喬雁冰，李世順，崔文博，左然濤，常亞青

(大連海洋大學(xué)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部北方海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遼寧 大連 116023)

克氏原螯蝦(Procambarusclarkii)，屬節(jié)肢動(dòng)物門(Arthropoda)、甲殼綱(Crustacea)、十足目(Decapoda)、爬行亞目(Reptantia)、螯蝦科(Cambaridae)、原螯蝦屬[1](Procambarus)，俗稱小龍蝦、紅螯蝦、淡水小龍蝦及紅色沼澤螯蝦等?？耸显r的原產(chǎn)地是美國南部和墨西哥北部[2-3]等。在20世紀(jì)30年代作為外來物種從日本引進(jìn)到中國南京，因其適應(yīng)性強(qiáng)、生長快、繁殖周期短和成活率高等特點(diǎn)，如今已經(jīng)廣泛分布在中國江蘇、湖北和安徽等省市[4-9]。據(jù)《2019年中國漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒》數(shù)據(jù)顯示[10]，2018年克氏原螯蝦產(chǎn)量為1 638 662 t，比2017年增長45.05%，表明克氏原螯蝦已經(jīng)成為中國重要的水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)蝦類。

近年來，甲殼動(dòng)物在全國范圍內(nèi)的產(chǎn)業(yè)推廣和人工養(yǎng)殖方面取得了較大的發(fā)展[11]，養(yǎng)殖面積不斷擴(kuò)大，同時(shí)也面臨著嚴(yán)峻的病害問題，制約著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展[12-13]。在甲殼動(dòng)物人工養(yǎng)殖過程中，相關(guān)疾病的暴發(fā)是由各種原因綜合形成的，環(huán)境因子作為甲殼動(dòng)物疾病暴發(fā)的主要原因之一[14]，與機(jī)體的免疫防御息息相關(guān)，已引起了學(xué)者的廣泛關(guān)注。鹽度是一種重要的環(huán)境生態(tài)因子，水體鹽度的變化對(duì)甲殼動(dòng)物的生存、生長、生活習(xí)性和生理過程都有顯著的影響[15-16]。在養(yǎng)殖過程中，鹽度急劇變化會(huì)破壞甲殼動(dòng)物的滲透壓平衡，引起機(jī)體產(chǎn)生一系列生理生化反應(yīng)，在此過程中免疫機(jī)能會(huì)顯著降低，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致生物較高的死亡率[17]。國內(nèi)外已有大量關(guān)于環(huán)境因子對(duì)甲殼動(dòng)物免疫防御能力影響的研究[14,18-21]，但滲透環(huán)境對(duì)甲殼動(dòng)物的影響是近幾年隨著養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展和養(yǎng)殖環(huán)境的改變才得到了關(guān)注。鹽度對(duì)蝦蟹類的呼吸代謝、生長存活和免疫都具有顯著的影響。研究發(fā)現(xiàn)高鹽和低鹽脅迫對(duì)三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)的非特異性免疫會(huì)產(chǎn)生顯著影響并產(chǎn)生比較強(qiáng)的應(yīng)激反應(yīng)[22]；在對(duì)中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)的研究中發(fā)現(xiàn)，高鹽脅迫會(huì)激活免疫因子進(jìn)而影響其免疫防御能力[23]。

隨著市場(chǎng)需求的增加，克氏原螯蝦養(yǎng)殖面積不斷擴(kuò)大，近年來國內(nèi)開始嘗試鹽堿地養(yǎng)殖，但是該養(yǎng)殖模式下克氏原螯蝦的產(chǎn)量和成活率都較低，亟需探明鹽度脅迫對(duì)克氏原螯蝦生理指標(biāo)的影響規(guī)律，用以指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐，減少經(jīng)濟(jì)損失。張龍崗等[24]研究發(fā)現(xiàn)低鹽度可激活克氏原螯蝦肝胰腺中抗氧化酶活性，金彩霞等[25]研究發(fā)現(xiàn)鹽度脅迫對(duì)克氏原螯蝦血淋巴滲透壓、Na+/K+-ATPase酶和生物胺活性具有顯著影響，劉國興[26]發(fā)現(xiàn)鹽度變化會(huì)顯著影響克氏原螯蝦攝食量、攝食時(shí)間和運(yùn)動(dòng)比率。本研究通過急性鹽度脅迫實(shí)驗(yàn)，探究克氏原螯蝦在不同鹽度條件下血淋巴中抗氧化能力和非特異性免疫響應(yīng)，以期為開展鹽堿地養(yǎng)殖克氏原螯蝦提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和樣品采集

實(shí)驗(yàn)所用克氏原螯蝦購買自大連市長興水產(chǎn)品交易市場(chǎng)，選擇結(jié)構(gòu)完整、體色鮮明、活力較好、大小均勻，體重為(11.05±0.12)g的克氏原螯蝦用于實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)室條件下玻璃鋼水槽(1 000 L)中暫養(yǎng)一周，暫養(yǎng)期間，每天換水1/2，按體重的3%投喂商業(yè)人工配合飼料(粗蛋白28%、粗脂肪6%和灰分≤15%)2次，投喂2 h后吸出殘餌和糞便。實(shí)驗(yàn)期間，水溫18～20 ℃，溶解氧保持6 mg/L以上，pH在7.8～8.2之間。

實(shí)驗(yàn)用淡水均為經(jīng)過徹底曝氣并存放一周的無氯淡水，用提前準(zhǔn)備的無氯淡水和經(jīng)過砂濾處理的自然海水調(diào)配鹽度(15‰和30‰)，并以無氯淡水組(0‰)作為對(duì)照。在實(shí)驗(yàn)開始前一天暫停餌料投喂，選取暫養(yǎng)池中活力較好的360只克氏原螯蝦進(jìn)行隨機(jī)分組試驗(yàn)，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)組，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)投放40只大小均勻的克氏原螯蝦。實(shí)驗(yàn)采用自然光照，水槽中投放庇護(hù)物，防止打架和互殘，實(shí)驗(yàn)期間一切管理措施和暫養(yǎng)期間一致。實(shí)驗(yàn)開始后，從脅迫開始計(jì)時(shí)，在15 min、24 h和48 h時(shí)隨機(jī)取樣，每次取樣時(shí)每個(gè)水槽迅速撈出4只蝦，用1 mL無菌注射器從每一只擦拭干凈的蝦的頭胸甲2/3處插入，在心臟中抽取血淋巴液于2 mL離心管中，此過程在碎冰上進(jìn)行，每組平行中克氏原螯蝦的血淋巴樣品為一個(gè)單獨(dú)樣本，4 ℃條件下過夜，之后取出凝固的血淋巴并搗碎，于4 ℃條件下8 000 g離心20 min[27]，將上清液轉(zhuǎn)移到1.5 mL離心管中，放置在-80 ℃冷凍保存，待檢。

1.2 樣本檢測(cè)

抗氧化酶和非特異性免疫酶酶活性測(cè)試均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒，所有檢測(cè)步驟嚴(yán)格按照試劑盒上的說明書操作。采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性；采用分光光度計(jì)比色法測(cè)定過氧化氫酶(catalase，CAT)活性；采用分光光度計(jì)測(cè)定酚氧化酶(phenoloxidase，POX)活性；采用TBA顯色法測(cè)定丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量；采用磷酸苯二鈉法測(cè)定堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，AKP)活性；采用可見分光光度法測(cè)定酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)活性和采用比色法測(cè)定溶菌酶(lysozyme，LZM)活性。

1.3 數(shù)據(jù)分析

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2013和SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用單因素方差進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，比較不同處理組或者不同取樣時(shí)間之間的均值差異采用Turkey方法進(jìn)行多重比較，以P<0.05作為不同處理組之間差異顯著標(biāo)準(zhǔn)。數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”(mean±SD，n=3)表示。

2 結(jié)果

2.1 鹽度對(duì)克氏原螯蝦血淋巴中SOD和CAT活性的影響

如表1所示，與對(duì)照組相比，鹽度15‰和30‰組在脅迫下，克氏原螯蝦血淋巴中SOD活性變化顯著，48 h之內(nèi)均呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢(shì)(P<0.05)，并都在24 h達(dá)到最大值。在同一時(shí)間點(diǎn)上，隨著鹽度的升高SOD活力也出現(xiàn)了顯著的變化，與對(duì)照組比較，在15 min和24 h時(shí)，鹽度15‰和30‰組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，脅迫48 h時(shí)，3個(gè)實(shí)驗(yàn)組之間沒有顯著差異(P>0.05)。

如表2所示，鹽度對(duì)克氏原螯蝦血淋巴中CAT活性具有顯著影響(P<0.05)，24 h時(shí)鹽度15‰組的CAT活力顯著高于對(duì)照組和鹽度30‰組(P<0.05)，而對(duì)照組和鹽度30‰組之間沒有顯著變化(P>0.05)；鹽度15‰組的CAT活性在24 h時(shí)顯著高于脅迫15 min和48 h(P<0.05)，在其它時(shí)間點(diǎn)上則沒有差異(P>0.05)。

表1 鹽度對(duì)克氏原螯蝦血淋巴中SOD活性的影響Tab.1 Effects of salinity on SOD activity of haemolymph in Procambarus clarkii U·mL-1, n=3

注：同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)中不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)；同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)中不同大寫字母表示顯著差異(P<0.05)。下同。

表2 鹽度對(duì)克氏原螯蝦血淋巴中CAT活性的影響Tab.2 Effects of salinity on CAT activity of haemolymph in Procambarus clarkii U·mL-1，n=3

2.2 鹽度對(duì)克氏原螯蝦血淋巴中POX活性的影響

如表3所示，鹽度脅迫對(duì)克氏原螯蝦血淋巴中POX活性具有顯著影響(P<0.05)。鹽度30‰組的POX的活性隨著時(shí)間的推移呈現(xiàn)降低趨勢(shì)，且在脅迫15 min時(shí)顯著高于脅迫24 h和48 h(P<0.05)，在其它實(shí)驗(yàn)組則沒有顯著性差異(P>0.05)；在脅迫15 min時(shí)，鹽度30‰組的POX的活性顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，在其它時(shí)間點(diǎn)則沒有顯著性差異(P>0.05)。

表3 鹽度對(duì)克氏原螯蝦血淋巴中POX活性的影響Tab.3 Effects of salinity on POX activity of haemolymph in Procambarus clarkii ng·mL-1，n=3

2.3 鹽度對(duì)克氏原螯蝦血淋巴中MDA含量的影響

如表4所示，鹽度脅迫對(duì)克氏原螯蝦血淋巴中MDA含量具有顯著影響(P<0.05)，隨著鹽度的升高呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)，在鹽度30‰組15 min時(shí)MDA含量最高。在15 min和48 h時(shí)，鹽度30‰組的MDA含量顯著高于其他2個(gè)組(P<0.05)，在24 h時(shí)各實(shí)驗(yàn)組之間沒有顯著性變化(P>0.05)；在鹽度30‰組中，MDA含量在脅迫15 min時(shí)顯著高于24 h和48 h時(shí)間點(diǎn)(P<0.05)。

表4 鹽度對(duì)克氏原螯蝦血淋巴中MDA含量的影響Tab.4 Effects of salinity on MDA content of haemolymph in Procambarus clarkii nmol·mL-1，n=3

2.4 鹽度對(duì)克氏原螯蝦血淋巴中LZM活性的影響

如表5所示，在對(duì)照組中，克氏原螯蝦血淋巴中LZM的活性在15 min時(shí)顯著高于48 h(P<0.05)，在鹽度15‰和30‰條件下，LZM活性未受脅迫處理時(shí)間的顯著影響(P>0.05)；在48 h時(shí)，鹽度15‰的LZM活性顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，而鹽度15‰和30‰組之間沒有顯著性差異(P>0.05)。

表5 鹽度對(duì)克氏原螯蝦血淋巴中LZM活性的影響Tab.5 Effects of salinity on LZM activity of haemolymph in Procambarus clarkii U·mL-1，n=3

2.5 鹽度對(duì)克氏原螯蝦血淋巴中AKP和ACP活性的影響

如表6所示，鹽度組ACP活性均隨著處理時(shí)間延長呈降低趨勢(shì)(P<0.05)，鹽度30‰組在15 min時(shí)ACP活力最高。在鹽度15‰組中，隨著時(shí)間的延長ACP活性顯著降低，其中處理48 h時(shí)顯著低于15 min時(shí)(P<0.05)，而15 min和24 h之間ACP活性沒有顯著變化(P>0.05)；在鹽度30‰組中，隨著時(shí)間的延長ACP活性也呈現(xiàn)顯著降低的趨勢(shì)，在48 h時(shí)顯著低于15 min和24 h(P<0.05)，而24 h時(shí)ACP活性也顯著低于15 min(P<0.05)。在15 min時(shí)，鹽度15‰和30‰組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；在24 h時(shí)，鹽度15‰組酶活力最高，顯著高于鹽度30‰和對(duì)照組(P<0.05)，鹽度30‰組也顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。

鹽度對(duì)克氏原螯蝦血淋巴中AKP活性的影響如表7所示。鹽度15‰和30‰組AKP活性均隨著時(shí)間的延長均呈降低的趨勢(shì)(P<0.05)。隨著時(shí)間的延長，鹽度15‰組AKP活性在各時(shí)間點(diǎn)之間具有顯著差異(P<0.05)，隨著時(shí)間的推移顯著降低，在48 h時(shí)AKP活性顯著低于15 min和24 h(P<0.05)；在鹽度30‰組中AKP活性也具有顯著性差異，在15 min和24 h時(shí)顯著高于48 h(P<0.05)，而在15 min時(shí)也顯著高于24 h處理組(P<0.05)。在同一時(shí)間點(diǎn)不同鹽度之間也呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)，在15 min時(shí)各鹽度組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，而鹽度15‰和30‰組之間沒有顯著變化(P>0.05)；在24 h時(shí)出現(xiàn)了相似的顯著性變化趨勢(shì)，鹽度15‰和30‰組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。

表6 鹽度對(duì)克氏原螯蝦血淋巴中ACP活性的影響Tab.6 Effects of salinity on ACP activity of haemolymph inProcambarus clarkii 金氏單位·(100mL)-1，n=3

表7 鹽度對(duì)克氏原螯蝦血淋巴中AKP活性的影響Tab.7 Effects of salinity on AKP activity of haemolymph inProcambarus clarkii 金氏單位·(100mL)-1，n=3

3 討論

鹽度是水體中無機(jī)鹽含量的指標(biāo)，甲殼動(dòng)物對(duì)鹽度的適應(yīng)主要是通過機(jī)體滲透壓的調(diào)節(jié)，當(dāng)水體鹽度突變后機(jī)體需要進(jìn)行動(dòng)態(tài)的滲透調(diào)節(jié)，從而達(dá)到可以適應(yīng)外界環(huán)境的新的平衡狀態(tài)，若鹽度突變幅度過大或者超過了機(jī)體的調(diào)節(jié)能力將造成不可逆的滲透調(diào)節(jié)，導(dǎo)致死亡[28]。本研究中，48 h內(nèi)未見克氏原螯蝦死亡，這說明克氏原螯蝦具有較強(qiáng)的鹽度調(diào)節(jié)和適應(yīng)能力。

生物體內(nèi)部清除過多自由基的系統(tǒng)包括非酶系統(tǒng)和抗氧化酶系統(tǒng)。其中抗氧化酶系統(tǒng)主要包括超氧化物歧化酶(清除超氧陰離子)、過氧化氫酶(清理過氧化氫)、谷胱甘肽過氧化物酶及谷胱甘肽-硫-轉(zhuǎn)移酶(清除脂質(zhì)氫過氧化物)等[29]。本研究中，克氏原螯蝦處理組的血淋巴中超氧化物歧化酶(SOD)活性隨著時(shí)間的推移(0～48 h)呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢(shì)。在急性鹽度脅迫短時(shí)間內(nèi)(15 min～24 h)克氏原螯蝦血淋巴中SOD活力升高，這與陳宇鋒等[30]的研究成果相似，該研究發(fā)現(xiàn)鹽度脅迫導(dǎo)致鋸緣青蟹(Scyllaserrata)SOD活性在24 h內(nèi)顯著升高。蘇詩娟[31]研究發(fā)現(xiàn)東方對(duì)蝦(Penaeusorientalis)在高鹽度30‰時(shí)SOD活性顯著升高。這說明急性鹽度脅迫能夠激活克氏原螯蝦機(jī)體的SOD酶，從而增強(qiáng)機(jī)體抵抗鹽度脅迫的能力，然而當(dāng)脅迫時(shí)間超出一定耐受范圍后，SOD酶活性也會(huì)受到抑制，克氏原螯蝦抗氧化能力顯著下降。本研究發(fā)現(xiàn)，在低鹽條件下，隨著時(shí)間的延長，CAT活性呈先升高后降低的趨勢(shì)，分析認(rèn)為低鹽度脅迫會(huì)激活克氏原螯蝦機(jī)體的抗氧化酶系統(tǒng)，隨之增加機(jī)體對(duì)鹽度脅迫的抵抗能力，以維持機(jī)體的機(jī)能，而在高鹽條件下，機(jī)體的抗氧化酶活性受到抑制，導(dǎo)致抗氧化能力降低。李娜等[32]研究認(rèn)為鹽度30‰條件下凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)血淋巴中SOD活性會(huì)出現(xiàn)峰值，而血淋巴中CAT活性總體呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，與本研究結(jié)果類似。

酚氧化酶及其因子構(gòu)成了一個(gè)復(fù)雜的酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)，即酚氧化酶原激活系統(tǒng)(prophenoloxidase-activated system, proPO-As)，POX是酚氧化酶原激活系統(tǒng)的產(chǎn)物，在識(shí)別異物、釋放調(diào)理素促進(jìn)血細(xì)胞的吞噬和包囊以及產(chǎn)生殺滅和排除異物的凝集素和溶菌酶等免疫功能方面發(fā)揮重要的作用，因此與機(jī)體的免疫功能有直接關(guān)系[31]。一些學(xué)者認(rèn)為在外界刺激和脅迫下，機(jī)體會(huì)迅速激活血淋巴PO系統(tǒng)，酚氧化酶活力升高，并產(chǎn)生一定程度的免疫反應(yīng)[33-35]。本研究結(jié)果表明，在高鹽度30‰脅迫初期15 min時(shí)POX活性最高，隨著時(shí)間的延長呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)，這一結(jié)果驗(yàn)證了上述說法。另陳宇鋒等[30]研究發(fā)現(xiàn)鋸緣青蟹在鹽度脅迫后會(huì)顯著影響血淋巴中PO活性，并伴隨時(shí)間的延長而減低，本研究結(jié)果與之相似。

機(jī)體內(nèi)的脂質(zhì)氫過氧化物在分解時(shí)經(jīng)常會(huì)產(chǎn)生醛類，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)生較多的醛類之一就是丙二醛[36-37]。而機(jī)體MDA含量主要反映脂質(zhì)過氧化程度，從而間接的反映細(xì)胞損傷的程度。趙玉超等[38]研究認(rèn)為鹽度能顯著影響凡納濱對(duì)蝦仔蝦體內(nèi)的MDA含量，并造成機(jī)體免疫功能降低。在本研究中，隨著鹽度的升高M(jìn)DA含量也顯著升高，機(jī)體脂質(zhì)過氧化程度增加，說明外界鹽度條件會(huì)導(dǎo)致機(jī)體的細(xì)胞出現(xiàn)氧化損傷，造成機(jī)體免疫能力下降。

溶菌酶(LZM)具有溶菌活性，作為非特異性免疫生物防御因子對(duì)某些細(xì)菌發(fā)揮著先天抵抗作用，并可以誘導(dǎo)其他免疫因子的合成和分泌[39]。本研究中，在不同鹽度組和不同時(shí)間點(diǎn)上，LZM活性差異不大，說明鹽度脅迫對(duì)克氏原螯蝦血淋巴中活性影響較小，分析認(rèn)為鹽度脅迫對(duì)克氏原螯蝦體內(nèi)的LZM活性也影響較小。趙玉超等[38]發(fā)現(xiàn)高鹽度脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦血淋巴中溶菌酶活性沒有顯著影響，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與之一致。對(duì)照組中LZM活性隨時(shí)間的延長呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)，分析認(rèn)為是在實(shí)驗(yàn)開始前進(jìn)行了一天的饑餓處理導(dǎo)致克氏原螯蝦機(jī)體的LZM活性增加，之后出現(xiàn)了降低，這與蘆光宇等[40]研究結(jié)果一致，該研究認(rèn)為饑餓會(huì)影響克氏原螯蝦抗氧化系統(tǒng)，導(dǎo)致抗氧化酶活性隨著饑餓時(shí)間的延長呈現(xiàn)先升高后降低的變化趨勢(shì)。

在甲殼動(dòng)物的免疫防御體系中，酸性磷酸酶(ACP)和堿性磷酸酶(AKP)直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和代謝，可以加速機(jī)體物質(zhì)的攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)，能形成水解酶體系，破壞和消除侵入體內(nèi)的異物，對(duì)維持蝦、蟹類的生存和生長有特別重要的意義[41]。同時(shí)ACP會(huì)伴隨血細(xì)胞進(jìn)行吞噬和包囊反應(yīng)過程而被釋放[42-43]。因此通過分析AKP和ACP活性變化，有助于了解鹽度脅迫對(duì)機(jī)體營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收、物質(zhì)運(yùn)輸及生物體抗氧化系統(tǒng)的影響。劉存歧[44]分析金屬離子對(duì)中國對(duì)蝦幼體AKP的影響，認(rèn)為磷酸酶活性的高低可以作為判斷機(jī)體免疫能力的指標(biāo)。譚樹華等[45]研究高濃度Zn2+對(duì)克氏原螯蝦幾種免疫學(xué)相關(guān)指標(biāo)的影響，認(rèn)為其可通過磷酸酶活性的增加抵御惡劣環(huán)境，清除體內(nèi)產(chǎn)生的異物。在本實(shí)驗(yàn)中，隨著鹽度的升高AKP和ACP活性顯著增加，分析認(rèn)為隨著鹽度的升高，機(jī)體為進(jìn)行滲透調(diào)節(jié)維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)而大量消耗ATP，而合成ATP必需的無機(jī)磷酸需要ACP和AKP催化水解磷酸脂類物質(zhì)產(chǎn)生，進(jìn)而導(dǎo)致AKP和ACP活性增加，從而增強(qiáng)機(jī)體免疫活性，在高鹽脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦免疫相關(guān)酶的研究中也發(fā)現(xiàn)了相似的結(jié)論[32]。當(dāng)脅迫時(shí)間延長，AKP和ACP活性顯著降低，體內(nèi)這2種酶的活性受到了明顯抑制，說明隨著時(shí)間的延長，鹽度脅迫會(huì)影響機(jī)體的免疫系統(tǒng)，進(jìn)而降低機(jī)體的抗病能力，這與趙艷飛等[46]的研究結(jié)果相似，認(rèn)為環(huán)境因子會(huì)影響機(jī)體內(nèi)的AKP和ACP活性，進(jìn)一步導(dǎo)致抗病能力下降。

綜上，本研究以抗氧化酶和非特異性免疫酶活性作為評(píng)價(jià)克氏原螯蝦應(yīng)對(duì)急性鹽度脅迫的免疫指標(biāo)，證明在急性鹽度脅迫短時(shí)間內(nèi)(15 min～24 h)即能激活克氏原螯蝦的抗氧化系統(tǒng)和非特異性免疫系統(tǒng)來抵御外界環(huán)境，48 h后各項(xiàng)生理指標(biāo)可恢復(fù)至正常水平，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)環(huán)境的適應(yīng)，為開發(fā)鹽堿地養(yǎng)殖克氏原螯蝦模式的可行性提供了理論參考。