黃夢瑤，童 昕，蔣 斌

（中山大學中山醫(yī)學院廣東省腦功能與腦疾病研究重點實驗室，廣東廣州 510080）

食欲素（orexin 或hypocetin）是由下丘腦外側區(qū)食欲素神經細胞合成和分泌的興奮性神經肽，分為Orexin A 和Orexin B（hypocretin-1 and hypocretin-2），主要參與睡眠覺醒、能量代謝、獎賞與藥物成癮等重要生理功能的調節(jié)［1-5］。食欲素結合食欲素1 型受體（orexin 1 receptor，OX1R）或食欲素2 型受體（orexin 2 receptor，OX2R）后發(fā)揮生物學作用，在大腦皮層中以OX2R 的分布為主［6-8］。而在皮質下，除了藍斑神經元以OX1R 為主，OX2R 也占較大比例，食欲素與受體相結合后，通過降低鉀通道電導、激活鈉鈣離子交換體和非選擇性陽離子通道，提高神經元興奮性，以及調節(jié)突觸傳遞等作用［6］。Orexin 神經元胞體位于下丘腦外側區(qū)，以及穹隆周圍核，但其神經纖維廣泛的投射至整個大腦皮質區(qū)域，包括視皮層［9-11］。在小鼠的初級感覺皮層包括視皮層、體感皮層、運動皮層的第6b 層（layer 6b，L6b）中均發(fā)現(xiàn)有一些神經元可以被OX2R 的激動劑所激活產生高頻發(fā)放的動作電位，稱之為Orexin 敏感的神經元［12］。然而皮層L6b 層的細胞種類繁多，根據神經元的形態(tài)和電生理特性分為以下5 種類型：錐體神經元（pyramidal neuron）、多極神經元（multipolar spiny neuron）、水平朝向神經元（“horizontally”oriented neuron）、倒置朝向神經元（“inverted”neuron）、以及不定朝向神經元（“tangentially”oriented neuron）［13］。為了明確小鼠視皮層L6b 中的Orexin敏感的神經元的具體細胞類型，我們首先用細胞生物素（biocytin）標記視皮層中L6b 對Orexin 敏感的細胞、外膝體注射逆行標記熒光染料（CTB555）標記L6b 反饋投射到外膝體的神經元，再研究食欲素是否調控這些反饋投射到外膝體的神經元接受第2/3 層的傳入的突觸傳遞及其機制。結果表明小鼠視皮層L6b 層中，Orexin B 敏感的神經元主要是錐體神經元和多極神經元。外源Orexin B 受體的激動劑，顯著增強反饋投射到外膝體的神經元接受2/3 層的神經傳入的突觸傳遞。Orexin B通過增強第2/3 到L6b 錐體細胞的突觸傳遞和直接興奮L6b 層的錐體神經元兩個途徑來強化L6b層細胞的活動，加強到外膝體的反饋控制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

本實驗所涉及的動物實驗獲得中山大學實驗動物倫理委員會批準［中山醫(yī)動倫（2018）第156號］，并嚴格遵循動物倫理要求進行動物實驗操作。本實驗采用P19-P28 的雌雄C57BL/6J 小鼠（SPF 級，購于中山大學動物實驗中心）。分籠飼養(yǎng)，自由攝入水食，室溫控制在（22±1）℃，12-12 h晝夜循環(huán)光照。實驗動物嚴格遵守《中山大學實驗動物管理條例》，實驗后，動物尸體按照中山大學實驗動物管理辦法進行處理。

1.2 腦立體定位注射逆行標記熒光染料CTB555

選擇P19-P21 左右的C57 小鼠，稱重，按劑量1 mL/20 kg 體質量，腹腔注射0.5%戊巴比妥鈉溶液使之麻醉。根據小鼠大腦立體定位圖譜確定外側膝狀體（lateral geniculate nucleus，LGN）的坐標，將Bregma 定為零點（0，0，0），Bregma 后2.3 mm，中線左右（2.0～2.1）mm，用顱骨鉆打磨顱骨，鉆出合適大小的骨窗。注射濃度為2 mg/mL 的CTB555（Cholera Toxin Subunit B，Alexa FluroTM555 Conjugate，Invitrogen，USA）0.2 μL，注射速度控制在0.02 μL/min。為了保證足夠的注射量和擴散面積，在相應位置上注射兩個點。注射完畢后留針5～10 min。動物蘇醒后，正常條件下飼養(yǎng)。整個實驗過程中將小鼠置于恒溫37 ℃的電熱毯上，并涂上眼膏防止小鼠眼睛干燥。

1.3 視皮層腦片制備

選用P22-28 的健康C57BL/6J 小鼠，異氟烷麻醉，快速斷頭，打開顱骨，取出大腦放入氧飽和的冰冷切片液中，1 min 后轉移至預冷的裝有冰冷切片液的平板中修塊，去除小腦組織，切下大腦枕葉，以橫斷面為底座用瞬間粘合膠固定到振動切片機平臺上，隨后立即倒入冰冷切片液浸沒腦組織，通以體積分數(shù)95%O2和5%的CO2混合氣體。調整切片機速度為3，振幅7～8，將腦組織切成8～10 片300 μm 厚度的含有視皮層的冠狀腦片，后隨即轉移至氧飽和的人工腦脊液（artificial cerebrospinal fluid，ACSF）中，34 ℃孵育30 min，后轉移至室溫使用。

1.4 腦片上記錄細胞的自發(fā)興奮性突觸后電位

用裝有電流鉗內液的玻璃電極（內含0.2%Biocytin，Sigma，USA），電流鉗方式鉗住皮層第6b層（L6b）中的神經細胞，記錄L6b 中各種細胞上的自發(fā)興奮性突觸后電位（spontaneous excitatory postsynaptic potential，sEPSP；圖1、2）。待細胞穩(wěn)定下來后（約3 min），置換成含有100 nmol/L Orexin B（Tocris Bioscience，UK）的ACSF（其中含有興奮性和抑制性突觸受體的阻斷劑），給藥灌流3 min 后，再用普通ACSF 進行洗脫，觀察被記錄的細胞是否能被Orexin B 的激動劑所興奮。本實驗通過PClamp 軟件可以實現(xiàn)封接電阻，串聯(lián)電阻和輸入電阻的讀取，并在實驗全程對串聯(lián)電阻進行實時監(jiān)控，對于串聯(lián)電阻前后變化不超過20%的數(shù)據才進行統(tǒng)計分析。

1.5 標記L6b 神經細胞類型

細胞載入Biocytin 后（至少持續(xù)記錄sEPSP 5 min），緩慢移出電極，保持細胞活性狀態(tài)，即刻將腦片轉移至40 g/L 多聚甲醛溶液中固定，避光保存于4 ℃冰箱。24 h 后，取出腦片盛放在12 孔板的小孔里，用0.01 mol/L PBS 溶液漂洗3～5 次。再將腦片放入體積分數(shù)0.3% Triton-100 的PBS 中2 h。按1∶200 稀釋度加入Avidin 555（Streptavidin，Alexa Fluro 555 conjugate，Invitrogen corporation，USA），混勻后，用錫紙包裹，放置4℃冰箱過夜。后再用0.01 mol/L PBS 溶液漂洗，雙光子顯微鏡掃描拍照，觀察細胞的形態(tài)（圖1、2）。

1.6 自發(fā)興奮性突觸后電流和微小興奮性突觸后電流的記錄

外膝體注射CTB555 一周后的小鼠，異氟烷使之麻醉，斷頭，制作視皮層腦切片。電壓鉗模式下，鉗住經CTB555 標記的、反饋投射到外膝體的L6b 中的神經元（圖3），將膜電位鉗制于-70 mv，記錄細胞的自發(fā)興奮性突觸后電流（spontaneous excitatory post synaptic current，sEPSC；圖4A），先用普通的ACSF 記錄3 min，然后換成含有100 nmol/L Orexin B（Tocris Bioscience，UK）的ACSF（其中含有興奮性和抑制性突觸受體的阻斷劑），給藥灌流3 min 后，再用普通ACSF 進行洗脫。觀察外源Orexin B 給藥后，由LGN 逆行標記的視皮層L6b 細胞是否產生內向電流。

微小興奮性突觸后電流（miniature excitatory post synaptic current，mEPSC）與sEPSC 一樣，只是在灌流液ASCF 中分別加入Tetrodotoxin（TTX，1 μmol/L）、Picrotoxin（50 μmol/L）、CNQX（20 μmol/L）以及APV（100 μmol/L）阻斷所有突觸傳遞（圖4C）。通過比較Orexin B 加藥前后的振幅和頻率，判斷Orexin B 對Orexin B 敏感神經元的作用是突觸前作用還是突觸后作用。

1.7 Evoked EPSC（eEPSC）的記錄

外膝體CTB555 注射一周后的小鼠，異氟烷使之麻醉，斷頭，制作視皮層腦切片。電壓鉗模式下，鉗住被經CTB555 標記的、反饋投射到外膝體的L6b 中的神經元，將電極尖端直徑為125 μmol/L的雙極同心圓電極放置于視皮層的第5 層（L5），刺激來自L2/3 的傳入到該細胞的神經傳入，記錄由電刺激L2/3 引起的AMPAR-EPSC（圖5、6）。實驗通過PClamp 軟件可以實現(xiàn)封接電阻，串聯(lián)電阻和輸入電阻的讀取，并在實驗全程對串聯(lián)電阻進行實時監(jiān)控，對于串聯(lián)電阻前后變化不超過20%的數(shù)據才進行統(tǒng)計分析。

1.8 數(shù)據的統(tǒng)計與分析

本實驗所以的電生理數(shù)據均由PClamp 軟件記錄并分析處理，mEPSC 數(shù)據由Minianalysis software 軟件分析，最后用GraphPad software 對數(shù)據進行t檢驗或方差分析。

2 結果

2.1 Orexin B 直接興奮小鼠視皮層第6b 層中的神經元

為了探究小鼠視皮層L6b 中的神經元細胞類型以及是否存在對Orexin B 敏感的神經元，我們在P19-P28 C57BL/6J 小鼠視皮層離體腦片上，在電流鉗模式下，用含有0.2% biocytin 的記錄電極隨機鉗住細胞，記錄神經元的興奮性突觸后電位（sEPSP）。由于哺乳動物神經元的靜息電位離閾電位之間有一定的差值，因此我們通過改變灌流液ACSF 中的K+濃度，適當降低神經元的膜電位水平使細胞的膜電位接近閾電位水平。觀察Orexin B 灌流給藥3 min 后，記錄電位的變化。為了減少藥物干擾，所有實驗每個腦片只記錄一個細胞，實驗結束后立即將腦片轉移至40 g/L 的多聚甲醛中固定，后續(xù)通過免疫染色后，在雙光子顯微鏡下對細胞進行形態(tài)分析。結果顯示，小鼠視皮層L6b 中細胞的形態(tài)主要有錐體神經元、多極神經元、水平朝向神經元、倒置朝向神經元、以及不定朝向神經元（圖1 A、D 和圖2A、D、G），結果與文獻報道的一致［13］。分析每種細胞對應的電生理數(shù)據（圖1B、E 和圖2B、E、H）發(fā)現(xiàn)，小鼠視皮層中確實存在Orexin B 敏感的神經元（圖1B、E）。通過外源激活Orexin B 受體可以直接對Orexin B敏感細胞產生興奮性調節(jié)效應。其中大部分錐體細胞（58.1%）和多極細胞（52.9%；圖1 C、F）為Orexin B 敏感的神經元。在Orexin B（100 nmol/L）作用3 min 后，細胞膜發(fā)生去極化并伴有成串的動作電位，且隨著正常的ACSF 洗脫，動作電位的頻率降低。然而水平朝向神經元、不定朝向神經元和倒置朝向神經元在Orexin B（100 nmol/L）作用前后膜電位水平無明顯變化（圖2B、E、H）。說明水平朝向神經元、不定朝向神經元和倒置朝向神經元為Orexin B 不敏感神經元。

圖1 Orexin B 直接興奮小鼠視皮層第6b 層中的錐體神經元和多極神經元Fig.1 Orexin B directly excited the pyramidal neuron and multipolar spiny neuron in layer 6b of visual cortex

圖2 小鼠視皮層第6b 層中水平朝向神經元、不定朝向神經元和倒置朝向神經元為食欲素不敏感神經元Fig.2 Horizontally oriented neurons，inverted neurons and tangentially oriented neurons were Orexin B-insensitive neurons in layer 6b of visual cortex

2.2 逆行標記熒光染料CTB555標記視皮層第6b層中的神經元

視皮層L6b 同時接收來自第2/3 層纖維自上而下的傳入，同時也接受來自外膝體纖維自下而上的傳入。因此視皮層中L6b 也是一個重要的輸出層，反饋投射到LGN 以及其它間腦核團。為了標記視皮層第6b 中的神經元，我們在小鼠兩側的LGN 中注射逆行病毒標記物CTB555（圖3A），7～10 d 后切腦片在雙光子顯微鏡下觀察病毒標記情況。結果（圖3B）所示，病毒染料CTB555 成功標記了視皮層L6b 中的神經元，即第6b 層中反饋投射至LGN 的神經元。

2.3 Orexin B 增大視皮層第6b 層中投射到外側膝狀體的神經細胞的興奮性突觸后電流的振幅

為了研究Orexin B 對視皮層L6b 層中投射至LGN 的神經元的興奮性突觸后電流（sEPSC）的作用，我們在電壓鉗模式下，采用全細胞記錄模式，記錄被CTB555 標記的紅色熒光細胞的sEPSC（圖4），在被CTB555標記的紅色熒光細胞上，直接激活Orexin B受體可以記錄到去極化電流（圖4A）。為了研究Orexin B 的濃度與去極化電流之間的關系。采用10、20、50、100 和200 nmol/L 進行濃度梯度灌流，相關系數(shù)為0.7168，P=0.0212，發(fā)現(xiàn)兩者之間為正相關關系，且100 nmol/L時引起的去極化電流已達到最大值［10 nmol/L：（24.78±2.03）pA，n=13 cells，8 mice；20 nmol/L：（53.12±2.24）pA，n=13 cells，6 mice；50 nmol/L：（74.56±2.66）pA，n=17 cells，8 mice；100 nmol/L：（79.5±2.41）pA，n=12 cells，7 mice；200 nmol/L：（83.56±2.36）pA，n=12 cells，7 mice；圖4B；F=99.69，P＜0.000 1］。

圖3 標記小鼠視皮層第6b 層中投射至外側膝狀體的神經元Fig.3 Neurons in L6b of visual cortex projecting to the dorsal lateral geniculate nucleus labeled by CTB555

為了進一步研究Orexin B 引起的去極化效應是源于突觸前還是突觸后，我們在ACSF 中分別加入Tetrodotoxin（TTX，1 μmol/L），Picrotoxin（50 μmol/L）、CNQX（20 μmol/L）以及APV（100 μmol/L）阻斷所有突觸傳遞并記錄微小興奮性突觸后電流（mEPSC），將細胞鉗制于-70 mv，穩(wěn)定記錄3～5 min，后切換含Orexin B 的灌流液，記錄5～8 min，用mini-analaysis 分析統(tǒng)計mEPSC 的振幅和頻率（圖4C）。發(fā)現(xiàn)Orexin B 增加了mEPSC 的振幅［Ctr：（9.36±0.034）pA，Orexin B：（11.51±0.036）pAn=19 cell from 7 mice，pairedt-test，P=0.03］但其頻率沒有變化［Ctr：（1.48±0.08）Hz，Orexin B：（1.55±0.09）Hz，n=19 cell from 7 mice，pairedt-test，P=0.67］，該結果說明Orexin 增強突觸傳遞是通過突觸后效應（圖4D）。

2.4 Orexin B 增強視皮層第6b 層中投射到LGN的神經細胞接受第2/3 層神經傳入的突觸傳遞

為了探究Orexin B 是否調節(jié)L6b 的Orexin B敏感神經元接受第2/3 神經傳入的突觸傳遞，用金屬電極刺激來自第2/3 的神經傳入，電壓鉗鉗住L6b 中被CTB555 標記的熒光細胞，記錄興奮性突觸后電流（eEPSC）。將細胞膜電阻變化前后不超過10%，系列電阻變化不超過15%的記錄細胞數(shù)據納入分析（圖5A）。Orexin B 加入后，EPSC 逐漸增大，到藥物開始洗脫時EPSC 達到最大值，隨著洗脫減小，最后趨于平緩（圖5A、C）。EPSCs的記錄為每15 s 給予一對刺激，刺激時間間隔為0.1 s（圖5A），通過對配對脈沖比率（paired-pulse ratio，PPR）的值（PPR=P2/P1，P1 和P2 分別為第1個刺激和第2 個刺激誘發(fā)EPSC 的振幅大?。?/p>

Orexin B 加藥之前PPR 為1.21±0.05，加藥后PPR 為1.17±0.05（n=20 cells，pairedt-test，P=0.64；圖5B），加藥前后PPR 無顯著變化，因此Orexin B 對L6b 中其敏感神經元上來自第2/3 層的輸入纖維突觸傳遞的增強作用是突觸后效應。為了探究Orexin B 對L6b 層中來自2/3 層傳入纖維的突觸傳遞的增強是否也存在劑量依賴性效應，我們分別用不同濃度的Orexin B 20、50 和100 nmol/L 的Orexin B 重復上述實驗。發(fā)現(xiàn)Orexin B濃度越大，加藥后突觸后電流（EPSC）增大越明顯［加入Orexin B并洗脫后20～25 min，100 nmol/L：（130±2.5）%，n=19 cells，8 mice；50 nmol/L：（117±2.7）%，n=10 cells，5 mice；20 nmol/L：（105±1.8）%，n=9 cells，5 mice；圖5D，F(xiàn)=19.86，P＜0.000 1］。

圖4 Oreixn B 在視皮層第6b 層中投射至LGN 的Orexin B 敏感神經元的sEPSC 和mEPSC 的效應Fig.4 The effects of Orexin B on the sEPSC and mEPSC in Orexin-sensitive neurons in layer 6b of visual cortex

圖5 Orexin B 增強視皮層L6b 層中Orexin 敏感神經元上接受第2/3 層神經傳入通路的突觸傳遞Fig.5 Orexin B enhanced the synaptic transmission onto Orexin B-sensitive neurons in layer 6b from layer 2/3 input

2.5 Orexin B 的突觸傳遞增強效應由ORX2 介導，mGluR5 的參與，并激活PLC 引起胞內Ca2+上調而產生

為探索Orexin B 增強第2/3 層傳遞到Orexin B敏感神經元的突觸傳遞的具體機制，我們首先加入OX2R 受體的阻斷劑TCS OX2R 29（10 μmol/L），發(fā)現(xiàn)增強現(xiàn)象被阻斷［加入Orexin B 并洗脫后20～25 min，（Ctr：（119.33±2.51）%，n=15 cells，7 mice；TCS OX229：（103.17±2.75）%，n=30 cells，10 mice）；圖6A；unpairedt-test，P=0.000）］。為了研究OX2R 受體激活后引起的細胞內分子機理，我們加入磷脂酶C（phospholipases C，PLC）的阻斷劑U173332 后，Orexin B 的增強作用也被阻斷［Ctr：（125.51±1.4）%，n=11 cells，5 mice；U173332：（103.89±1.04）%，n=10 cells，5 mice；圖6B，unpairedt-test，P=0.000］，表明OX2R 受體激活后，導致細胞內的PLC 活性上調。在電極內液中加入BAPTA（胞內Ca2+的螯合劑10 mmol/L），細胞破膜形成全細胞模式5 min 后開始記錄，以使BAPTA 擴散進入細胞。在BAPTA 存在的情況下，Orexin B 的增強效應也完全被阻斷［Ctr：（125.54±1.53）%，n=11 cells，5 mice；BAPTA：（102.86±1.7）%，n=9 cells，4 mice；圖6C；unpairedt-test，P=0.000）］。因此，Orexin B 的增強作用需要胞內Ca2+水平升高。加入受體mGluR5 的拮抗劑，MPEP（10 μmol/L），Orexin B 的增強效應也被阻斷［Ctr：（126.14±3.87）%，12 cells，5 mice；MPEP：（106.32±2.65）%，n=12 cells，6 mice，unpairedttest，P=0.000］，表明Orexin B 調控第2/3 層傳入到L6b 中的orexin 敏感神經元的突觸增強效應是由ORX2 介導，mGluR5 的參與，并激活PLC 引起胞內Ca2+上調而引起。

圖6 Orexin B 增強食欲素敏感神經元接受第2/3 層神經傳入的突觸傳遞的機制Fig.6 The mechanisms of Orexin B to enhance synaptic transmission onto Orexin B-sensitive neurons from layer2/3 inputs

3 討論

大腦皮層由6層組成，各層中呈現(xiàn)出不同的神經細胞類型以及不同的神經連接。作為多形細胞層的第6 層又分為位于淺部的第6a 層（L6a）和深部臨近白質（white matter，WM）的6b 層（L6b）［14-16］。盡管有報道［12］發(fā)現(xiàn)視皮層L6b 亞層中的一些細胞對Orexin 敏感，即激活Orexin B 可以直接興奮L6b中的一些神經元。但沒有明確具體的神經細胞類型。本研究發(fā)現(xiàn)Orexin B 能直接興奮第6 層中的大部分的錐體神經元和多極神經元，但Orexin B不直接興奮L6b 中的水平朝向神經元，倒置朝向神經元和不定朝向神經元。我們還發(fā)現(xiàn)在L6b 中由CTB555 標記的、反饋投射到外膝體的神經元92.5%為錐體神經元，且這些錐體神經元中有63.3%對Orexin 敏感［17］，因此，Orexin B 除了直接興奮由外膝體逆行標記的錐體神經元和多極神經元外，還增強第2/3 層傳入到位于L6b 中由CTB 555 標記的，反饋投射到外膝體的錐體神經元之間的突觸傳遞。

探索L6b 中Orexin 敏感細胞的形態(tài)和神經連接以及Orexin 在視皮層內部突觸傳遞中的效應對理解Orexin 在視覺處理中的作用至關重要。視覺信號由視網膜傳送到丘腦的外膝體，信號經處理后主要傳遞到視皮層第4 層，少量傳至到第2/3 層以及第5/6 層［18-19］，而視皮層的第6 層也將接受視皮層第2/3 層的信號反饋傳遞給丘腦背側外膝體（dLGN）和丘腦側后核群（LP），從而形成重要的反饋環(huán)路［20-21］。第6 層到外膝體的反饋環(huán)路在視覺信息的篩選和精練中起重要作用。第6 層細胞的活動加強，即加強了L6b 細胞到外膝體的反饋控制可以銳化LGN 的視覺信息并傳到第4 層，因此，第6 層細胞是外膝體信息傳入的監(jiān)控器，放大或減弱LGN 到視皮層的信息輸入［22］。研究結果提示：Orexin B 通過增強第2/3 到第6 層錐體細胞的突觸傳遞和直接興奮第6 層的錐體神經元兩個途徑來強化第6 層細胞的活動，加強到外膝體的反饋控制。由于Orexin 的主要作用是維持動物的覺醒狀態(tài)［1-2］，據此推測動物在清醒的狀態(tài)，投射到視皮層的Orexin 系統(tǒng)激活后強化第6 層細胞的活動，可使動物在清醒、警覺的狀態(tài)下更為有效地對視覺信息有效的篩選，增強視皮層對視覺信息的分辨率。

食欲素直接興奮大腦中的某些神經元，特別是在感覺皮層的機制已有詳細的報道［12］，Orexin使神經元產生緩慢而持久的去極化，這種變化足以使神經元爆發(fā)動作電位，若神經元已經爆發(fā)動作電位，Orexin 則可以提高其放電頻率。概括起來，Orexin 對神經元的去極化可歸因于三個機制：①在靜息電位時關閉鉀離子通道［23］；②Na+/Ca2+交換器的激活［24-25］；③非選擇性陽離子通道（NSCCS）的激活［26-27］。我們的結果表明在視皮層，Orexin B 選擇性地作用于L6b 中的錐體神經元。Orexin B 增加了mEPSC 的振幅，但頻率卻不受影響，表明Orexin B 對L6b 中的錐體神經元的作用是通過直接的突觸后作用。第6 層錐體細胞膜上的OX2R 在Orexin B 的激活下發(fā)揮作用。

盡管已有研究表明初級視皮層第6b 是對Orexin有反應的唯一亞層［12］。然而Orexin B參與對第6b層其敏感的神經元接受的傳入纖維的突觸傳遞的調控至今未見報道。本文研究了Orexin B 調節(jié)小鼠視皮層L6b 層錐體神經元接受來自L2/3 信息傳入的突觸傳遞的效應以及生理學機制，發(fā)現(xiàn)Orexin B 增強L6b 的錐體神經元接受第2/3 層傳入纖維的突觸傳遞，這種突觸增強效應由ORX2 介導，mGluR5 的參與，并激活PLC 引起胞內Ca2+上調而引起。在視覺信息傳遞過程中，通過接收L2/3的前饋傳入，從而增強第6b 錐體細胞的興奮性。