楊佳怡 牛春艷 劉瑛穎 傅博強(qiáng) 王晶

（中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，北京 100029）

隨著我國(guó)人民生活水平的提高，對(duì)于生鮮牛乳的需求日益增加。生乳中的體細(xì)胞數(shù)是衡量乳品質(zhì)量的重要指標(biāo)，體細(xì)胞數(shù)過(guò)高將破壞牛乳中的營(yíng)養(yǎng)成分，同時(shí)提示奶牛乳房炎的發(fā)生。因此，體細(xì)胞的數(shù)量將成為牛乳分級(jí)的重要依據(jù)之一。利用基于不同原理的方法和不同儀器檢測(cè)牛乳中的體細(xì)胞數(shù)目，如何保證結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性，仍是值得關(guān)注的問(wèn)題。本文中在闡述現(xiàn)有常見體細(xì)胞檢測(cè)方法原理的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討了不同方法的性能指標(biāo)和質(zhì)控要求，并提出通過(guò)計(jì)量校準(zhǔn)來(lái)保證測(cè)量結(jié)果一致性的重要意義。

1 體細(xì)胞與DHI

1.1 DHI的概念

奶牛群體改良計(jì)劃（Dairy herd improvement，DHI）是指通過(guò)測(cè)量并記錄奶牛的產(chǎn)奶量、牛乳中主要成分（乳脂、乳蛋白等）、體細(xì)胞數(shù)目等多項(xiàng)指標(biāo)，經(jīng)過(guò)分析得到反映奶牛場(chǎng)配種、繁殖、飼養(yǎng)、疾病以及生產(chǎn)性能等信息，從而為飼養(yǎng)和管理工作提供科學(xué)的依據(jù)。結(jié)合DHI 與遺傳學(xué)分析，德國(guó)選育出的荷斯坦牛具備遺傳背景優(yōu)良、品質(zhì)突出的特點(diǎn)，成為世界奶業(yè)的重要種屬資源［1］。國(guó)外奶牛生產(chǎn)先進(jìn)國(guó)家，早在19 世紀(jì)末就開始進(jìn)行DHI 測(cè)試工作，如美國(guó)、法國(guó)、荷蘭等乳業(yè)發(fā)達(dá)國(guó)家通過(guò)DHI 體系為奶農(nóng)提供指導(dǎo)服務(wù)，使牛群的遺傳水平和生產(chǎn)性能持續(xù)提高［2］。我國(guó)的DHI 起步較晚，1992 年引入DHI 技術(shù)，1999 年中國(guó)奶業(yè)協(xié)會(huì)組織成立了“全國(guó)奶牛生產(chǎn)性能測(cè)定（DHI）工作委員會(huì)”［3］，截止2013 年，我國(guó)奶牛參加DHI 測(cè)定的比例不足8%（美國(guó)、日本等發(fā)達(dá)國(guó)家的參測(cè)率已達(dá)50%以上）［4］。自2008 年起，我國(guó)大規(guī)模開展DHI 工作。2015 年農(nóng)業(yè)部根據(jù)《中國(guó)奶牛群體遺傳改良計(jì)劃（2008-2020）年》規(guī)定，制定了《奶牛生產(chǎn)性能測(cè)定工作辦法》。DHI 工作在我國(guó)逐步受到重視和信賴。

1.2 體細(xì)胞對(duì)乳制品的影響

體細(xì)胞數(shù)測(cè)定（Somatic cell count，SCC）是指每毫升牛奶中含有的體細(xì)胞數(shù)量，牛奶中的體細(xì)胞通常包括淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞以及少量的上皮細(xì)胞。體細(xì)胞數(shù)作為DHI 的重要檢測(cè)指標(biāo)之一，與乳制品的質(zhì)量密切相關(guān)。優(yōu)質(zhì)生牛乳所具備的特征大致包括以下幾個(gè)方面：（1）包括蛋白質(zhì)和脂肪等的各項(xiàng)營(yíng)養(yǎng)成分完整；（2）無(wú)異味；（3）檢測(cè)水平之下的藥物殘留量，沒有摻雜水或者其他添加物；（4）含有的細(xì)菌總量較低；（5）含有較低的體細(xì)胞數(shù)目［5］。體細(xì)胞的含量在衡量生牛乳質(zhì)量的多個(gè)指標(biāo)中受到更多的關(guān)注，因?yàn)轶w細(xì)胞含量高往往會(huì)提高牛乳中酶活水平，而較高的酶活水平將導(dǎo)致牛乳中營(yíng)養(yǎng)成分被破壞，從而對(duì)后續(xù)加工乳制品的質(zhì)量造成影響［6］。體細(xì)胞數(shù)量是診斷奶牛是否感染乳房炎或隱性乳房炎的主要指標(biāo)，當(dāng)奶牛乳房的炎癥加劇時(shí)，乳腺分泌大量的白細(xì)胞等免疫細(xì)胞，使牛奶中的體細(xì)胞數(shù)目顯著增加，而炎癥消失后，體細(xì)胞數(shù)目隨之減少。通過(guò)觀察牛奶中體細(xì)胞數(shù)目的變化，可以幫助盡早發(fā)現(xiàn)并隔離治療患有乳房炎的奶牛，不僅能夠減少由于奶牛乳房炎引起的經(jīng)濟(jì)損失，而且是控制牧場(chǎng)抗生素過(guò)度使用的有效手段［7］。

1.3 國(guó)內(nèi)外體細(xì)胞限量標(biāo)準(zhǔn)

國(guó)際上規(guī)定以每毫升牛奶中20 萬(wàn)個(gè)體細(xì)胞作為判斷感染乳房炎的臨界值，每毫升牛奶中50 萬(wàn)個(gè)以上體細(xì)胞表明奶?；紒喤R床（隱性）乳房炎［8-9］。歐盟與新西蘭對(duì)生乳中體細(xì)胞數(shù)的規(guī)定是低于40 萬(wàn)個(gè)/mL，加拿大規(guī)定是低于50 萬(wàn)個(gè)/mL，美國(guó)規(guī)定低于75 萬(wàn)個(gè)/mL，并且各國(guó)正在考慮將體細(xì)胞限量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步提高（達(dá)到更低的體細(xì)胞數(shù)）［10］。

2016 年中國(guó)農(nóng)墾乳業(yè)發(fā)展峰會(huì)上發(fā)布了《中國(guó)農(nóng)墾生鮮乳生產(chǎn)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》。該企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)首次將我國(guó)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中沒有提到但反映奶牛乳房健康水平的體細(xì)胞數(shù)首次納入到了此次新發(fā)布的標(biāo)準(zhǔn)中，限量每毫升為40 萬(wàn)個(gè)以下。2017 年中國(guó)奶業(yè)協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T /DAC 003-2017《學(xué)生飲用奶生牛乳》中規(guī)定體細(xì)胞數(shù)限量40 萬(wàn)個(gè)/mL。2018 年修訂的GB 19301《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)生乳》（第一次討論稿）中首次增加了體細(xì)胞限量值分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。說(shuō)明我國(guó)已開始重視體細(xì)胞對(duì)于乳制品的重要性，這對(duì)我國(guó)奶業(yè)發(fā)展有著重要的意義。

2 體細(xì)胞檢測(cè)方法及檢測(cè)儀器

2.1 國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的體細(xì)胞檢測(cè)方法及檢測(cè) 儀器

GB 19301《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 生乳》（第一次討論稿）中體細(xì)胞檢測(cè)方法為NY/T 800 《生鮮牛乳中體細(xì)胞測(cè)定方法》。NY/T 800 是修改采用ISO 與IDF（國(guó)際乳品聯(lián)合會(huì)）聯(lián)合制定的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)ISO 13366-1：1997《牛奶 體細(xì)胞測(cè)定 第一部分 顯微鏡法（參考方法）》、ISO 13366-2：1997《牛奶 體細(xì)胞測(cè)定 第二部分 電子粒子計(jì)數(shù)法》和ISO 13366-3：1997《牛奶 體細(xì)胞測(cè)定 第三部分 熒光光電計(jì)數(shù)法》。目前，ISO 現(xiàn)行有效的是第二版的ISO 13366，包括第一部分（標(biāo)準(zhǔn)名稱未改變）及第二部分《牛奶 體細(xì)胞測(cè)定 第二部分 熒光光電計(jì)數(shù)儀操作指南》 （表1）。

顯微鏡法，即人工鏡檢法，是體細(xì)胞測(cè)定的參考方法，利用顯微鏡觀察涂布在載玻片上的牛奶樣品并進(jìn)行人工的體細(xì)胞計(jì)數(shù)。該方法由人工操作，且對(duì)操作人員要求較高，不適用于大量檢測(cè)［11］。

表1 體細(xì)胞檢測(cè)方法國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)

電子粒子計(jì)數(shù)法，也稱庫(kù)爾特計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)法，該計(jì)數(shù)方法的原理是利用牛奶中體細(xì)胞在通過(guò)電極狹縫使由于增大電阻而使電壓上升的現(xiàn)象，最終通過(guò)高于臨界水平的電脈沖產(chǎn)生的數(shù)量來(lái)計(jì)算體細(xì)胞的數(shù)目［12］。新版的ISO 標(biāo)準(zhǔn)取消了此方法相關(guān)內(nèi)容，目前市場(chǎng)上此類儀器相對(duì)較少。

熒光光電計(jì)數(shù)法，利用熒光光電計(jì)數(shù)儀對(duì)體細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，該類計(jì)數(shù)儀工作原理是首先利用染料（例如溴化乙錠）對(duì)體細(xì)胞的DNA 進(jìn)行染色，在檢測(cè)過(guò)程中控制體細(xì)胞逐個(gè)通過(guò)流路系統(tǒng)，在相應(yīng)激發(fā)光的處理下，體細(xì)胞發(fā)出熒光信號(hào)，由捕捉到的熒光信號(hào)經(jīng)過(guò)光電倍增器放大并輸出光脈沖，分析計(jì)算得到計(jì)數(shù)結(jié)果［13］。因?yàn)闊晒夤怆娪?jì)數(shù)法具有檢測(cè)速度較快、重復(fù)測(cè)量誤差范圍較小等特點(diǎn)，且樣品處理過(guò)程較簡(jiǎn)單，適合大批量牛奶樣品的集中 檢測(cè)。

目前奶站及企業(yè)中采用較多的即是利用熒光光電計(jì)數(shù)原理的體細(xì)胞檢測(cè)儀，具代表性的有丹麥Foss 公司及美國(guó)Bentley 公司的體細(xì)胞檢測(cè)儀［14］。例如，有研究者利用丹麥Foss 公司的體細(xì)胞檢測(cè)儀對(duì)奶牛場(chǎng)的牛乳體細(xì)胞數(shù)做了相關(guān)的研究，發(fā)現(xiàn)乳汁比重和牛乳中的乳蛋白、乳糖和非脂固形物含量均隨著體細(xì)胞數(shù)目的升高而下降，體細(xì)胞數(shù)與乳糖和非脂固形物含量呈顯著的負(fù)相關(guān)性［15］。同時(shí)，研究者也證明了牛乳中體細(xì)胞數(shù)目與抗氧化指標(biāo)的相關(guān)性［16］。體細(xì)胞數(shù)目是牛乳營(yíng)養(yǎng)控制的重要指標(biāo)，熒光光電計(jì)數(shù)法被廣泛應(yīng)用于牛乳質(zhì)量的科學(xué)分析。

(1) 針對(duì)于平面形狀類似于正方形，且平面的長(zhǎng)度和寬度尺寸太大，所處地質(zhì)條件很差的基坑工程，如果采用內(nèi)支撐結(jié)構(gòu)體系，需設(shè)置較多立柱，導(dǎo)致水平支撐構(gòu)件斷面增大、自重增大和施工工期加長(zhǎng)；如采用不設(shè)內(nèi)支撐的懸臂支護(hù)樁或者樁錨體系，由于地質(zhì)條件較差，且工程周邊存在在建建筑，導(dǎo)致工程無(wú)法實(shí)施。采用明挖順筑與蓋挖逆筑的盆式開挖法施工時(shí)，以車站結(jié)構(gòu)板在水平向的整體剛度取代水平支撐體系，以及主體結(jié)構(gòu)進(jìn)行逆作法施工，既減少了工程量，又節(jié)省了施工工期，同時(shí)還為土方開挖和材料運(yùn)輸提供了空曠空間。

在具備上述優(yōu)勢(shì)的同時(shí)，熒光光電計(jì)數(shù)法所需的儀器和配套試劑較為昂貴，提高了牛乳中體細(xì)胞的檢測(cè)成本。由于該方法中體細(xì)胞的檢測(cè)是基于DNA 的染色，DNA 染色的效率直接影響體細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果，有研究者利用Foss Matic 檢測(cè)體細(xì)胞數(shù)目，觀察到在60℃對(duì)樣品進(jìn)行孵育染色條件下測(cè)量得到的體細(xì)胞數(shù)明顯高于45℃孵育染色所得的結(jié)果［17］。如果對(duì)人工鏡檢法、庫(kù)爾特計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)法和熒光光電計(jì)數(shù)法進(jìn)行比較，有研究報(bào)道了熒光光電計(jì)數(shù)法對(duì)相同牛乳樣品中體細(xì)胞的測(cè)量結(jié)果高于前兩種方法［18］，分析其原因可能是熒光光電檢測(cè)系統(tǒng)中背景噪聲干擾引起的系統(tǒng)誤差。測(cè)量過(guò)程中的樣品處理?xiàng)l件和光電通路的檢測(cè)效率都將影響熒光光電計(jì)數(shù)法檢測(cè)的準(zhǔn)確度。

2.2 其它體細(xì)胞檢測(cè)方法及儀器

根據(jù)檢測(cè)對(duì)象的不同，可以將牛奶中體細(xì)胞的檢測(cè)方法分為直接方法和間接方法。前面提到的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法都是直接對(duì)體細(xì)胞進(jìn)行觀察和測(cè)量，屬于直接測(cè)量方法。另外還有基于計(jì)算機(jī)視覺的直接計(jì)數(shù)方法，該方法在對(duì)牛奶中體細(xì)胞進(jìn)行染色后，通過(guò)數(shù)碼顯微鏡采集細(xì)胞圖像（彩色圖像）；隨后將細(xì)胞突變灰度化，通過(guò)掃描并統(tǒng)計(jì)一定面積范圍內(nèi)的像素區(qū)域，來(lái)計(jì)算牛奶中的體細(xì)胞數(shù)目［19］，此類體檢細(xì)胞檢測(cè)儀器有丹麥ChemoMetec 公司的NucleoCounter SCC-400 等。

體細(xì)胞的間接檢測(cè)方法則是針對(duì)體細(xì)胞破裂后釋放出的DNA、組蛋白等物質(zhì)，以及體細(xì)胞含量上升導(dǎo)致的牛奶的粘稠度、pH 值、介電常數(shù)、流變特性等物理化學(xué)指標(biāo)的變化，對(duì)體細(xì)胞的數(shù)目進(jìn)行間接的測(cè)量。其中包括：加利福尼亞細(xì)胞測(cè)定法（CMT）、DNA 含量測(cè)定法、牛奶pH 值測(cè)定法、黏度測(cè)定法、電容法、近紅外線測(cè)定法、凝乳法以及超聲波測(cè)定法等［20-23］。近年來(lái)快速發(fā)展的微流控技術(shù)也被應(yīng)用于牛奶體細(xì)胞的檢測(cè)，Choi 等研制了可以同時(shí)檢測(cè)牛奶中體細(xì)胞、微生物以及抗生素殘留物的微流芯片傳感器［24-25］。

牛奶體細(xì)胞的間接檢測(cè)方法具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)成本低等優(yōu)勢(shì)，但其最大的問(wèn)題是檢測(cè)的準(zhǔn)確度較低，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)未推薦使用間接檢測(cè)方法。相比之下，直接檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度較高，但往往存在儀器成本高、樣品處理過(guò)程繁瑣等問(wèn)題［26-27］，為了更好的在乳品產(chǎn)業(yè)中推廣應(yīng)用體細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)，還需要研究并改進(jìn)現(xiàn)有的檢測(cè)方法，以期實(shí)現(xiàn)牛奶中體細(xì)胞快速準(zhǔn)確、成本控制在一定范圍內(nèi)的直接測(cè)量。

3 體細(xì)胞檢測(cè)儀校準(zhǔn)

3.1 校準(zhǔn)的含義

在JJF 1001-2011《通用計(jì)量術(shù)語(yǔ)及定義》［28］中，將校準(zhǔn)定義為“在規(guī)定條件下的一組操作，其第一步是確定由測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)提供的量值與相應(yīng)示值之間的關(guān)系，第二步則是用此信息確定由示值獲得測(cè)量結(jié)果的關(guān)系，這里測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)提供的量值與相應(yīng)示值都具有測(cè)量不確定度”。通常，只把上述定義中的第一步認(rèn)為是校準(zhǔn)。此定義與ISO/IEC 導(dǎo)則99-2007（VIM）［29］中相應(yīng)條款一致。因此，校準(zhǔn)是將計(jì)量器具的示值與測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)相比較，確定計(jì)量器具的計(jì)量特性，從而確保量值準(zhǔn)確。通過(guò)不間斷的校準(zhǔn)鏈，可實(shí)現(xiàn)測(cè)量結(jié)果向高等級(jí)測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)的計(jì)量溯源性。

3.2 體細(xì)胞檢測(cè)儀校準(zhǔn)的意義

由于新國(guó)標(biāo)已計(jì)劃將體細(xì)胞數(shù)限量納入生乳分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，體細(xì)胞數(shù)的準(zhǔn)確測(cè)定將直接影響原奶奶源的正確分級(jí)。目前市場(chǎng)上體細(xì)胞檢測(cè)采用不同原理、不同生產(chǎn)廠商的體細(xì)胞檢測(cè)儀進(jìn)行檢測(cè)，儀器的檢測(cè)性能主要依靠廠家提供的質(zhì)控樣品進(jìn)行控制。但是往往質(zhì)控樣品存在儀器間不通用，缺乏量值溯源性等問(wèn)題，造成不同原理的儀器之間檢測(cè)結(jié)果沒有可比性。

對(duì)測(cè)量?jī)x器進(jìn)行計(jì)量校準(zhǔn)，就是將儀器對(duì)測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)際測(cè)量值與測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)稱值進(jìn)行比較，分析測(cè)量?jī)x器的測(cè)量性能，通過(guò)嚴(yán)格的計(jì)量校準(zhǔn)環(huán)節(jié)，可提高檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的可比、統(tǒng)一，真正體現(xiàn)體細(xì)胞數(shù)限量標(biāo)準(zhǔn)的意義，從而正確區(qū)分優(yōu)質(zhì)奶源與一般奶源，合理引導(dǎo)奶源的區(qū)別加工，規(guī)范市場(chǎng)秩序。作為DHI 測(cè)定體系的重要參數(shù)，體細(xì)胞數(shù)的準(zhǔn)確測(cè)定有利于優(yōu)化奶牛群體結(jié)構(gòu)，促進(jìn)乳業(yè)的科學(xué)性及規(guī)范化發(fā)展。

3.3 體細(xì)胞檢測(cè)儀校準(zhǔn)的參數(shù)

基于日常開展的質(zhì)控程序，體細(xì)胞檢測(cè)儀需要進(jìn)行校驗(yàn)的指標(biāo)可包括空白檢查，攜帶污染率（Carry-over，CO）檢查，試劑與檢測(cè)樣品體積比檢查，儀器短期穩(wěn)定性監(jiān)控與質(zhì)控圖繪制、重復(fù)性檢查、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)再現(xiàn)性檢查、實(shí)驗(yàn)室間再現(xiàn)性檢查、實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)等內(nèi)容。在儀器校準(zhǔn)前，需保證儀器的空白檢查、攜帶污染率（CO）、緩沖液與樣品體積比、重復(fù)性等指標(biāo)滿足測(cè)量要求。NY/T 800 中，指出熒光光電計(jì)數(shù)法測(cè)定體細(xì)胞數(shù)需要進(jìn)行校正，在體細(xì)胞含量為（40-50）萬(wàn)個(gè)/mL 時(shí)，測(cè)定平均值與標(biāo)樣指標(biāo)值的相對(duì)誤差應(yīng)≤10%。

在第二版的ISO 13366-2 中，對(duì)儀器的校準(zhǔn)及日常質(zhì)控做了詳細(xì)的規(guī)定。體細(xì)胞的校準(zhǔn)主要通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)實(shí)現(xiàn)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的生產(chǎn)需滿足ISO 導(dǎo)則34《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)生產(chǎn)者能力的通用要求》的要求。已有國(guó)外的研究機(jī)構(gòu)報(bào)道了牛乳體細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制工作，利用牛乳中分離得到的體細(xì)胞，研究者研制了含有不同濃度體細(xì)胞的全脂和脫脂牛乳標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，并進(jìn)行了穩(wěn)定性檢測(cè)［30］。然而，國(guó)內(nèi)還沒有針對(duì)牛乳中體細(xì)胞的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。目前體細(xì)胞檢測(cè)儀器的校準(zhǔn)主要依靠生產(chǎn)廠家提供的質(zhì)控品進(jìn)行自校準(zhǔn)。如丹麥Foss 公司提供模擬體細(xì)胞的微球（FMA 樣品）來(lái)監(jiān)控儀器，Bentley 公司提供適用于Bentley 儀器校準(zhǔn)的體細(xì)胞質(zhì)控品。

ISO 13366-2 中建議針對(duì)不同類型的乳品，選擇覆蓋體細(xì)胞測(cè)量范圍的至少5 個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)開展校準(zhǔn)程序。目前市場(chǎng)上不同類型體細(xì)胞檢測(cè)儀在研發(fā)階段，對(duì)儀器性能指標(biāo)進(jìn)行評(píng)估，大多儀器選擇3 個(gè)不同濃度進(jìn)行重復(fù)性檢測(cè)，選擇與人工鏡檢方法定值結(jié)果的相對(duì)誤差來(lái)評(píng)估儀器準(zhǔn)確性（表2）。儀器宣稱指標(biāo)均滿足ISO 標(biāo)準(zhǔn)的限量要求。

同時(shí)ISO 13366-2 中指出，在體細(xì)胞測(cè)量范圍內(nèi)，儀器的讀數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量值之間應(yīng)滿足線性關(guān)系。用低體細(xì)胞數(shù)的牛奶稀釋高體細(xì)胞數(shù)的牛奶，得到測(cè)量范圍內(nèi)一系列（至少5 個(gè)）樣品進(jìn)行測(cè)量，每個(gè)樣品至少測(cè)量4 次，將理論值平均值與測(cè)量值平均值做線性回歸，從回歸曲線計(jì)算殘差值ei=yi-（bxi+a）。ISO 13366-2 中選擇比例系數(shù)rc來(lái)表征線性關(guān)系。rc應(yīng)≤2%。rc由以下公式計(jì)算：

表2 不同類型體細(xì)胞檢測(cè)儀性能指標(biāo)及ISO 標(biāo)準(zhǔn)限量值

其中：emax：最大殘差值；emin：最小殘差值；Mmax：測(cè)量樣品的上限值；Mmin：測(cè)量樣品的下限值。

從以上參數(shù)可以看出，體細(xì)胞數(shù)的準(zhǔn)確測(cè)定需要對(duì)儀器進(jìn)行全面檢查與質(zhì)量控制，當(dāng)進(jìn)行大量樣品或長(zhǎng)期檢測(cè)之后，儀器的示值必須經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)，才能保證結(jié)果的準(zhǔn)確性與可比性。

4 總結(jié)

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)水平的提高和人民生活的改善，對(duì)于生牛乳的品質(zhì)要求也逐漸提高，體細(xì)胞數(shù)目是牛乳質(zhì)量控制的重要指標(biāo)，體細(xì)胞數(shù)過(guò)高將導(dǎo)致牛乳中包括乳糖、乳蛋白等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的含量降低，并提示乳牛出現(xiàn)乳房炎等健康問(wèn)題。因此，低體細(xì)胞數(shù)是優(yōu)質(zhì)生乳的指標(biāo)之一。新的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)將實(shí)施生乳分級(jí)，體細(xì)胞數(shù)作為重要分級(jí)指標(biāo)，需要進(jìn)行準(zhǔn)確檢測(cè)。熒光光電計(jì)數(shù)法由于具有檢測(cè)快速、誤差范圍小等優(yōu)勢(shì)，被較多奶站和乳制品企業(yè)應(yīng)用于牛乳中體細(xì)胞的檢測(cè)。與此同時(shí)，還存在基于其他不同原理的體細(xì)胞檢測(cè)方法。由于檢測(cè)結(jié)果來(lái)源于不同的方法、不同的儀器以及不同的儀器生產(chǎn)廠家，因此需要進(jìn)行校準(zhǔn)來(lái)保證結(jié)果的準(zhǔn)確性與可比性，進(jìn)而指導(dǎo)牛乳的科學(xué)分級(jí)。

早在20 世紀(jì)，國(guó)外的研究者已經(jīng)開展了牛乳中體細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究工作，然而國(guó)內(nèi)至今還沒有針對(duì)牛乳體細(xì)胞的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，日常使用的體細(xì)胞檢測(cè)儀器主要依賴于生產(chǎn)廠商提供的質(zhì)控品進(jìn)行自校準(zhǔn)，使檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性難以保證，無(wú)法滿足牛乳質(zhì)量控制與科學(xué)管理的需求。目前，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院與全國(guó)畜牧總站等正在開展體細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究工作，將為體細(xì)胞檢測(cè)儀的校準(zhǔn)提供溯源依據(jù)。