吳蕾

摘 ?要：為評(píng)估新型重組禽流感（H5+H7）三價(jià)滅活苗對(duì)父母代種雞場(chǎng)的免疫效果，選擇了五家公司的禽流感三價(jià)滅活苗產(chǎn)品，分別免疫9日齡的SPF雞，并以廠家進(jìn)行分組（分別是A、B、C、D、E組），對(duì)照組為F組;采集免疫前后血清，檢測(cè) H5N1（Re-11、Re-12、Re-8）和H7N9（H7-Re2、H7-Re1）抗體效價(jià)，分析不同公司疫苗產(chǎn)品在雞上抗體的消長(zhǎng)規(guī)律。結(jié)果表明，對(duì)照組雞血清H5N1（Re-11和Re-12）和H7N9（H7-Re2）的HI抗體均為0;免疫1周后所有免疫組雞的禽流感抗體開(kāi)始上升，4周左右抗體效價(jià)達(dá)到高峰;產(chǎn)生抗H5N1（Re-11）的HI抗體最好的是A組;產(chǎn)生抗H5N1（Re-12）的HI抗體最好的是D組;產(chǎn)生抗H7N9（H7-Re2）的HI抗體最好的是E組;不同廠家禽流感三價(jià)苗產(chǎn)生禽流感抗體效價(jià)差異不顯著。三價(jià)滅活苗同時(shí)可以產(chǎn)生抗H5N1（Re-8）和H7N9（H7-Re1）的有效抗體。本研究對(duì)雞場(chǎng)免疫禽流感三價(jià)滅活疫苗提供數(shù)據(jù)支持。

關(guān)鍵詞：禽流感;H5+H7三價(jià)滅活苗;免疫效果評(píng)估

中圖分類號(hào)：S858.312.5 ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B ? ? 文章編號(hào)：1673-1085（2020）4-0015-05

高致病性禽流感是一種重要的人獸共患傳染病，被世界衛(wèi)生組織列為一類動(dòng)物疫病[1]。2013年開(kāi)始發(fā)現(xiàn)的 H7N9流感病毒對(duì)禽類表現(xiàn)為低致病性，感染禽類后并無(wú)明顯臨床癥狀;抗原不斷變異是禽流感病毒最顯著的特點(diǎn)，2017年5月12日我國(guó)農(nóng)業(yè)部首次報(bào)道了一起家禽H7N9流感疫情，引起發(fā)病的H7N9流行毒株具有典型的高致病性禽流感分子特征，對(duì)禽類表現(xiàn)為高致病性，臨床癥狀與H5亞型高致病性禽流感類似，死亡率較高[2]。為有效防控H7N9亞型禽流感，2017年7月農(nóng)業(yè)部發(fā)布關(guān)于切實(shí)做好全國(guó)高致病性禽流感秋季免疫工作的通知，要求從2017年秋季開(kāi)始對(duì)全國(guó)家禽全面開(kāi)展H7N9禽流感疫苗的免疫[3]。

許多養(yǎng)殖場(chǎng)由于規(guī)?；潭鹊突蛘咂渌虻南拗疲瑳](méi)有自己的實(shí)驗(yàn)室，對(duì)所使用的疫苗免疫效果不了解或者免疫程序不合理，導(dǎo)致免疫后仍不能產(chǎn)生有效的抗體保護(hù)家禽。選擇合適的疫苗和合理免疫程序?qū)τ行Х揽厍萘鞲芯哂兄匾囊饬x，本實(shí)驗(yàn)選擇了5家公司最新生產(chǎn)的H5+H7三價(jià)滅活苗免疫SPF雞，通過(guò)檢測(cè)H5N1（Re-11和Re-12）和H7N9（H7-Re2）的抗體效價(jià)和CV%值來(lái)評(píng)估免疫效果，并且根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果篩選最合適的重組禽流感（H5+H7）三價(jià)滅活苗。

1 ?材料與方法

1.1 ?試驗(yàn)動(dòng)物、疫苗 ?SPF雞由山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所SPF雞場(chǎng)提供，試驗(yàn)場(chǎng)所為山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房，試驗(yàn)在SPF負(fù)壓隔離器中進(jìn)行。

抗原H5N1（Re-11）株、H5N1（Re-12）株H5N1（Re-8）株、H7N9（H7-Re2）株和H7N9（H7-Re1）株及對(duì)應(yīng)的陽(yáng)性血清均由哈爾濱獸醫(yī)研究所提供。禽流感H5+H7三價(jià)滅活苗產(chǎn)品信息見(jiàn)表1。

1.2 ?試驗(yàn)分組 ?90只9日齡SPF雞隨機(jī)分為6組，每組15只。設(shè)5個(gè)試驗(yàn)組，分別對(duì)應(yīng)5個(gè)疫苗廠家（A、B、C、D、E），頸部皮下注射，每只0.3mL;1個(gè)對(duì)照組，免疫等量PBS。分別在免疫后1、2、3、4周對(duì)各組別雞進(jìn)行采血。

1.3 ?試驗(yàn)方法 ?HA和HI 檢測(cè)方法根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T-18936-2003）進(jìn)行。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?H5N1（Re-11）株抗體檢測(cè)結(jié)果 ?在9日齡首次免疫后1周，雞體產(chǎn)生的抗H5N1（Re-11）的抗體效價(jià)開(kāi)始上升，免疫后2周抗體檢測(cè)合格率100%，免疫后4周抗體效價(jià)達(dá)到高峰。高峰時(shí)抗體效價(jià)最高（A組）和最低（C組）相差1.04log2個(gè)滴度。B組抗原變異系數(shù)最?。–V值最低），與變異系數(shù)相對(duì)較高的C組相比，CV降低了2.95%。F組抗體效價(jià)均為0log2（表2）。

2.2 ?H5N1（Re-12）株抗體檢測(cè)結(jié)果 ?免疫后1周，抗H5N1（Re-12）的禽流感抗體開(kāi)始上升，免疫后2周，除A組和B組外，其余組采集的血清樣品均合格，免疫后4周抗體達(dá)到高峰。高峰時(shí)抗體最高的D組和抗體最低的A組相差1.19log2個(gè)滴度。CV值最好的E組比相對(duì)較差的A組低了5.37%。F組抗體值均為0log2（表3）。

2.3 ?H5N1（Re-8株）抗體檢測(cè)結(jié)果 ?免疫后2周，抗H5N1（Re-8株）的禽流感抗體開(kāi)始上升，免疫后4周各個(gè)試驗(yàn)組血清抗體值在5log2和6log2之間。F組抗體值均為0log2（表4）。

2.4 ?H7N9（H7-Re2）抗體檢測(cè)結(jié)果 ?免疫后1周，抗H7N9（H7-Re2）禽流感抗體開(kāi)始上升，免疫后3周抗體檢測(cè)合格率100%，免疫后4周抗體達(dá)到高峰。高峰時(shí)抗體效價(jià)最高的C組和E組比最低的D組高了1.52log2個(gè)滴度，C組的CV值，較E組的低了0.86%，比相對(duì)較差的B組低了3.49%。F組抗體值均為0log2（表5）。

2.5 ?H7N9（H7-Re1）抗體檢測(cè)結(jié)果 ?與H7N9（Re-2）抗體產(chǎn)生結(jié)果相似，免疫后3周抗H7N9（H7-Re1）抗體檢測(cè)合格率均達(dá)100%，4周抗體達(dá)到高峰。高峰時(shí)抗體效價(jià)最高的A組比最低的D組高了1.04log2個(gè)滴度，A組和E組抗體效價(jià)差異不顯著，比其高了0.35log2滴度，E組的CV值最低，比A組低了3.79%。F組抗體值均為0log2（表6）。

3 ?討論

2017年以來(lái)H7N9流感變異毒株給我國(guó)家禽養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了嚴(yán)重的影響和經(jīng)濟(jì)損失[2、4]。國(guó)內(nèi)外禽流感防控實(shí)踐表明，疫苗免疫是防治禽流感的關(guān)鍵措施之一[5-7]。

本試驗(yàn)中，從免疫后產(chǎn)生的抗體來(lái)看，5個(gè)廠家H5+H7三價(jià)滅活苗差異不顯著，都符合規(guī)定。

本試驗(yàn)還檢測(cè)了H5N1（Re-8）和H7N9（H7-Re1）的抗體效價(jià)，見(jiàn)表4和表6。盡管H5+H7三價(jià)滅活苗不含有H5N1（Re-8）疫苗株，但是免疫后4周，產(chǎn)生的抗H5N1（Re-8）的抗體效價(jià)也能達(dá)到5log2和6log2之間，這表明H5+H7三價(jià)滅活苗對(duì)市場(chǎng)上的H5N1（Re-8）禽流感也有一定的保護(hù)效果。

同樣免疫后，檢測(cè)到抗H7N9（H7-Re1）抗體結(jié)果和抗H7N9（H7-Re2）的結(jié)果相似，抗體效價(jià)最高達(dá)到了9.42log2，見(jiàn)表6。這表明5個(gè)廠家H5+H7三價(jià)滅活苗盡管不含有H7N9（H7-Re1）疫苗株，對(duì)H7N9（H7-Re1）毒株同樣具有很好的防控效果。

重組禽流感 H5+H7三價(jià)疫苗中因不同廠家疫苗抗原含量、生產(chǎn)工藝、免疫佐劑以及保存運(yùn)輸?shù)确矫娴脑?，?huì)導(dǎo)致疫苗質(zhì)量存在一些差異，從而造成免疫后H5和H7亞型免疫抗體水平差異。因此，免疫前后持續(xù)的抗體檢測(cè)是當(dāng)前高致病性禽流感免疫防控工作中的重要環(huán)節(jié)。另外，由于AIV等病毒抗原變異持續(xù)發(fā)生，定期開(kāi)展家禽重大疫病的流行病學(xué)調(diào)查和疫苗的免疫效果評(píng)估具有重要的臨床指導(dǎo)意義。

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Abstract：In order to evaluate the immunity effect of the new recombinant avian influenza （H5+H7） trivalent inactivated vaccine on the parental generation chicken farm， the trivalent inactivated vaccine products of five companies， A， B， C， D and E， were selected. Serum samples of chickens were collected weekly before and after inoculation to test the titer of H5N1（re-11， re-12， re-8） and H7N9（H7-re2， H7-re1） antibodies， and to analyze the fluctuation pattern of antibodies on chickens from different companies. The results showed that the HI antibodies of H5N1（re-11 and re-12） and H7N9（H7-re2） in the serum of the control group were 0log2.After 1w of immunity， the antibody of avian influenza of all the chickens in the immune group began to rise，and the titer of antibody reached a peak around 4w.The group that produced the best HI antibody against H5N1（re-11） was group A;The group that produced the best HI antibody against H5N1（re-12） was group D; The group E produced the best HI antibody against H7N9（H7-re2）.Different manufacturers of avian influenza trivalent vaccine produced avian influenza antibody titer difference is not significant.The trivalent inactivated vaccine also produces effective antibodies against H5N1（re-8） and H7N9（h7-re1）.This study provides data support for chicken farm immunity to avian influenza trivalent inactivated vaccine.

Key words：Avian influenza viruses;vaccine of recombinant avian influenza virus（H5+H7） trivalent inactivated;immune effect evaluation