楊宇婷，崔春雨

(河南師范大學 國家級化學實驗教學示范中心，河南 新鄉(xiāng) 457003)

茜草有名茜根，俗名稱拉拉藤、活血草、血見愁等[1]，為茜草科多年生植物茜草Rubia cordifolia L.的干燥根和根莖，在我國分布廣泛，南北各地均有分布，我國共有24種10變種，以西南地區(qū)為種類最多，例如河南、山東、陜西、安徽、河北等地均大量出產(chǎn)，春秋兩季采挖，洗凈，干燥，切斷。茜草性寒味苦，歸肝經(jīng)。既能涼血止血，又能活血祛瘀。臨床上主要用其生品和茜草炭，茜草生品苦寒泄熱，涼血祛瘀，通經(jīng)，臨床用于吐血，衄血，崩漏，外傷出血，瘀阻經(jīng)閉，關節(jié)痹痛，跌撲腫痛[2]218-219。其炮制品炒炭后，味苦、澀，能增強止血作用[3]，臨床用于血痢，咯血，崩漏出血，尿血等各種出血。現(xiàn)代化學研究茜草的化學成分多樣以蒽醌及其苷類為主例如大葉茜草素、羥基茜草素、茜草素[3]等，此外還含有萘醌類、萜類、鞣質(zhì)、多糖、微量元素等化學成分，對其化學成分和藥理作用再進一步研究中。本文主要對茜草炮制前后化學成分的變化進行研究，為臨床更好的使用茜草及炮制品提供依據(jù)。

1 實驗材料

日本島津LC10A高效液相色譜儀(自動進樣器、檢測器SPD-M10AYP、四元低壓梯度泵、Class-VP 色譜工作站)、SG5200HPT超聲波清洗器(上海冠特超聲儀器有限公司)、FA2104B電子天平(上海越平科學儀器有限公司)、100-2AS電熱鼓風干燥箱(上海市永光明醫(yī)療儀器廠)、752型紫外分光光度計(上海棱光技術有限公司)。

大葉茜草素對照品(批號：110884-200604 中檢所)、沒食子酸對照品(批號：110831-201204 中檢所)碳酸鈉、鎢酸鈉、鉬酸鈉、干酪素、水為分析純水、甲醇 四氫呋喃為色譜純(天津科密歐化學試劑有限公司)、茜草購于河南省藥材公司。

2 實驗方法和結果

2.1 炮制方法

茜草生品：取茜草，除去雜質(zhì)，清水洗凈，潤透后切成3 cm段，干燥。

茜草炭：取茜草段，置熱鍋內(nèi)，炒至表面焦黑色、內(nèi)部焦褐色，噴淋少許清水，熄滅火星，取出，晾干[2]附錄ⅡD.。

2.2 炮制前后大葉茜草素的含量測定

2.2.1 色譜條件

按照2015年版《中國藥典》記載其色譜條件色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為甲醇：乙腈：0.2%磷酸溶液(25∶50∶25)檢測波長為250 nm，進行試驗發(fā)現(xiàn)試驗過程中，結果并不理想，保留時間太長，分離度不夠，出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，磷酸溶液需要新鮮配制，易生微生物，操作繁瑣。因此，對色譜條件進行重新篩選，經(jīng)過反復試驗結合查閱文獻[4-5]，色譜條件確定為：色譜柱：Shim-pack VP-ODS柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)、流動相：乙腈∶水(65∶35)、流速：1 mL/min、柱溫：30℃、檢測波長：250 nm、進樣量：10 μL。

2.2.2 標準曲線

用甲醇精密配置各濃度大葉茜草素對照品溶液，濃度分別是：0.01、0.02、0.04、0.08、0.10 mg/mL。分別吸取10 μL進樣，記錄相應的峰面積。分析得：a=5 ×104 b+81637，r=0.9998，大葉茜草素進樣量在0.01～0.10 mg之間呈良好的線性關系，其中a代表峰面積，b代表對照品濃度，色譜圖見圖1。

圖1 大葉茜草素對照品的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograph of mollugin

2.2.3 供試品溶液

取茜草生品及茜草炭適量粉碎，過60目篩。精密稱取各樣品80 mg，放置于10 mL容量瓶中，加入8 mL甲醇，超聲波提取1 h，取出放冷、用甲醇定容至10 mL，提取液用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

2.2.4 精密度考察

取0.04 mg/mL大葉茜草素對照品溶液，在2.2.1條件下，連續(xù)進樣5次，每次10 μL，進行測定，分析結果大葉茜草素峰面積積分值的RSD為0.26%，表明儀器的精密度良好。

2.2.5 重現(xiàn)性考察

取茜草生品樣品5份，按2.2.3方法制備成供試溶液，在2.2.1條件下，進行測定，分析結果大葉茜草素峰面積的RSD為1.3%，表明重現(xiàn)性良好。

2.2.6 穩(wěn)定性考察

取茜草生品室溫下放置，分別于0、2、4、6、8和10 h，按上述方法進行測定，分析結果大葉茜草素峰面積的RSD為0.5%，表明樣品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 加樣回收率考察

精密稱取已知含量的茜草生品9份，每份40.0 mg，隨機分為3組，每組分別準確加入大葉茜草素對照品，加入量分別為樣品中答應我茜草素含量的80%，100%、120%。 按2.2.3方法制備成供試品溶液， 按2.2.1色譜條件下，進行測定，計算回收率，測得大葉茜草素的加樣回收率在97.90%，RSD為1.4%(n=9)。

2.2.8 樣品含量測定

取茜草生品及茜草炭樣品，按上述方法制備成供試溶液，按上述色譜條件進行測定，吸取供試品溶液10 μL進行測定，測定茜草生品中大葉茜草素的含量為0.53%，茜草炭中大葉茜草素的含量為0.35%。色譜圖見圖2、3。

圖2 茜草生品中大葉茜草素的含量Fig.2 Chromatograph of obtained from Rubia cordifolia L

圖3 茜草炭中大葉茜草素的含量Fig.3 Chromatograph of obtained from Rubia cordifolia L carbon

2.3 炮制前后鞣質(zhì)含量測定[2]附錄ⅩB

2.3.1 標準曲線

按照2015年版《中國藥典》方法建立準曲線：以吸光度a為縱坐標，濃度b為橫坐標，繪制標準曲線。a=4.015b-0.0582，r=0.9982。

2.3.2 供試品溶液的制備

取茜草生品及茜草炭粉末，精密2 g，置250 mL棕色量瓶中，加水150 mL，超聲處理1 h放冷，用水定容至250 mL，搖勻，靜置，濾過，棄去初濾液50 mL，精密量取續(xù)濾液20 mL，置100 mL棕色量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.3 樣品測定

精密量取各種供試品溶液2 mL，置25 mL棕色量瓶中。按照2010年版《中國藥典》方法測定各供試品中總酚量及不被吸附的多酚量，計算各供試品中鞣質(zhì)的含量：茜草生品中鞣質(zhì)的含量為：0.16%、茜草炭中鞣質(zhì)的含量為：0.33%。

3 結論

茜草始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，2015年版《中國藥典》收錄其根、根莖。茜草根及根莖長期以來作為天然染料和止血藥使用，其藥理活性和活血成分進行了系統(tǒng)分析。本文采用HPLC法及紫外-分光光度法測定茜草生品及茜草炭中大葉茜草素和鞣質(zhì)的含量。其中茜草炭中大葉茜草素的含量及茜草生品降低，鞣質(zhì)的含量明顯升高。制炭過程中溫度過高可能會造成大葉茜草素升華、分解造成含量降低，同時高溫造成其他化學成分分解為鞣質(zhì)，茜草炭中鞣質(zhì)的含量明顯增高。有實驗表明鞣質(zhì)與止血作用[6]有一定的聯(lián)系，這也與茜草炭的藥活性相一致。在試驗過程中應注意溫度的控制，做到“炒炭存性”，避免炭化。