化學(xué)成分進(jìn)行了較詳細(xì)的檢測分析，旨在為其科學(xué)開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。