郗匯聰，陳 礴，候海文

(青海省心腦血管病?？漆t(yī)院冠心病一科，青海 西寧810000 )

急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)是指心肌持續(xù)嚴(yán)重缺血而導(dǎo)致的心肌細(xì)胞壞死，多見于中老年患者，預(yù)后較差[1]。目前，多采用心肌損傷標(biāo)志物對(duì)AMI進(jìn)行早期診斷[2]。然而，現(xiàn)應(yīng)用廣泛的心肌損傷標(biāo)志物存在組織特異性差、釋放遲緩、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)等不足，不利于AMI的早期診斷和梗死后再梗死診斷[3]。因此，尋找靈敏度及特異度高、釋放時(shí)間早、代謝速率快的心肌損傷標(biāo)志物成為臨床研究的熱點(diǎn)[4]。血清心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(heart type-fatty acid binding protein,H-FABP)、微小RNA-499(microRNA-499，miRNA-499)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的新型心肌損傷標(biāo)志物，具有較高的靈敏度和特異度[5-6]。本研究通過比較分析不同時(shí)間段H-FABP及miRNA-499變化情況，比較二者單獨(dú)或聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度、特異度等情況，以探討H-FABP及miRNA-499聯(lián)合檢測(cè)在AMI早期診斷中的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2015年12月至2017年12月因胸痛急性發(fā)作來(lái)我院就診的190例疑似AMI患者為研究對(duì)象，所有患者按照胸痛發(fā)作時(shí)間分為<4 h組(50例)，4～8 h組(55例)，8～12 h組(45例)，>12 h組(40例)。最后確診為83例患者確診為AMI，107例患者為非AMI。所有患者均按照2001年《急性心肌梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)和指南》進(jìn)行診斷[7]與分組，AMI均經(jīng)臨床、心電圖及冠狀動(dòng)脈造影證實(shí)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①嚴(yán)重肝、腦、肺、腎疾病患者；②嚴(yán)重感染者；③其他重要臟器疾病患者。

1.2 檢測(cè)方法

所有患者入院后采集其外周靜脈血5 mL，以3 000 r/min的速度離心12 min，采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測(cè)血漿中miR-499的表達(dá)，利用miRNeasy RNA Isolation試劑盒(購(gòu)自Qiagen公司)提取血漿總RNA，然后采用的Taq-Man miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒(購(gòu)自Applied BioSystems公司)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，采用北京百奧萊博有限公司提供的BTN131042型miRNA熒光定量RT-PCR檢測(cè)試劑盒測(cè)定miRNA-499含量，標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參為秀麗桿線蟲miRNA(cel-miR-39)。每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)量3次取平均值，應(yīng)用2-ΔΔCt法計(jì)算miR-499的相對(duì)表達(dá)量。H-FABP含量用基蛋生物科技股份有限公司提供的FIA8000免疫定量分析儀及配套試劑盒測(cè)定。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)(參照試劑盒陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn))：H-FABP>10 ng/mL，miRNA-499相對(duì)表達(dá)量>1.0。聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，結(jié)果采用并聯(lián)法判定，兩項(xiàng)指標(biāo)中任何一項(xiàng)陽(yáng)性即為陽(yáng)性，兩項(xiàng)指標(biāo)均為陰性即為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 24.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，行配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以例百分?jǐn)?shù)(%)表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，當(dāng)P<0.05時(shí)表示差異具有顯著性意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同時(shí)間段H-FABP、miRNA-499指標(biāo)含量

H-FABP含量于4～8 h開始升高，8～12 h達(dá)到峰值后逐漸回落，miRNA-499含量于4 h開始升高，4～8 h開達(dá)到峰值后逐漸回落，兩項(xiàng)指標(biāo)均于12 h后回歸下降，見表1。

表1 H-FABP、miRNA-499指標(biāo)含量不同時(shí)間段對(duì)比

與<4 h組相比，aP<0.05；與4～8 h組相比，bP<0.05；與8～12 h組相比，cP<0.05

2.2 H-FABP、miRNA-499定性檢測(cè)結(jié)果

AMI與非AMI的H-FABP、miRNA-499單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度分別為59.49%、56.82%、64.52%，特異度分別為67.56%、67.65%、66.41%，見表2。

表2 H-FABP、miRNA-499定性檢測(cè)結(jié)果比較

2.3 H-FABP、miRNA-499敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值比較

相比于單獨(dú)檢測(cè)，H-FABP聯(lián)合miRNA-499檢測(cè)AMI靈敏度及陰性預(yù)測(cè)值均顯著提高(P<0.05)，見表3。

3 討 論

急性心肌梗死一種常見的心內(nèi)科急癥，患者多有胸部壓榨樣疼痛、胸悶等癥狀，癥狀不典型易與主動(dòng)脈夾層動(dòng)脈瘤、肺栓塞等疾病相混淆。AMI多由冠狀動(dòng)脈急性、持續(xù)性缺血缺氧所引起，若不及時(shí)予以處理，預(yù)后較差[7]。臨床診斷多依賴于心電圖及血清心肌損傷標(biāo)志物[8]。然而，AMI早期患者心電圖可無(wú)特異性表現(xiàn)，肌鈣蛋白I(cTnI)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)等血清心肌損傷標(biāo)志物存在組織特異性差、釋放遲緩、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)等不足，不利于急性心肌梗死的早期診斷[9]。近年來(lái)，臨床研究證實(shí)H-FABP及miRNA-499可在AMI患者發(fā)病的初期即明顯升高，但目前的臨床研究多集中于H-FABP及miRNA-499在AMI患者中的單項(xiàng)檢測(cè)價(jià)值，而對(duì)于H-FABP及miRNA-499聯(lián)合檢測(cè)在AMI患者早期診斷中的價(jià)值研究卻鮮有報(bào)道[10]。

表3 H-FABP、miRNA-499敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值比較

H-FABP是一種存在于心肌細(xì)胞內(nèi)的小分子脂溶性蛋白，具有較高的組織特異性[11]。在急性心肌梗死發(fā)生時(shí)，由于心肌細(xì)胞持續(xù)嚴(yán)重缺血、缺氧，細(xì)胞膜通透性增加，H-FABP可迅速通過細(xì)胞膜擴(kuò)散至血液中，從而起到對(duì)急性心肌梗死的早期預(yù)警作用[12]。本研究顯示，H-FABP在0～4 h開始上升，4～8 h達(dá)到峰值，然后逐漸回落，并于12 h后回歸正常，表明H-FABP可在心肌梗死發(fā)生的早期即有明顯升高、機(jī)體代謝周期較短，符合急性心肌梗死早期診斷要求，具有臨床應(yīng)用價(jià)值。

微小RNA是由21～25個(gè)核苷酸構(gòu)成的小分子RNA[13]。研究發(fā)現(xiàn)，心肌細(xì)胞可特異性表達(dá)miRNA-499，并存在于心肌細(xì)胞，幾乎不存在于血液中[14]。在急性心肌梗死發(fā)生時(shí)，由于心肌細(xì)胞持續(xù)嚴(yán)重缺血、缺氧，細(xì)胞膜通透性增加，miRNA-499可迅速通過細(xì)胞膜擴(kuò)散至血液中，從而起到對(duì)急性心肌梗死的早期預(yù)警作用[15-16]。本研究結(jié)果顯示，miRNA-499含量在AMI發(fā)病后4 h開始升高，4～8 h開達(dá)到峰值后逐漸回落，表明miRNA-499可在AMI發(fā)病后短時(shí)間內(nèi)迅速升高，其在機(jī)體代謝周期與H-FABP相似，相比于單獨(dú)檢測(cè)，聯(lián)合檢測(cè)H-FABP和miRNA-499能顯著提高預(yù)測(cè)AMI的靈敏度。

綜述所述，H-FABP、miRNA-499均可用于AMI的早期診斷，兩者聯(lián)合檢測(cè)可顯著提高AMI診斷的靈敏度，具有較高的臨床推廣價(jià)值。