王 蒙，仝夢卓，許育民，馮 暉

（河南省食品工業(yè)科學(xué)研究所有限公司，河南鄭州 450000）

甲醇是白酒中的有害成分，主要由原料中的果膠內(nèi)甲基酯分解而成[1-2]，是衡量白酒安全質(zhì)量的重要衛(wèi)生指標(biāo)。飲用過多白酒，甲醇在體內(nèi)積蓄，產(chǎn)生毒性更強(qiáng)的甲酸和甲醛，嚴(yán)重影響人體的視神經(jīng)系統(tǒng)和血液系統(tǒng)。4～10 g 的甲醇即可引起嚴(yán)重中毒、失明甚至死亡[3-6]。因此，國家對其含量有著嚴(yán)格的規(guī)定[7]。目前酒中甲醇檢測的方法有亞硫酸鈉品紅比色法，填充柱氣相色譜法等[8-9]。近年來，毛細(xì)管柱氣相色譜法因其快速、高效的特點(diǎn)廣泛應(yīng)用于白酒樣品成分的檢測中[10-13]。本文采用AT.LZP-930毛細(xì)管柱，對儀器檢測條件進(jìn)行優(yōu)化和選擇，實(shí)現(xiàn)甲醇和乙醛的較好分離，建立了氣相色譜內(nèi)標(biāo)法檢測甲醇的分析方法，為白酒中甲醇的日常檢測提供便利。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

耗材及試劑：白酒，市購；乙醇，色譜級；甲醇、乙酸正丁酯、叔戊醇、乙酸正戊酯，純度不小于99 %；13 種白酒混標(biāo)，河南潤輝科技公司；實(shí)驗(yàn)用水均為超純水。

儀器設(shè)備：GC 2010 plus 氣相色譜儀（配FID 檢測器），日本島津公司；AT.LZP-930 白酒專用柱（30 m×0.25 mm×0.1 μm），蘭州中科凱迪化工新技術(shù)有限公司；Labsolution色譜工作站。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 氣相色譜測定條件

載氣為氮?dú)?，流速?.2 mL/min；程序升溫：柱初始溫度50 ℃，保持4 min，以3.5 ℃/min 升溫至150 ℃，保持5 min；進(jìn)樣口溫度：180 ℃；檢測器溫度：200 ℃；分流比50∶1；氫氣流速：40 mL/min；空氣流速：400 mL/min；進(jìn)樣量1 μL。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

參照GB 5009.266—2016[9]。

1.2.3 樣品測定

吸取試樣10 mL 于試管中，加入20 g/L 內(nèi)標(biāo)溶液0.1mL，混勻，取1 μL 進(jìn)樣，內(nèi)標(biāo)多點(diǎn)校正法定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 內(nèi)標(biāo)物的確定

內(nèi)標(biāo)物既要能完全溶解于樣品中，不與樣品組分發(fā)生反應(yīng)，又要能被色譜柱所分離，且不受試樣中其他組分峰的干擾。在白酒樣品中分別加入叔戊醇、乙酸正丁酯、乙酸正戊酯3 種內(nèi)標(biāo)物，在上述色譜條件下考察內(nèi)標(biāo)物在ATLZP-930 白酒專用柱上的出峰情況。隨機(jī)抽取15 個(gè)市售白酒，通過檢測分析發(fā)現(xiàn)3 種內(nèi)標(biāo)物均能與甲醇完全分開。但叔戊醇與白酒中的雜醇油異丁醇出峰時(shí)間接近，不能達(dá)到有效分離；乙酸正戊酯出峰時(shí)間處也出現(xiàn)一個(gè)未知干擾峰；而乙酸正丁酯出峰時(shí)間處無雜質(zhì)峰干擾。因此，本次試驗(yàn)確定內(nèi)標(biāo)物為乙酸正丁酯。

2.2 色譜條件的選擇優(yōu)化

2.2.1 柱初始溫度和柱流速

保持其他條件不變，實(shí)驗(yàn)比較了35 ℃、40 ℃、45 ℃、50 ℃、55 ℃、60 ℃的柱初始溫度。由圖1 可知，溫度越低，甲醇與乙醛及乙醇的分離度越好，但峰型扁平。隨著柱初始溫度的升高，甲醇與乙醛及乙醇的分離度有所下降，但甲醇的峰型逐漸趨于對稱且緊縮尖銳，分離時(shí)間也相對縮短。綜合峰型、分離度及分離時(shí)間，最終確定柱初始溫度為50 ℃。通過測試比較1.0 mL/min、1.2 mL/min、1.5 mL/min、1.8 mL/min、2.0 mL/min 的柱流速發(fā)現(xiàn)，流速增大，甲醇峰型扁平，在1.2 mL/min 流速條件下，甲醇與乙醛既能完全分離，峰型又好（見圖2）。因此流速設(shè)定為1.2 mL/min。

2.2.2 分流比

實(shí)驗(yàn)對比了20∶1、30∶1、40∶1、50∶1、60∶1、70∶1的分流比，進(jìn)樣后發(fā)現(xiàn)，在分流比為20∶1 的條件下，甲醇峰型拖尾；從40∶1 處開始甲醇峰型逐漸尖銳（見圖3）。然而隨著分流比的增大，不但會(huì)降低甲醇響應(yīng)面積同時(shí)也有可能帶來分流歧視，對定量結(jié)果影響較大。因此綜合考慮選用分流比為50∶1。

2.2.3 進(jìn)樣口溫度和檢測器溫度

從圖4可以看出，進(jìn)樣口溫度為160 ℃時(shí)，甲醇峰型較差。進(jìn)樣口溫度為180 ℃、200 ℃、220 ℃時(shí)，甲醇分離效果好，峰型尖銳對稱。180 ℃時(shí)甲醇峰面積最大。因此進(jìn)樣口溫度選擇180 ℃。為了防止冷凝，檢測器溫度應(yīng)大于進(jìn)樣口溫度。通過測試180 ℃、200 ℃、220 ℃、240 ℃的檢測器溫度發(fā)現(xiàn)，甲醇與乙醛的分離度及甲醇峰型都較好，但隨著檢測器溫度升高，甲醇峰面積逐漸降低。因此，檢測器溫度選擇200 ℃。

通過實(shí)驗(yàn)，確定氣相色譜測定甲醇的最優(yōu)條件為：進(jìn)樣口溫度180 ℃，檢測器溫度200 ℃，柱流量1.2 mL/min，柱初始溫度50 ℃，保持4 min，以3.5 ℃/min 升溫至150 ℃，保持5 min。以乙酸正丁酯為內(nèi)標(biāo)物，在此條件下混標(biāo)溶液及樣品中甲醇與乙醛及乙醇的分離效果好且甲醇峰型對稱尖銳（白酒樣品圖譜見圖5）。

2.3 方法的線性范圍、回歸方程和檢出限

以甲醇系列標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以甲醇和乙酸正丁酯色譜峰面積的比值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，在本色譜條件下，甲醇濃度在0.052～1.04 g/L 范圍內(nèi)呈線性，線性回歸方程為Y=0.593256x，R2=0.9998，以3 倍基線噪聲計(jì)算檢出限為0.02 g/L。

2.4 方法的精密度和回收率[14]

在本色譜條件下，對白酒樣品中甲醇濃度平行測定6 次，計(jì)算RSD=0.92 %，加標(biāo)回收率在94.21%～103.11%之間（如表1所示）。

表1 樣品加標(biāo)回收率結(jié)果

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)通過對氣相色譜檢測條件的優(yōu)化和選擇，提高了甲醇的分離度，改善了甲醇的峰型。以乙酸正丁酯為內(nèi)標(biāo)采用多點(diǎn)校正，最大限度消除了儀器的系統(tǒng)誤差，增加定量的準(zhǔn)確性，甲醇的相關(guān)系數(shù)為0.9998，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.92%。該方法簡單快速，分離效果好，精密度高，重現(xiàn)性好，為今后白酒中甲醇含量的質(zhì)量分析研究提供了方法依據(jù)。