虞為 吳進(jìn)喜 林黑著 文國(guó)樑 曹煜成 黃小林 黃忠 楊育凱 李濤 趙旺

摘要：為研究丁香酚對(duì)花鱸（Lateolabrax maculatus）幼魚(yú)的麻醉效果。采用靜水方法在水溫（27±1）℃下研究不同質(zhì)量濃度丁香酚（20、25、30、40、50、60、80 mg/L 和 100 mg/L）對(duì)規(guī)格為（21.6±2.75） cm長(zhǎng)和（1103±30.67） g重的花鱸麻醉效果和呼吸頻率的影響。25～100 mg/L 質(zhì)量濃度的丁香酚均能使花鱸進(jìn)入深度麻醉期，且麻醉濃度與平均入麻時(shí)間呈負(fù)相關(guān)，與平均復(fù)蘇時(shí)間成正相關(guān);丁香酚質(zhì)量濃度為50 mg/L時(shí)，麻醉效果較好。低濃度丁香酚20 mg/L對(duì)花鱸呼吸頻率影響不明顯。在質(zhì)量濃度達(dá)到40～100 mg/L時(shí)，魚(yú)體由麻醉期（A3）進(jìn)入深度麻醉期（A4），呼吸頻率迅速降低。以50 mg/L丁香酚將花鱸麻醉后再在空氣中進(jìn)行暴露，暴露時(shí)間與復(fù)蘇時(shí)間呈正相關(guān)。暴露時(shí)間在2～30 min 范圍內(nèi)的復(fù)蘇率為100 %。當(dāng)時(shí)間增加至35、40和45 min 時(shí)，復(fù)蘇率降低至66%，33%和0。且暴露時(shí)間大于20 min花鱸只能進(jìn)入恢復(fù)期3期（R3）。因此，50 mg/L 的丁香酚麻醉液是花鱸幼魚(yú)的理想麻醉濃度。

關(guān)鍵詞：丁香酚;花鱸（Lateolabrax maculatus）;幼魚(yú);麻醉

花鱸（Lateolabrax maculatus），又稱海鱸，隸屬鱸形目鮨科花鱸屬，為肉食性魚(yú)類，肉質(zhì)細(xì)嫩，營(yíng)養(yǎng)豐富，深受消費(fèi)者的喜愛(ài)，是重要的海水經(jīng)濟(jì)魚(yú)類品種之一[1]。在花鱸養(yǎng)殖與流通過(guò)程中，多見(jiàn)的離水操作，如捕撈和搬運(yùn)過(guò)程等各種人工脅迫均致使魚(yú)體出現(xiàn)相應(yīng)損傷，從而對(duì)后續(xù)魚(yú)的成活率造成影響。事實(shí)上，為減少人為操作帶來(lái)的損傷和死亡率，麻醉劑起著舉足輕重的作用;它不僅能使魚(yú)體鎮(zhèn)靜，還能緩解魚(yú)類受驚，從而減少魚(yú)體表發(fā)生碰撞擦傷的情況;除此之外，麻醉?xiàng)l件下還能降低魚(yú)體代謝耗能，維持水體質(zhì)量。

間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽（MS-222）與丁香酚作為目前常用的漁用麻醉劑已被廣泛使用，目前斑點(diǎn)叉尾鮰Ictalurus punctatus、黑鯛Sparus macrocephlus、中華鱘Acipenser sinensis、大西洋鮭Salmo salar、斑馬魚(yú)Danio rerio、鯉魚(yú)Cyprinus carpio、羅非魚(yú)Oreochromis spp.、大黃魚(yú)Larimichthys crocea等[2-7]多種魚(yú)已經(jīng)完成了相關(guān)麻醉試驗(yàn)的研究，而對(duì)于丁香酚麻醉花鱸效應(yīng)的相關(guān)研究未見(jiàn)報(bào)道。本研究采用不同質(zhì)量濃度的丁香酚對(duì)花鱸幼魚(yú)進(jìn)行麻醉試驗(yàn)，通過(guò)觀察花鱸幼魚(yú)的行為反應(yīng)確定適合花鱸的最佳丁香酚濃度，為花鱸的增殖放流和養(yǎng)殖生產(chǎn)提供有效的參考。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

丁香酚（C10H12O2）（2- 甲氧- 4- 丙烯基酚）為無(wú)色或蒼黃色液體，不溶于水，易溶于醇類等有機(jī)溶劑，相對(duì)分子質(zhì)量為 164.20，純度大于99%，購(gòu)置于上海阿拉丁生化科技股份有限公司?；|魚(yú)選自中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所深圳試驗(yàn)基地，水源為純海水，水溫保持在 （28±1）℃，水體溶氧 ≥6.8 mg/L，pH 6.5～7.5。試驗(yàn)魚(yú)活力強(qiáng)、體格健壯、體表完整、體色正常。丁香酚和無(wú)水乙醇按照體積比例為 1∶9配置為母液備用，麻醉試驗(yàn)操作時(shí)現(xiàn)配，配置藥液充分?jǐn)嚢杈鶆蚝箪o置 15 min。試驗(yàn)容器的規(guī)格為： 15 cm×15 cm×30 cm，連續(xù)充氧曝氣，保持試驗(yàn)水體的溶氧在7 mg/L以上，水溫27 ℃左右。實(shí)驗(yàn)時(shí)間為2019年10月18～20日。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

使用高質(zhì)量濃度丁香酚在靜水條件下對(duì)體質(zhì)量接近的花鱸幼魚(yú)展開(kāi)麻醉預(yù)試驗(yàn)。麻醉實(shí)驗(yàn)前花鱸幼魚(yú)停食24 h。加入麻醉劑的實(shí)驗(yàn)組有10尾魚(yú)，每尾魚(yú)在操作過(guò)程中被單獨(dú)觀察并只用1次，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中重復(fù)5尾魚(yú)需要更換新鮮水體。麻醉試驗(yàn)開(kāi)始1 h以內(nèi)，將不能進(jìn)入更深麻醉狀態(tài)或停止呼吸的魚(yú)轉(zhuǎn)入復(fù)蘇桶中至恢復(fù)原來(lái)狀態(tài)。參考Hikasa等[8]以及Mcfarland和Klontz等[9]在研究中的標(biāo)準(zhǔn)且結(jié)合花鱸幼魚(yú)的實(shí)際情況，將試驗(yàn)的麻醉階段分為 A0～A4 5個(gè)等級(jí)，復(fù)蘇階段被劃分為R1～R4 4個(gè)階段，具體劃分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1。

1.2.1各濃度丁香酚對(duì)花鱸幼魚(yú)麻醉的影響麻醉試驗(yàn)魚(yú)的平均體質(zhì)量為（110.3±30.67）g，實(shí)驗(yàn)組均設(shè)3個(gè)平行，每個(gè)平行組10尾花鱸幼魚(yú)。試驗(yàn)中丁香酚質(zhì)量濃度為：20、25、30、40、50、60、80 mg/L和100 mg/L，試驗(yàn)過(guò)程中記錄花鱸的麻醉時(shí)間和復(fù)蘇時(shí)間。試驗(yàn)結(jié)束后在海水中暫養(yǎng)3天，觀察記錄成活率。

1.2.2丁香酚對(duì)花鱸幼魚(yú)呼吸頻率的影響試驗(yàn)中的花鱸幼魚(yú)為45尾，隨機(jī)平均分至9個(gè)組中，分別放入丁香酚質(zhì)量濃度為 20、30、40、50、60、80 mg/L和 100 mg/L的水體中，測(cè)定其 10～300 s內(nèi)鰓蓋的張合次數(shù)。幼魚(yú)在深度麻醉后迅速撈出并轉(zhuǎn)至清水復(fù)蘇，記錄試驗(yàn)中花鱸的復(fù)蘇尾數(shù)和死亡尾數(shù)。

1.2.3空氣暴露時(shí)間對(duì)深度麻醉魚(yú)體復(fù)蘇的影響花鱸幼魚(yú)在質(zhì)量濃度 50 mg/L深度麻醉，在空氣中暴露 2、4、6、8、10、15、20、25、30、35、40和45 min，隨后迅速轉(zhuǎn)至純海水中進(jìn)行復(fù)蘇，記錄花鱸幼魚(yú)的復(fù)蘇時(shí)間、復(fù)蘇數(shù)以及死亡數(shù)。

1.2.4數(shù)據(jù)分析通過(guò)GraphPad Prism 8和Excel 2016等軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，用Duncan's 法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行多重比較，組間差異顯著時(shí)P<0.05。

2結(jié)果與分析

2.1花鱸幼魚(yú)在不同質(zhì)量濃度丁香酚處理下麻醉效果

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果記錄，丁香酚濃度為20 mg/L時(shí)，花鱸幼魚(yú)無(wú)法進(jìn)入深度麻醉。丁香酚濃度在25～100 mg/L范圍中，隨著丁香酚質(zhì)量濃度的增加，花鱸進(jìn)入麻醉的時(shí)間逐漸遞減，但復(fù)蘇時(shí)間卻逐漸遞增。麻醉時(shí)間無(wú)明顯變化時(shí)（P>0.05） ，其質(zhì)量濃度為50、60、80 mg/L。在質(zhì)量濃度為50、60 mg/L時(shí)，復(fù)蘇時(shí)間無(wú)明顯變化（P>005）。復(fù)蘇率均為100%，3 d后死亡率為0。見(jiàn)圖1。

2.2花鱸幼魚(yú)在不同濃度丁香酚處理下的呼吸頻率

在5 min之內(nèi)，在20 mg/L和30 mg/L的丁香酚麻醉組，鱸魚(yú)呼吸頻率變化趨勢(shì)相似且均未停止呼吸。當(dāng)丁香酚質(zhì)量濃度為 40 mg/L和50 mg/L時(shí)，花鱸90秒進(jìn)入深度麻醉A4期;質(zhì)量濃度為 60、80 mg/L和100 mg/L時(shí)，40秒左右進(jìn)入深度麻醉A4期;隨后呼吸頻率降低為0。見(jiàn)圖2。

2.3空氣中的暴露時(shí)長(zhǎng)對(duì)深度麻醉花鱸幼魚(yú)復(fù)蘇的影響

在 0～40 min 時(shí)間內(nèi)，隨著魚(yú)體在空氣中暴露時(shí)長(zhǎng)增加，花鱸幼魚(yú)復(fù)蘇時(shí)間依次遞增，空氣中暴露0～8 min內(nèi)、10～30 min內(nèi)以及35～40 min內(nèi)，復(fù)蘇時(shí)間差異不顯著（P>0.05）?？諝庵斜┞?0 min復(fù)蘇時(shí)間較之前顯著增加（P<005）;空氣中暴露35 min復(fù)蘇時(shí)間也出現(xiàn)了陡增;暴露時(shí)間小于30 min花鱸魚(yú)存活率100%， 當(dāng)時(shí)間增加至35，40和45 min 時(shí)，復(fù)蘇率分別為66 %，33%和0。見(jiàn)圖3、表2。

同列數(shù)中具同小寫(xiě)字母則意味組間無(wú)顯著差異，具不同小寫(xiě)字母的表示組間差異顯著（P<0.05）。

3討論

3.1丁香酚對(duì)花鱸幼魚(yú)麻醉的有效質(zhì)量濃度

中國(guó)作為世界上最大水產(chǎn)養(yǎng)殖國(guó)，在水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)以及科研活動(dòng)過(guò)程中，麻醉劑被廣泛使用并且起重要作用。約有數(shù)十種魚(yú)類麻醉劑被熟知和使用，包括日常使用的丁香酚等[10]。麻醉劑在現(xiàn)代水產(chǎn)養(yǎng)殖和科研動(dòng)物福利方面發(fā)揮重要作用。麻醉劑能夠使試驗(yàn)和生產(chǎn)中魚(yú)體保持鎮(zhèn)靜，緩解各種人為脅迫所帶來(lái)的不良應(yīng)激反應(yīng)，科學(xué)合理使用麻醉劑對(duì)于高效順利完成各種工作極其重要;此外，在魚(yú)類的生產(chǎn)運(yùn)輸過(guò)程中使用麻醉劑可以降低魚(yú)體的新陳代謝，減少應(yīng)激帶來(lái)的傷害和機(jī)體能量消耗，提高運(yùn)輸過(guò)程中魚(yú)的成活率，從而有效減少成本。近些年，丁香酚由于具有市場(chǎng)價(jià)格優(yōu)越，麻醉效果高且使用較安全的特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)行業(yè)。

本研究中，隨著丁香酚質(zhì)量濃度的升高，實(shí)驗(yàn)花鱸幼魚(yú)進(jìn)入麻醉時(shí)間縮短，其復(fù)蘇至正常狀態(tài)的時(shí)間延長(zhǎng)。這與丁香酚對(duì)蘇氏圓腹魚(yú)芒Pangasius sutchi、長(zhǎng)薄鰍Leptobotia elongat和日本黃姑魚(yú)Nibea japonica等麻醉效果的研究結(jié)果呈現(xiàn)一致[11-13]。本階段結(jié)果顯示丁香酚質(zhì)量濃度為25～100 mg/L的麻醉液均可使花鱸幼魚(yú)進(jìn)入麻醉階段，并且能夠完全復(fù)蘇。同時(shí)，Marking 等[14]認(rèn)為理想麻醉劑的標(biāo)準(zhǔn)是180 s內(nèi)進(jìn)入麻醉、并且300 s秒內(nèi)復(fù)蘇，因此，40～60 mg /L 的丁香酚麻醉液是花鱸幼魚(yú)的理想麻醉濃度區(qū)間，此研究結(jié)果同丁香酚對(duì)長(zhǎng)薄鰍幼魚(yú)的麻醉試驗(yàn)。此外，魚(yú)體規(guī)格、水溫和水質(zhì)等眾多因素也會(huì)影響麻醉效果。

3.2丁香酚對(duì)花鱸幼魚(yú)呼吸頻率的影響

不同麻醉程度下，魚(yú)的呼吸頻率受影響且呈現(xiàn)差異化。麻醉試驗(yàn)中藥物先進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)再進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，使魚(yú)行為能力和呼吸頻率均出現(xiàn)顯著變化。低濃度的丁香酚影響了花鱸幼魚(yú)的運(yùn)動(dòng)狀態(tài)和感覺(jué)，試驗(yàn)前期花鱸呼吸頻率并無(wú)太大變化。相反，高濃度丁香酚明顯降低了魚(yú)的呼吸頻率。魚(yú)呼吸中樞麻醉對(duì)丁香酚有更高濃度的閾值。試驗(yàn)觀察顯示，呼吸頻率降低的階段魚(yú)基本處在深度麻醉的過(guò)程（A3～A4）中，此階段花鱸魚(yú)體的呼吸中樞可能受到了抑制。本研究表明，各質(zhì)量濃度的丁香酚處理下的花鱸幼魚(yú)呼吸頻率于后期均表現(xiàn)為下降的趨勢(shì)，同鱖Siniperca chuatsi、長(zhǎng)薄鰍Leptobotia elongate，Bleeker、圓斑星鰈Verasper variegates、鯉Cyprinus carpio等[11，15-17]的研究結(jié)果一致，且隨著丁香酚質(zhì)量濃度的不斷升高，花鱸呼吸頻率下降速度越來(lái)越快。當(dāng)麻醉劑濃度 ≤30 mg/L時(shí)，花鱸幼魚(yú)呼吸頻率呈漸變趨勢(shì)下降，后期趨于穩(wěn)定;而丁香酚濃度 ≥40 mg/L時(shí)，試驗(yàn)花鱸幼魚(yú)呼吸頻率迅速下降，進(jìn)入休克期;因此，呼吸頻率受麻醉藥物影響較大。

3.3空氣中暴露時(shí)間對(duì)花鱸幼魚(yú)復(fù)蘇的影響

魚(yú)體在空氣中暴露常會(huì)出現(xiàn)在科研和生產(chǎn)過(guò)程中。探索深度麻醉的花鱸魚(yú)體復(fù)蘇情況與空氣中暴露時(shí)間長(zhǎng)短的關(guān)系時(shí)，對(duì)于活體花鱸幼魚(yú)無(wú)水操作具有重要的參考價(jià)值和指導(dǎo)意義。本研究中空氣暴露后復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)的丁香酚質(zhì)量濃度為50 mg/L，隨著暴露時(shí)間的增加而復(fù)蘇所用的時(shí)間也增加，這與丁香酚對(duì)鯽魚(yú) Carassius auratus的[18]麻醉結(jié)果相反，但與丁香酚對(duì)大黃魚(yú)Pseudosciaena crocea[19]和暗紋東方鲀Takifugu obscurus幼魚(yú)[20]的結(jié)果相同，極有可能是因?yàn)轸~(yú)種類不同所導(dǎo)致，具體差異有待日后進(jìn)一步研究和探索。同時(shí)暴露時(shí)間在30 min內(nèi)，花鱸幼魚(yú)復(fù)蘇率為100%。當(dāng)暴露時(shí)間增加至35，40和45 min 時(shí)，復(fù)蘇率降低至66 %，33%和0，即此時(shí)花鱸幼魚(yú)死亡率分別為33%，67%和100%。因此，麻醉后對(duì)花鱸幼魚(yú)進(jìn)行各種離水操作時(shí)，其離水時(shí)間不應(yīng)該超過(guò)30 min，此時(shí)間段內(nèi)可確?；|幼魚(yú)在操作中的安全。

本研究為花鱸資源調(diào)查、人工試驗(yàn)操作及運(yùn)輸提供了有效的理論參考。此外，仍然有待進(jìn)一步開(kāi)展丁香酚作為麻醉劑在不同目的（運(yùn)輸、稱重、采卵等） 、不同物種和不同規(guī)格水產(chǎn)動(dòng)物等方面差異的試驗(yàn)研究。

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Anesthetic Effect of Eugenol on Lateolabrax maculatus

YU Wei1，2，WU Jinxi1，3， LIN Heizhao1，2，WEN Guoliang1，2，CAO Yucheng1，2，

HUANG Xiaolin1，2，HUANG Zhong1，2，YANG Yukai1，2，LI Tao1，2，ZHAO Wang1，2

（1.Key Laboratory of South China Sea Fishery Resources Exploitation & Utilization，Ministry of Agriculture and Rural Affairs，

South China Sea Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences，Guangzhou，510300，China;

2.Shenzhen Base of South China Sea Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences，Shenzhen，518120，China;

3.College of Fisheries，Guangdong Ocean University，Zhanjiang，524088，China）

Abstract：In order to study the anesthetic effect of eugenol on juvenile Lateolabrax maculatus，fish with different body weight of （110.3±30.67） g were exposed to different mass concentrations of eugenol （20、25、30、40、50、60、80 mg/L and 100 mg/L） at water temperature of 27 ℃ by hydrostatic method.The concentration of 25～100 mg/L of eugenol could make L.maculatus into the anesthesia period，the anesthesia concentration and the average time into anesthesia was negatively correlated，the concentration of anesthesia and the average recovery time was positively correlated.When the mass concentration of eugenol was 50 mg/L，the anesthetic effect was better.20 mg/L eugenol had no significant effect on the respiratory rate of the fish.When the mass concentration reached 40～100 mg/L，the fish from the anaesthesia stage （A3） turned into the deep anaesthesia stage （A4），and the respiratory rate rapidly decreased.After anaesthesia，the L.maculatus was exposed in the air，and the exposure time was positively correlated with the recovery time.The recovery rate within 2～30 min exposure was 100%.When the time increased to 35，40 and 45 min，the recovery rate decreased to 66 %，33% and 0.And if the exposure time is more than 20 minutes， the L.maculatus can only reach the recovery period R3.Therefore，50 mg/L eugenol anaesthetic solution is the ideal anaesthetic concentration for juvenile L.maculatus.

Key words：eugenol;Lateolabrax maculatus;juvenile fish;anesthesia（收稿日期：2020-04-08）

基金項(xiàng)目：中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金資助（2018ZD01）;深圳市科技計(jì)劃知識(shí)創(chuàng)新基礎(chǔ)研究項(xiàng)目（編號(hào)：JCYJ 20170817103947002）;深圳市大鵬新區(qū)科技創(chuàng)新和產(chǎn)業(yè)發(fā)展專項(xiàng)資金資助項(xiàng)目（編號(hào)：PT202001-21）;;廣東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)專項(xiàng)資金（編號(hào)：2019KJ149， 2019KJ143）。

作者簡(jiǎn)介：虞為（1986-），男，助理研究員，研究方向：動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)研究。E-mail：540749772@qq.com。

通信作者：林黑著（1965-），男，博士生導(dǎo)師，研究方向：動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)研究。E-mail：linheizhao@163.com。DOI：10.3969/j.issn.1004-6755.2020.04.002