溫福麗，王松濤，2，何 誠(chéng)，，彭遠(yuǎn)松，宋 川

（1.國(guó)家固態(tài)釀造工程技術(shù)研究中心，四川瀘州 646000；2.瀘州品創(chuàng)科技有限公司，四川瀘州 646000；3.瀘州老窖股份有限公司，四川瀘州 646000）

環(huán)糊精（cyclodextrins,CDs）是由α-1,4-糖苷鍵連接多個(gè)D（+）-葡萄糖單元形成的中空的環(huán)麥芽七糖環(huán)狀化合物，是從淀粉中水解得到的一類(lèi)寡糖，也是一類(lèi)資源豐富的天然低聚物。外側(cè)的C2、C3形成的仲羥基及C6構(gòu)成的伯羥基使得環(huán)糊精具有一定的親水性，內(nèi)部的空腔則由于C-H 鍵的屏蔽作用而具有疏水性。環(huán)糊精在超分子化學(xué)中較為廣知的是最有效的主體[1-2]；包合物的形成受客體的理化性質(zhì)影響較大；比如分子大小、空間結(jié)構(gòu)、電荷狀態(tài)以及分子極性等因素[3]。在食品應(yīng)用中，環(huán)糊精包合一些熱不穩(wěn)定、難溶物質(zhì)的應(yīng)用較多[4-6]，β-環(huán)糊精由于其廉價(jià)、具有適中的空腔尺寸且價(jià)格低廉應(yīng)用最為廣泛。

紅曲酒作為我國(guó)華中、華東等地區(qū)流行的一種傳統(tǒng)名酒，含有較為豐富的洛伐他?。▓D1），具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。紅曲菌在發(fā)酵過(guò)程中能代謝產(chǎn)生γ-氨基丁酸、洛伐他汀、麥角固醇等多種有益物質(zhì)[7]，功能性紅曲主要成分洛伐他?。↙ovastatin，也稱(chēng)莫那克林K,Monacolin K,MK）是紅曲霉生成的次級(jí)代謝產(chǎn)物之一。洛伐他汀作為一種真菌代謝的天然他汀，在臨床上可作為Hmg-CoA 還原酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，能有效阻斷人體中的內(nèi)源性膽固醇的合成，本身也能夠促進(jìn)膽固醇的分解，具有較好的降脂功效，且無(wú)不良反應(yīng)等作用[8-13]；課題組前期研究表明，洛伐他汀在紅曲酒中能帶來(lái)一定的苦澀味，我們期望借助環(huán)糊精的微膠囊作用將洛伐他汀的苦澀味掩蓋，改善其食用可接受性。

本實(shí)驗(yàn)采用共沉淀法制備了β-CD-MK 包合物，借助熒光增強(qiáng)法和高效液相法進(jìn)行了表征驗(yàn)證。熒光光譜法研究了β-CD 與MK 的主客體包合比、包合常數(shù)及熱力學(xué)常數(shù)并對(duì)包埋工藝進(jìn)行了初步考察；對(duì)比高效液相法和熒光增強(qiáng)法的方法學(xué)考察，得知兩種方法都能較好的測(cè)定洛伐他汀的含量（RSD≤5 %），而熒光光譜法可更靈敏表征β-CDMK 包合物的包合性能，為后期更好地開(kāi)發(fā)口感良好、穩(wěn)定性更佳的紅曲酒提供思路。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

耗材及試劑：洛伐他汀（Monacolin K）標(biāo)品（99.1%上海安譜試劑，CDAA-280812-20 mg）；β-環(huán)糊精（Sigma-Aldrich，St.Louis,MI,USA）；鹽酸（36.5 %,AR 級(jí)，成都科龍化工試劑廠(chǎng)）；Na2HPO4（AR 級(jí)，成都科龍化工試劑廠(chǎng)）；甲醇/乙醇（色譜級(jí)，德國(guó)Meker 公司）；乙酸（色譜級(jí)，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；二次蒸餾水。

儀器設(shè)備：日立HITACHI F-7000；島津2010高效液相；紫外SP-756P；METTLER TOLEDO電子天平；DF-101Z集熱式恒溫加熱磁力攪拌器。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試劑制備

洛伐他汀標(biāo)液：準(zhǔn)確稱(chēng)取20.00 mg 試樣于25.00 mL 容量瓶中，乙醇（75 %vol）溶解后定容配制成0.80 mg/mL的MK溶液。

β-環(huán)糊精溶液：稱(chēng)取干燥的β-環(huán)糊精1.1350 g用水溶解后定容至100 mL 容量瓶中，配制成10.00 mmol/L β-環(huán)糊精溶液。

緩沖溶液：pH7.0的緩沖液：24.40 mL的0.10 mol/L HCl和75.60 mL的0.10 mol/L Na2HPO4[14]。

1.2.2 β-CD-MK包合物的制備[15]

取新鮮配制的MK 20 mg 用少量75%vol 乙醇溶解后和環(huán)糊精以物質(zhì)的量1∶5 配制：將洛伐他汀溶液緩慢加入到環(huán)糊精溶液中，磁力攪拌48 h，放入冰箱24 h 后，用0.45 μm 的濾膜過(guò)濾（在文獻(xiàn)[15]的基礎(chǔ)上改進(jìn)），取濾餅常溫干燥后得白色固體包合物及未被包合的液體部分，包合物于4 ℃干燥器中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 高效液相表征方法及洛伐他汀標(biāo)曲獲取

新鮮配制MK 用75 %vol 乙醇定容至25 mL，分別取20 μL、60 μL、100 μL、140 μL、180 μL MK標(biāo)液，甲醇定容至5 mL,0.45 nm膜過(guò)濾，進(jìn)樣10 μL；檢測(cè)器：UV（最佳吸收波長(zhǎng)238 nm）；高效液相條件（參照QB/T 2847—2007）：HPLC 條件：v=0.65 mL/min，T=45 ℃，流動(dòng)相：甲醇∶水∶乙酸=385∶115∶0.14；繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，數(shù)據(jù)擬合獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性回歸。取1.2.2 未被包合的上清液測(cè)定β-CD-MK 包合物體系的含量，計(jì)算包合率。

1.2.4 熒光光譜法獲取λEX/λEM

在10 mL容量瓶中，依次加入MK標(biāo)準(zhǔn)溶液40 μL，環(huán)糊精標(biāo)準(zhǔn)液2.00 mL，2.00 mL 緩沖液，用水定容至刻度，25 ℃恒溫加熱磁力攪拌器攪拌15 min 后，在激發(fā)波長(zhǎng)200～400 nm，發(fā)射波長(zhǎng)250～500 nm范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，掃描速度1200 nm/min，EM sampling：1 nm，EX sampling：5 nm，response：0.5 s，EX/EM=5.0 nm，PMT voltage：700 V，獲取包合物的最大發(fā)射波長(zhǎng)λEM=333 nm 和激發(fā)波長(zhǎng)λEX=225 nm。

1.2.5 熒光光譜法表征

設(shè)定EX=225 nm，在發(fā)射波長(zhǎng)250～500 nm 范圍分別測(cè)定β-CD、MK、以及包合體系的熒光發(fā)射譜，比較分析光譜特征，獲得包合體系的熒光表征圖。

1.2.6 熒光光譜法制備β-CD-MK體系標(biāo)曲

新鮮配制MK 用75 %vol 乙醇定容至25 mL，分別取20 μL、40 μL、60 μL、80 μL、100 μL MK標(biāo)準(zhǔn)容液，加入2.00 mL β-CD環(huán)糊精標(biāo)準(zhǔn)容液、2.00 mL緩沖液，用水定容至10 mL，25 ℃恒溫加熱磁力攪拌器攪拌15 min 后，設(shè)定EX=225 nm，在發(fā)射波長(zhǎng)250～500 nm 范圍分別測(cè)定F 值。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，數(shù)據(jù)擬合獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性回歸。取1.2.2 未被包合的上清液測(cè)定β-CD-MK 包合物體系的含量，計(jì)算包合率。

1.2.7 熒光光譜法考察緩沖液體積對(duì)β-CD-MK體系的影響

在10 mL 容量瓶中，依次加入MK 標(biāo)準(zhǔn)溶液40 μL，環(huán)糊精標(biāo)準(zhǔn)液2.00 mL，加入緩沖液體積：0.00 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL、3.00 mL，用水定容至刻度，25 ℃恒溫加熱磁力攪拌器攪拌15 min 后，設(shè)定EX=225 nm，在發(fā)射波長(zhǎng)250～500 nm范圍分別測(cè)定F值。

1.2.8 熒光光譜法考察溫度對(duì)β-CD-MK 體系的影響

在10 mL 容量瓶中，依次加入MK 標(biāo)準(zhǔn)溶液40 μL，環(huán)糊精標(biāo)準(zhǔn)液2.00 mL，加入緩沖液體積2.00 mL，用水定容至刻度，在溫度為5 ℃、25 ℃、45 ℃、65 ℃、85 ℃下恒溫加熱磁力攪拌器攪拌15 min后，設(shè)定EX=225 nm，在發(fā)射波長(zhǎng)250～500 nm 范圍分別測(cè)定F值。

1.2.9 熒光光譜法考察時(shí)間對(duì)β-CD-MK 體系的影響

在10 mL 容量瓶中，依次加入MK 標(biāo)準(zhǔn)溶液40 μL，環(huán)糊精標(biāo)準(zhǔn)液2.00 mL，加入緩沖液體積2.00 mL，用水定容至刻度，在溫度25 ℃下恒溫加熱磁力攪拌器攪拌0 min、5 min、10 min、15 min、20 min、25 min、30 min 后，設(shè)定EX=225 nm，在發(fā)射波長(zhǎng)250～500 nm范圍分別測(cè)定F值。

1.3 包合反應(yīng)比及熱力學(xué)常數(shù)的測(cè)定

在10 mL 容量瓶中，依次加入MK 標(biāo)準(zhǔn)溶液40 μL，環(huán)糊精標(biāo)準(zhǔn)液：0.00 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL、3.00 mL 緩沖液，用水定容至刻度，25 ℃/45 ℃/65 ℃恒溫加熱磁力攪拌器攪拌15 min 后，設(shè)定EX=225 nm，在發(fā)射波長(zhǎng)250～500 nm 范圍分別測(cè)定F 值；按照Benesi-Hilderbrand 方程計(jì)算包合比及熱力學(xué)常數(shù)。

1.4 包合率計(jì)算

分別用高效液相法和熒光光譜法所得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)測(cè)定包合液上清液中洛伐他汀的含量，計(jì)算包合率。

式中：m1為包合液上清液MK 含量；m為客體MK的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 高效液相法和熒光光譜法分析

分別將β-CD、MK 標(biāo)液以及包合物體系在波長(zhǎng)250～500 nm 進(jìn)樣，根據(jù)高效液相檢測(cè)器窗口可知：MK 及其飽和體系的最大吸收波長(zhǎng)λ=238 nm 且在此波長(zhǎng)范圍內(nèi)β-CD 幾乎無(wú)紫外吸收，故選λ=238 nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)，這也與QB/T 2847—2007 建議匹配。結(jié)果表明，MK 溶液在pH7 時(shí)λ=238 nm 處有最大吸收峰，當(dāng)加入β-CD 溶液時(shí)，最大吸收峰位置不變，同時(shí)包合物體溶液的紫外吸收峰明顯高于β-CD 和MK 溶液本身，表明發(fā)生了明顯的包合作用[16]。

設(shè)定EX=225 nm，在發(fā)射波長(zhǎng)250～500 nm 范圍分別測(cè)定β-CD、MK、以及包合體系的熒光發(fā)射譜，結(jié)果見(jiàn)圖2。結(jié)果表明，當(dāng)β-CD 加入MK 溶液后，最大發(fā)射波長(zhǎng)并沒(méi)有改變，但熒光強(qiáng)度值明顯增強(qiáng)。分析原因可能是因?yàn)镸K 分子以非共價(jià)鍵范德華力和氫鍵結(jié)合β-CD 的疏水空腔，在空腔中，MK分子的運(yùn)動(dòng)自由度降低，屏蔽了MK溶液的熒光信號(hào)。因此熒光強(qiáng)度的增加可以證明包合物的形成[16]。

2.2 方法學(xué)考察

取1.2.2 包合物的上清液分別用高效液相法和熒光光譜增強(qiáng)法考察包合率，并進(jìn)行方法學(xué)考察。

2.2.1 線(xiàn)性考察及靈敏度

以3 倍信噪比為檢出限，10 倍信噪比為定量限進(jìn)行儀器檢測(cè)，高效液相法所獲取MK 標(biāo)曲：S=46156.24C+34274.43（R2=0.9990，定量限0.45μg/mL，檢測(cè)限1.45 μg/mL）；在MK 濃度范圍3.20～28.80 μg/mL 內(nèi)線(xiàn)性范圍較好；熒光光譜增強(qiáng)法所獲取MK 標(biāo)曲：F=39020.58C+399.83（R2=0.9962，定量限0.24 μg/mL，檢測(cè)限0.98 μg/mL），在MK 濃度范圍1.62～8.10 μg/mL內(nèi)線(xiàn)性范圍良好，見(jiàn)表1。

2.2.2 精密度試驗(yàn)

高效液相法：準(zhǔn)確量取包合物上清液400 μL，用甲醇定容至5 mL，0.45 nm 膜過(guò)濾，進(jìn)樣10 μL，重復(fù)進(jìn)樣3 次，根據(jù)高效液相標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程求得包合率平均值為60.50 %，RSD 為1.72 %。熒光光譜法考察精密度：準(zhǔn)確量取包合物上清液200 μL，加入2.00 mL β-環(huán)糊精，2.00 mL 緩沖液加水定容至10 mL，在25 ℃下反應(yīng)15 min 后測(cè)量熒光值F，重復(fù)測(cè)量6 次，根據(jù)熒光光譜法標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程求得包合率平均值為46.73 %，RSD 為4.28 %。詳細(xì)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

2.2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)和重復(fù)性試驗(yàn)

按照2.2.2 方法，取同一份樣品，分別于0、2 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h 時(shí)分別測(cè)量獲得相應(yīng)的峰面積值和熒光值，每組測(cè)6 次并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果顯示，高效液相法計(jì)算所得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.69 %，熒光光譜法計(jì)算所得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差4.58%。

表1 線(xiàn)性方程及靈敏度

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

表3 加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果

取同一批樣品6 份，按照2.2.1 方法，測(cè)量獲得相應(yīng)的峰面積值和熒光值并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果顯示，高效液相法計(jì)算所得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.73 %，熒光光譜法計(jì)算所得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差4.83%。

2.2.4 回收率試驗(yàn)

按照2.2.2 方法考察洛伐他汀的加標(biāo)回收率與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，樣品加入量為上清液含量的80%、100%、120%加入考察，詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表3。

方法學(xué)考察說(shuō)明：根據(jù)《中國(guó)藥典》2015 版總則中對(duì)物質(zhì)含量測(cè)定和QB/T 2847—2007 中對(duì)功能性紅曲米（粉）的含量測(cè)定要求，高效液相法的RSD 均小于2 %，說(shuō)明方法的精密性、重復(fù)性均良好，樣品在24 h 內(nèi)保持穩(wěn)定；針對(duì)熒光光譜法暫時(shí)沒(méi)有相應(yīng)法規(guī)要求，但是該實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合QB/T 2847—2007 中RSD≤±5%的要求，可見(jiàn)兩種方法的結(jié)果都準(zhǔn)確可靠，適用于研究結(jié)果的確定及對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量分析、評(píng)價(jià)。

2.3 熒光光譜法參數(shù)優(yōu)化

2.3.1 緩沖液體積的優(yōu)化

通過(guò)對(duì)包合體系緩沖液體積加入量的考察，在25 ℃恒溫加熱磁力攪拌器攪拌15 min，設(shè)定EX=225 nm，在發(fā)射波長(zhǎng)250～500 nm 范圍分別測(cè)定F值。由此得知，隨著緩沖液的加入，當(dāng)加入量為2.00 mL 之后，熒光強(qiáng)度值變化不大，因此我們選擇加入緩沖液體積2.00 mL 作為實(shí)驗(yàn)測(cè)定值，參見(jiàn)圖3。

2.3.2 溫度對(duì)包合物的影響

通過(guò)對(duì)包合體系反應(yīng)溫度的考察，在5～85 ℃的范圍內(nèi)加熱磁力攪拌器攪拌15 min，設(shè)定EX=225 nm，在發(fā)射波長(zhǎng)250～500 nm 范圍分別測(cè)定F值，由此得知，高溫情況下進(jìn)行包合時(shí)熒光強(qiáng)度值低于低溫下的熒光強(qiáng)度值，反應(yīng)可能是一個(gè)放熱反應(yīng)，因此我們選擇在室溫即25 ℃作為實(shí)驗(yàn)測(cè)定值，參見(jiàn)圖4。

2.3.3 時(shí)間對(duì)包合物的影響

通過(guò)對(duì)包合體系時(shí)間的考察：在25 ℃恒溫加熱磁力攪拌器攪拌，設(shè)定EX=225 nm，在發(fā)射波長(zhǎng)250～500 nm 范圍內(nèi)，每隔5 min 測(cè)定F 值，由此得知，當(dāng)反應(yīng)時(shí)間到達(dá)10 min 時(shí)，熒光強(qiáng)度值變化不大，反應(yīng)達(dá)到15 min 后趨于穩(wěn)定，因此我們選擇反應(yīng)15 min作為實(shí)驗(yàn)測(cè)定值，參見(jiàn)圖5。

2.3.4 β-環(huán)糊精濃度對(duì)包合物的影響

通過(guò)對(duì)β-CD 體積的考察：在25 ℃恒溫加熱磁力攪拌器攪拌15 min，設(shè)定EX=225 nm，在發(fā)射波長(zhǎng)250～500 nm 范圍內(nèi)分別測(cè)定F 值。由此得知，β-CD 體積越大，熒光強(qiáng)度值越大，因此我們選擇2.00 mL的加入量作為實(shí)驗(yàn)測(cè)定值，參見(jiàn)圖6。

2.4 熒光光譜法β-CD-MK 包合比及包合常數(shù)計(jì)算[17]

根據(jù)2.3.4 的結(jié)果，設(shè)定EX=225 nm，在發(fā)射波長(zhǎng)250～500 nm 范圍內(nèi)分別測(cè)定F 值，在β-CD 的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于洛伐他汀的情況下，根據(jù)Benesi-Hildebrand 的雙倒數(shù)法得包合物的包合常數(shù)K，根據(jù)擬合情況對(duì)包合比進(jìn)行判斷。假設(shè)β-環(huán)糊精和洛伐他汀的包合比為n，即MK+[β-CD]n→(β-CD)n-MK，則包合物的包合常數(shù)K=[(β-CD)n-MK]/（[MK]×[(β-CD)n]），式中，[MK]、[ β-CD]、[β-CDMK]分別為客體MK，主體β-CD和β-CD-MK的平衡濃度。根據(jù)Benesi-Hildebrand 的雙倒數(shù)法得：

式中：F 為不同濃度β-CD 的熒光強(qiáng)度，F(xiàn)0為不加入β-CD 時(shí)的熒光強(qiáng)度，F(xiàn)∞為包合物的熒光強(qiáng)度。

將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以1/(F-F0)分別對(duì)1/[β-CD]和1/[β-CD]n作圖（n=1,2,3），如果得到線(xiàn)性關(guān)系較好的直線(xiàn)則說(shuō)明其對(duì)應(yīng)的包合比為相應(yīng)的n 值。當(dāng)n=1時(shí)，F(xiàn)=0.0026c+0.0014（R2=0.9991，n=1,T=25 ℃）；當(dāng)n=2 時(shí)，F(xiàn)=0.0010c+0.0026（R2=0.9654，n=2,T=25 ℃）；F=0.0026c+0.0014（R2=0.9228，n=3，T=25 ℃），β-CD-MK 的雙倒數(shù)曲線(xiàn)見(jiàn)圖7，根據(jù)擬合情況看，1/(F-F0)和1/[β-CD]n的擬合在n=1 時(shí)，呈現(xiàn)較好的線(xiàn)性關(guān)系。由此可以確定β-環(huán)糊精和洛伐他汀的包合比為1∶1。由斜率和截距計(jì)算求得包合常數(shù)K=538.50 L/mol，說(shuō)明β-CD 與MK 形成的包合物較為穩(wěn)定。且溫度越高，包合常數(shù)K 值越小，說(shuō)明該反應(yīng)在較低溫條件下更穩(wěn)定。

在上述基礎(chǔ)上，改變反應(yīng)溫度，得到不同溫度下的反應(yīng)包合常數(shù)，見(jiàn)圖8和表4。

2.5 熒光光譜法β-CD-MK熱力學(xué)參數(shù)的計(jì)算[18]

標(biāo)準(zhǔn)狀況下，Gibbs 自由能G，焓H，熵值S 有如下關(guān)系：

表4 不同溫度下包合物的結(jié)合常數(shù)

由Van't Hoff等溫式可得：標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下，有ΔG°=ΔH°-TΔS°，由Van' t Hoff 等溫式可得：ΔG°=-RT ln K，則有：ln K=-ΔH°/RT+ΔS°/R，以lnK 對(duì)1/K 作圖，由斜率和截距求得ΔH 和ΔS，具體結(jié)果見(jiàn)表5，其中，R=8.314×10-3KJ/mol·K。由表5 可知，包合反應(yīng)的ΔH＜0，ΔS＜0，說(shuō)明反應(yīng)為放熱反應(yīng)，熵增過(guò)程；ΔG＜0 且隨著溫度的升高，反應(yīng)負(fù)值減小，說(shuō)明溫度較低更有利于實(shí)驗(yàn)的自發(fā)反應(yīng)。

表5 包合物的熱力學(xué)常數(shù)

3 結(jié)論

通過(guò)熒光光譜法研究了β-環(huán)糊精和洛伐他汀之間的相互作用，結(jié)果顯示，β-環(huán)糊精和洛伐他汀以1∶1 的包合比，包合常數(shù)K=538.50 L/mol，且該反應(yīng)是一個(gè)放熱自發(fā)反應(yīng)，為后期開(kāi)發(fā)紅曲酒的包埋工藝提供了理論依據(jù)。利用經(jīng)典的熒光增強(qiáng)法來(lái)研究β-環(huán)糊精與客體分子的包合作用越來(lái)越普遍：因?yàn)樵摲椒ㄋ枰脑噭┫啾雀咝б合喾ǖ雀鼮榘踩宜铇悠窛舛雀?。本次?shí)驗(yàn)中，借用環(huán)糊精的熒光增強(qiáng)作用，一個(gè)簡(jiǎn)單、快速且靈敏度高的用于測(cè)定洛伐他汀含量的方法被開(kāi)發(fā)，對(duì)比傳統(tǒng)的高效液相法兩種方法的結(jié)果都具有一定的可靠性，且熒光光譜法操作簡(jiǎn)單，試劑危害小，未來(lái)的發(fā)展空間會(huì)更大，為后期檢驗(yàn)包埋情況及含量檢測(cè)提供技術(shù)支持。