楊 潤，王 亮，謝 宇，羅 君，薛鑫宇，張麗艷*

(1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550025；2.貴州廣濟(jì)堂藥業(yè)有限公司，貴州 貴陽 550014；3.貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，貴州 貴陽 550001)

骨碎補為水龍骨科植物槲蕨Drynariafortunei(Kunze)J.Sm.的干燥根莖，味苦性溫，歸肝、腎經(jīng)，具有內(nèi)服療傷止痛、補腎強骨，外用消風(fēng)祛斑的功效[1]，化學(xué)成分為黃酮類、苯丙素類、木脂素、三萜類等，其主要活性成分為黃酮類中柚皮苷[2-4]。由于骨碎補生品藥材表面密被鱗片和絨毛，這不利于煎煮或粉碎以及有效成分溶出，目前臨床上常采用砂燙法炮制骨碎補后入藥。對于骨碎補砂燙炮制后的含量有無影響，近年來，大量研究學(xué)者對骨碎補藥材炮制前后進(jìn)行了有效成分溶出以及含量對比研究，證實了骨碎補炮制后可提高其總黃酮中柚皮苷的含量[5-9]。由于骨碎補在存放過程中會產(chǎn)生一定的雜質(zhì)，這可能會影響其有效成分的溶出和含量的變化。為進(jìn)一步探究骨碎補生品與炮制品中雜質(zhì)對有效成分溶出和含量的影響，本研究通過測量不同產(chǎn)地骨碎補未去毛生品、去毛生品、未去毛炮制品、去毛炮制品的水分、總灰分、醇溶性浸出物、柚皮苷的含量，并對其進(jìn)行對比分析研究，從而保證骨碎補質(zhì)量的提升，為臨床選擇性用藥提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

蒸發(fā)皿、具塞錐形瓶、坩堝、干燥器、SX-4-10型箱式電阻爐控制箱(天津市泰斯特儀器有限公司)；ABZ04-S型電子天平(上海梅特勒有限公司)；DK-98-I型數(shù)顯恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海賀德實驗設(shè)備有限公司)；粉碎機(武義海納電器有限公司)；電熱爐(方科儀器有限公司)等。

1.2 試藥

柚皮苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，含量：93.4%，批號：110722-200309)；骨碎補藥材自采于貴州省惠水縣、長順縣、平壩縣、納雍縣、三都縣、荔波縣、獨山縣、凱里市、望謨縣、冊亨縣，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)魏升華教授鑒定，骨碎補為水龍骨科植物槲蕨Drynariafortunei(Kunze)J.Sm.的干燥根莖。

2 方法與結(jié)果

2.1 水分及總灰分測定

取各產(chǎn)地骨碎補生品及炮制品，對其進(jìn)行去除磷毛、絨毛處理，并將其分為去毛、未去毛生品和去毛、未去毛炮制品各四組，各組取粉末2.0 g(過二號篩)，精密稱定，按2015版《中國藥典》四部通則0832水分測定法項下烘干法和通則2302進(jìn)行測定。每個產(chǎn)地平行測定2份，結(jié)果見表1、表2、表3、表4。對比分析結(jié)果見圖1、圖2。

表1 不同產(chǎn)地未去毛生品水分、總灰分和醇溶性浸出物測定 (n=2，%)

表2 不同產(chǎn)地去毛生品水分、總灰分和醇溶性浸出物測定 (n=2，%)

表3 不同產(chǎn)地未去毛炮制品水分、總灰分和醇溶性浸出物測定 (n=2，%)

表4 不同產(chǎn)地去毛炮制品水分、總灰分和醇溶性浸出物測定 (n=2，%)

圖1 各組水分測量結(jié)果對比分析

圖2 各組總灰分測量結(jié)果對比分析

2.2 浸出物測定

按照“2.1”項下進(jìn)行處理分組，各組取骨碎補粉末2.0 g(過二號篩)，精密稱定，按2015版《中國藥典》四部通則2201醇溶性浸出物測定法中熱浸法(稀乙醇作為溶劑)進(jìn)行測定。每組平行測定2份，結(jié)果見表1、表2、表3、表4。對比分析見圖3。

圖3 各組醇溶性浸出物測量結(jié)果對比分析

2.3 柚皮苷含量測定

按照“2.1”項下進(jìn)行分組處理骨碎補，參照2015年版《中國藥典》一部項下“骨碎補”中柚皮苷的含量測定方法，采用高效液相色譜法測定藥材中柚皮苷含量。

2.3.1 色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-醋酸-水(35∶4 ∶65)為流動相，檢測波長為283 nm，進(jìn)樣量為10 μL，柱溫為30 ℃，流速為1.0 mL·min-1。理論板數(shù)按柚皮苷峰計算應(yīng)不低于3 000?？瞻兹軇φ掌泛凸┰嚻啡芤旱腍PLC色譜見圖4(選取貴州貴陽產(chǎn)地)，測量結(jié)果見表5，對比分析見圖5。

圖4 空白溶劑(A)、對照品溶液(B)及未去毛生品供試品溶液(C)、去毛生品供試品溶液(D)、未去毛炮制品供試品溶液(E)、去毛炮制品供試品溶液(F)HPLC(1為柚皮苷)

2.3.2 對照品溶液制備 取柚皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含柚皮苷60 μg的溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液制備 每組精密稱取各產(chǎn)地藥材粉末0.25 g，置于錐形瓶中，加甲醇30 mL，加熱回流3 h，放冷，濾過，濾液置50 mL量瓶中，用少量甲醇分次洗滌容器，洗液濾入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

表5 各組橙皮苷測量結(jié)果 (%)

圖5 各組柚皮苷含量測量結(jié)果對比分析

3 討論

不同加工方法處理后，骨碎補的水分、總灰分、醇溶性浸出物、柚皮苷的測定結(jié)果均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定[1]。

由于骨碎補生品上密被的鱗片和附著的絨毛吸水性較強，未去毛生品水分均高于去毛生品；與此同時骨碎補砂燙撞去毛后，飲片處于膨脹狀態(tài)，外層無保護(hù)作用，比較容易吸潮，這才使得未去毛炮制品的水分均低于去毛炮制品。此外，未去毛樣品的總灰分含量均高于去毛樣品，這可能是由于骨碎補表面密被的鱗片和絨毛易吸附沙粒、泥土等雜質(zhì)所導(dǎo)致的。

在醇溶性浸出物測量時，對乙醇的濃度進(jìn)行了考察?？疾炝?5%、80%、70%和60%乙醇作為提取溶劑來測浸出物的含量，結(jié)果以70%乙醇作為提取溶劑時，醇溶性浸出物的含量最高，因此選70%乙醇作為提取溶劑。此外四組藥材醇溶性浸出物測量結(jié)果顯示，各組去毛藥材均高于未去毛藥材。

在供試品溶液制備中考察了甲醇的濃度，考察了70%、60%甲醇和稀甲醇進(jìn)行回流提取，以出峰量為指標(biāo)，結(jié)果以70%甲醇提取時，出峰量最多，故選70%甲醇為提取溶劑。同時四組藥材的柚皮苷含量測定結(jié)果表明，各組未去毛藥材均低于去毛藥材。

綜上所述，可確定骨碎補表面密被的鱗片和絨毛易吸附雜質(zhì)。在臨床用藥時，應(yīng)選擇砂燙撞去毛的骨碎補入藥。