陳 璐，耿柏林，郭祿晶，蘇星超，強力源,鄭立穎，李 欠*

（1.甘肅農業(yè)大學農學院/甘肅省中藥材規(guī)范化生產技術創(chuàng)新重點實驗室，甘肅蘭州730070；2.甘肅農業(yè)大學水利水電工程學院，甘肅蘭州730070；3.甘肅農業(yè)大學植物保護學院，甘肅蘭州730070；4.甘肅農業(yè)大學管理學院，甘肅蘭州730070）

槐米為豆科植物槐（Sophora japonicaL.）的干燥花蕾。其性苦，微寒，具有涼血止血、清肝瀉火的功效，同時血痢、崩漏、痔瘡出血、吐血及頭暈等癥狀均可用槐米入藥進行醫(yī)治[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明：槐米具有保護心腦血管、改善糖尿病、抗菌、抗氧化和抑制黑色素生成等作用[2，3]。2015 年版中國藥典以高效液相色譜法測定蘆丁的含量及其他常規(guī)鑒別項目作為其質量控制的指標[1]，蘆丁具有抗炎、抗過敏、抗心肌缺氧及缺血、抗心律失常、降低血清膽固醇、抑制血小板集聚、抗?jié)?、抗腫瘤、解痙、鎮(zhèn)咳、抗病毒和增強免疫力等功能，是預防和治療糖尿病、心絞痛、慢性心功能不全、高血脂和預防動脈硬化心肌梗死、腦血栓等疾病的天然綠色藥物[4]。醫(yī)藥工業(yè)中也常以槐米為主要原料提取蘆丁[5-9]。除藥用價值以外，槐米也是一種常用的工業(yè)染料，其有效成分有很強的吸收紫外光能力，現(xiàn)在經常被添加到化妝品中用作防曬護膚品；如果與一些特殊中藥或者酶制劑添加在一起使用，還可以用作保健品和食品，同時開發(fā)出了槐米花茶，預計在國際上會有廣闊的市場前景[10-14]，具有很高的開發(fā)價值[15，16]。近代研究表明：槐米中蘆丁含量可高達23.5%，槐米價格相對便宜，產量可觀，因此對槐米中有效成分的提取及含量的測定具有很高應用價值。

本實驗通過采用堿溶酸沉法和超聲波輔助堿溶酸沉法，提取不同產地槐米中的蘆丁，采用紫外分光光度法測定其含量，為槐米藥材質量控制與評價提供理論科學依據。

1 材料

1.1 儀器及用具

HH-S 數顯恒溫水浴鍋、紫外可見分光光度計（T6 新世紀）、循環(huán)水式多用真空泵（SHB-Ⅲ）、電子萬用爐、電磁爐、超聲波清洗儀（PS-30A）、電熱恒溫鼓風干燥箱（GZX-GF101-4BS-Ⅱ）、電子天平、抽濾瓶、布氏漏斗、濾紙、玻璃棒、燒杯、量筒、容量瓶、錐形瓶、鐵架臺、漏斗、脫脂棉、溫度計、洗耳球、研缽。

1.2 試劑及材料

10%氫氧化鈉溶液、飽和石灰水、0.4%硼砂水溶液、5%硝酸鈉溶液、10%硝酸鋁溶液、蒸餾水、濃鹽酸、95%蘆丁水合物（薩恩化學技術（上海）有限公司）。

1.3 藥材

山西槐米、河北槐米、河南槐米、甘肅槐米分別購自全炬藥材行、亳州市京皖藥材廠、文擇軒中藥材、黃河藥材市場。

2 實驗方案

2.1 堿溶酸沉法

準確稱取槐米20 g，置于研缽中研碎，加入0.4%硼砂溶液120 ml，飽和石灰水80 ml，調節(jié)pH 8～9,置于電熱爐上保持微沸狀態(tài)30 min，過濾，重復2 次，合并濾液，并濃縮至一定體積。將濃縮液置于70℃水浴中，加入濃鹽酸調pH 為2～3，放置3～5 d，待提取液底部產生黃色或棕黃色沉淀，抽濾，得蘆丁粗品。

2.2 超聲波輔助堿溶酸沉法

準確稱取槐米20 g，置于研缽中研碎，加入0.4%硼砂溶液120 ml，飽和石灰80 ml，調節(jié)pH 8～9，超聲30 min，過濾，重復2 次，合并濾液，并濃縮至一定體積。將濃縮液置于70℃水浴中，加入濃鹽酸調pH 為2～3，放置3～5 d，待提取液底部產生黃色或棕黃色沉淀，抽濾，得蘆丁粗品。

3 結果與分析

3.1 提取工藝結果

傳統(tǒng)堿溶酸沉法和超聲波輔助堿溶酸沉法提取工藝結果如表1 所示。

3.2 繪制標準曲線

根據2015 版《中國藥典》，繪制蘆丁濃度-吸光度標準曲線。由于甲醇毒性大，本實驗用乙醇替代甲醇。

精密稱取蘆丁標準品200 mg，置于100 ml 容量瓶中，加乙醇定容至刻度，搖勻。精密吸取10 ml 至100 ml 容量瓶中加水至刻度，搖勻備用。

精密量取對照品溶液1 ml、2 ml、3 ml、4 ml、5 ml、6 ml，分別置25 ml 容量瓶中，各加水至6 ml、5%亞硝酸鈉溶液1 ml，混勻放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 ml，搖勻，放置6 min，加氫氧化鈉溶液10 ml，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，以相應的試劑為空白，按照紫外分光光度法（通則0401），在500 nm 波長處測吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線（見圖1）。

表1 傳統(tǒng)堿溶酸沉法和超聲波輔助堿溶酸沉法提取工藝結果

3.3 測定提取率

取干燥蘆丁粗品約0.25 g，精密稱定，加無水乙醇定容至25 ml 容量瓶，搖勻備用。精密量取3 ml 置25 ml 容量瓶中，按照標準曲線制備項下的方法，制備供試品，在500 nm 的波長處比色測定吸光度，標準曲線法測定供試品溶液中蘆丁的濃度，通過計算得槐米中蘆丁的提取率，結果見表2。

表2 傳統(tǒng)堿溶酸沉法和超聲波輔助堿溶酸沉法提取率

4 結果與討論

堿溶酸沉法提取槐米中蘆丁的含量由高到低依次是甘肅、山西、河南、河北，超聲波輔助堿溶酸沉法提取槐米中蘆丁的含量由高到低依次是山西、甘肅、河北、河南。同時，甘肅槐米的提取率最高，山西槐米次之，河南、河北槐米相差不大?？傮w而言，超聲波輔助提取槐米中的蘆丁更加高效。

在提取槐米中蘆丁的過程中，使用傳統(tǒng)的堿溶酸沉法第一遍提取的時候試液蒸發(fā)過多，濾液較少或幾乎沒有，第二遍提取液較第一遍多，而超聲波輔助提取的過程中，試液幾乎不蒸發(fā)，提取液比傳統(tǒng)堿溶酸沉法幾乎多1 倍，除了甘肅產地外，其他3 個產地的超聲波輔助提取法的蘆丁粗品重和蘆丁提取率都高于傳統(tǒng)的堿溶酸沉法，可以間接說明使用超聲波輔助提取槐米中的蘆丁更加高效，而甘肅產地的提取率傳統(tǒng)法高于超聲波輔助提取法，可能是由于外界的因素或者其他因素導致。

本次實驗項目不同產地的槐米中蘆丁的含量差別較大，可能是由于不同產地的槐米品質差異或采收時間不同導致，采收時間對槐米中蘆丁的含量有很大影響。