鐘佳蓮，林祚貴，阮國榮

(福建農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院，福建 福州 350119)

鹽酸沃尼妙林是國家二類新獸藥，具有抗菌活性強、抗菌譜廣的特點。其作用機制為通過與病原微生物核糖體上的50S亞基結(jié)合，抑制病原微生物蛋白質(zhì)的合成，導(dǎo)致病原微生物死亡[1-6]。該藥可用于預(yù)防和治療由肺炎支原體引起的豬支原體肺炎，也可用于治療豬痢疾，但獲批僅用于豬和兔，尚未獲批應(yīng)用于家禽[7]。有研究顯示，鹽酸沃尼妙林對雞慢性呼吸道病和雞滑液囊支原體病有很好的療效[8-11]。但目前為止，該藥對于雞的安全性影響，國內(nèi)還未見相關(guān)報道。為此，本研究旨在開展鹽酸沃尼妙林預(yù)混劑對雞的安全性評價試驗，以期為雞臨床用藥提供可靠依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗藥物

鹽酸沃尼妙林預(yù)混劑(易可能，批號：1711001)，由齊魯晟華制藥有限公司提供；抗凝劑EDTA-2K(批號：2016年6月10日)，由天津市致遠化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。

1.1.2 試驗動物

1月齡廣東黃麻雞，購自莆田某雞場，共64只，雌雄各半。

1.2 試驗動物分組與處理

選取健康活潑、雌雄各半的64只1月齡廣東黃麻雞于福建農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院動物房進行觀察1周，期間飼喂不含抗生素的全價飼料，每天給料2次。1周后經(jīng)臨床檢測，雞群健康無異?，F(xiàn)象，再進入正式試驗。

試驗雞隨機分為4組，每組16只，雌雄各半，分別為單倍(10 mg/kg)、3倍(30 mg/kg)、5倍(50 mg/kg)劑量混飼10%鹽酸沃尼妙林預(yù)混劑給藥試驗組及空白對照組，每日給藥1次，連續(xù)用藥21 d。每天觀察、記錄試驗雞群的飲水、采食、呼吸、精神狀態(tài)及排泄等健康狀況。

1.3 測定指標與方法

1.3.1 生長性能指標

分別于給藥前和給藥結(jié)束后對各組雞逐只稱重，計算平均增重和相對增重率。

1.3.2 血液生理、生化指標

所有組別雞只分別在給藥前1 d，給藥結(jié)束后第14天逐只翼下靜脈采血4 mL，用于血液生理和血清生化檢測，并備份1份血清。

血常規(guī)檢測指標包括：抗凝全血中的紅細胞計數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細胞壓積(HCT)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)、平均紅細胞體積(MCV)、白細胞計數(shù)(WBC)、血小板計數(shù)(PLT)、淋巴細胞(LYM #)、單核細胞(MON#)、粒細胞數(shù)(GRA#)、淋巴細胞百分比(LYM%)、單核細胞百分比(MON%)、粒細胞百分比(GRA%)、紅細胞分布寬度-SD值(RDWSD)、紅細胞分布寬度-CV值(RDWCV)、血小板壓積(PCT )、平均血小板體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)、 大血小板比例(P-LCR)等20項血常規(guī)指標。

血生化檢測指標包括：血清中的肌酐(CREA )、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶(GGTy)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(CHOL)、尿酸(UA)、尿素(UREA)、總膽紅素(T-BIL)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)等11項血液生化指標。

1.3.3 病理組織變化

給藥結(jié)束后7、14 d，每組隨機選取4只雞進行解剖取樣。先肉眼觀察有無病理變化，再取心、肝、脾、肺、腎等組織放入10%的中性福爾馬林中固定。樣品委托武漢賽維爾生物科技有限公司制作病理組織切片。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)用Excel 2003進行處理后，采用SPSS 17.0軟件進行方差分析。數(shù)據(jù)用“平均數(shù)±標準差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床表現(xiàn)

試驗期間，對照組和用藥組雞只均未發(fā)生肉眼可見的中毒現(xiàn)象和病死情況，雞只行動自由，精神狀態(tài)良好，采食正常，糞便成形、無血便、綠便、稀便等異常現(xiàn)象。

2.2 生長性能

鹽酸沃尼妙林預(yù)混劑連續(xù)混飼給藥21 d，對照組、1、3、5倍使用劑量組各組間平均增重差異不顯著(P>0.05)。詳見表1。

表1 生長性能相關(guān)指標測定

評價指標 對照組 1倍使用劑量組 3倍使用劑量組 5倍使用劑量組平均初重/kg 0.60±0.020.61±0.030.59±0.020.61±0.02平均末重/kg 1.20±0.031.22±0.031.19±0.031.21±0.02平均增重/kg 0.60±0.030.61±0.040.59±0.030.60±0.03相對增重率/%99.77±7.4199.47±9.60100.09±6.3398.99±7.37死亡只數(shù)0000

2.3 血液生理指標

鹽酸沃尼妙林預(yù)混劑經(jīng)21 d連續(xù)混飼給藥后14 d檢測，對照組、1、3、5倍使用劑量組各組間血液生理指標差異不顯著(P>0.05)，詳見表2。

2.4 血液生化指標

鹽酸沃尼妙林預(yù)混劑經(jīng)21 d連續(xù)混飼給藥后14 d檢測，對照組、1、3、5倍使用劑量組各組間血液生化指標差異不顯著(P>0.05)，詳見表3。

2.5 組織病理

2.5.1 病理剖檢變化

鹽酸沃尼妙林預(yù)混劑停藥7、14 d后，對照組及各使用劑量組雞只心、肝、脾、肺、腎組織、皮膚組織等均未見肉眼可見的病理變化。

表2 鹽酸沃尼妙林預(yù)混劑給藥結(jié)束后14 d血液學(xué)指標結(jié)果

指標對照組1倍使用劑量組3倍使用劑量組5倍使用劑量組WBC/(×109·L-1)99.90±1.9099.90±4.5099.90±3.6099.90±5.20LYM#/(×109·L-1)68.80±3.7069.16±1.7770.20±1.2668.46±1.65MON#/(×109·L-1)8.07±1.898.62±1.088.29±0.838.00±0.77GRA#/(×109·L-1)22.37±1.3622.12±1.4422.19±1.1822.2±1.67LYM%/%68.87±3.7069.19±1.7969.62±1.2868.72±1.53MON%/%8.35±1.688.59±1.018.30±0.838.36±1.45GRA%/%22.55±1.3722.17±1.4622.09±1.2222.67±1.54HGB/(g·L-1)119.97±6.72120.94±9.20119.39±6.60119.88±7.50MCH/Pg49.83±1.7050.24±2.2049.43±3.6649.30±1.94MCHC/(g·L-1)465.5±15.58474.71±11.12460.11±17.22460.56±14.87RBC/(×1012·L-1)2.41±0.442.42±0.172.32±0.222.46±0.22MCV/fL108.37±2.86107.41±3.36106.86±2.68108.21±3.78HCT/%25.98±4.3325.66±1.9825.26±1.9025.44±2.00RDWSD/fL68.50±6.3567.43±4.6968.67±6.3268.89±5.13RDWCV/%15.82±1.2815.70±1.0615.70±0.9115.26±0.80PLT/(×109·L-1)166.67±7.06166.29±6.16166.00±7.79166.22±5.74PCT/%0.11±0.010.10±0.030.10±0.020.10±0.03MPV/fL7.35±0.457.09±0.157.95±0.377.10±0.30PDW/fL5.72±0.725.27±0.295.89±0.225.73±0.76P-LCR/%1.78±0.851.74±0.371.76±0.341.78±0.43

表3 鹽酸沃尼妙林預(yù)混劑給藥結(jié)束后14 d血液生化指標結(jié)果

指標 對照組1倍使用劑量組 3倍使用劑量組5倍使用劑量組TP/(g·L-1)39.67±1.6339.57±1.7239.67±1.8039.22±1.99ALB/(g·L-1)14.00±2.9014.00±2.2414.00±1.4114.22±2.71CREA/(μmol·L-1)178.67±16.00177.86±16.14179.56±17.66176.33±16.52GGTy/(Μ·L-1)22.50±2.7422.86±1.5722.33±2.0022.78±1.86T-BIL/(μmol·L-1)61.62±18.3162.90±20.6764.08±22.8862.74±22.58UREA/(mmol·L-1)1.67±0.821.57±0.791.56±0.731.67±0.71UA/(μmol·L-1)238.00±47.98239.86±42.83246.22±22.29241.89±47.62ALT/(U·L-1)18.67±7.2318.71±6.8517.56±6.9719.44±5.53AST/(U·L-1)180.00±51.47185.57±37.23187.78±39.19188.89±56.62TG/(mmol·L-1)0.48±0.080.44±0.100.43±0.100.50±0.07CHOL/(mmol·L-1)4.15±0.574.11±0.533.88±0.413.96±0.78

2.5.2 組織學(xué)檢查

鹽酸沃尼妙林預(yù)混劑停藥7、14 d后，對照組及各劑量組雞只心、肝、脾、肺、腎組織切片在光學(xué)顯微鏡下觀察，均未見明顯病變。其中停藥14 d后的5倍劑量組各組織切片見圖1。

A. 心；B. 肝；C. 脾；D. 肺；E. 腎

圖1 5倍使用劑量組雞不同組織顯微鏡檢查(200×)

3 討論

鹽酸沃尼妙林為二萜類抗生素，抗菌活性強，抗菌譜廣，在臨床上主要用于預(yù)防和治療豬由肺炎支原體引起的支原體肺炎，治療豬痢疾，效果良好。同時，近年來雞毒支原體引起的雞慢性呼吸道疾病不斷增加，由于臨床常用藥物使用頻繁導(dǎo)致逐漸出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，而鹽酸沃尼妙林可溶性粉對雞慢性呼吸道病有很好的療效。

由于該藥還未正式批準用于雞，因此沒有規(guī)定推薦劑量。我們通過查閱相關(guān)文獻[8,12-13]，發(fā)現(xiàn)該藥對雞的研究通常為按體重10 mg/kg左右，每天1次給藥。因此，本試驗的單倍劑量設(shè)置為10 mg/kg，每天給藥1次。經(jīng)過臨床試驗，結(jié)果表明鹽酸沃尼妙林對雞無不良作用，安全性較好。但對于雛雞還需進一步試驗進行探討。同時，建議改進該藥的制作工藝并降低成本從而降低該藥的價格，以便在臨床上推廣該藥的使用。

綜上，本研究進行了鹽酸沃尼妙林對雞的安全性試驗評價，設(shè)置單倍、3倍、5倍使用劑量組和空白對照組，連續(xù)使用21 d，觀察雞臨床表現(xiàn)，測定其增長情況、血液生理生化指標、病理組織變化等。結(jié)果顯示，按照單倍、3倍、5倍使用劑量連續(xù)使用21 d，試驗組與空白對照組相比，其臨床表現(xiàn)、生長性能、血液生理生化指標和病理組織切片等均未見明顯差異，這說明其對雞無不良作用，安全性較好。