方 真, 曲 栗, 古淑青*, 陳柔含, 李 優(yōu), 鄧曉軍, 郭德華, 馮 峰

(1. 上海海關(guān)動(dòng)植物與食品檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心, 上海 200135; 2. 上海大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院食品工程系, 上海 200436; 3. 中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院, 北京 100176)

真菌毒素是一種由產(chǎn)毒絲狀真菌在一定環(huán)境條件下產(chǎn)生的具有毒性作用的次級(jí)代謝產(chǎn)物[1],易污染農(nóng)產(chǎn)品、食品和中藥材等植物源性產(chǎn)品。目前已知的真菌毒素超過(guò)300多種,其中大約有30種易對(duì)人體健康產(chǎn)生嚴(yán)重威脅,包括黃曲霉毒素(AFT)、赭曲霉毒素A(OTA)和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)等,過(guò)量攝入受污染的食品會(huì)導(dǎo)致肝腎功能損壞、致癌、致畸,或誘發(fā)免疫抑制性疾病[2,3]。隨著真菌毒素風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工作的不斷深入,許多地區(qū)和國(guó)家都對(duì)真菌毒素的含量進(jìn)行了強(qiáng)制性規(guī)定。我國(guó)GB 2761-2017《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素限量》中對(duì)上述多種真菌毒素最為嚴(yán)格的限量為5 μg/kg,而歐盟等國(guó)家則為2 μg/kg。

目前食品中真菌毒素的檢測(cè)方法主要有以酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法[4]和薄層色譜法[5]為主的定性和半定量檢測(cè)方法,以及以毛細(xì)管電泳法[6]、液相色譜法[7]為主的定量分析檢測(cè)方法。這些傳統(tǒng)檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單,成本低廉,但定性干擾大,定量靈敏度不足,且只能一次實(shí)現(xiàn)一種或一類真菌毒素的定性和定量分析,無(wú)法滿足實(shí)際樣品中多種痕量真菌毒素污染物同時(shí)檢測(cè)的需求。近年來(lái),隨著質(zhì)譜技術(shù)的快速發(fā)展,高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)在檢測(cè)毒素方面的優(yōu)勢(shì)逐漸顯現(xiàn)[8]。HPLC-MS/MS結(jié)合了色譜的分離能力與質(zhì)譜的分子確證功能,兼具高靈敏與高特異性的優(yōu)點(diǎn),是同時(shí)檢測(cè)多種毒素的理想方法,近年來(lái)被廣泛應(yīng)用于不同樣品中真菌毒素的定性、定量分析[8,9]。

在基于HPLC-MS/MS的檢測(cè)工作中,樣品前處理是關(guān)鍵環(huán)節(jié)。真菌毒素檢測(cè)的前處理過(guò)程通常包括萃取和凈化兩個(gè)步驟。加速溶劑萃取(accelerated solvent extraction, ASE)是近年來(lái)新興的一種萃取技術(shù),在較高的溫度和壓力下,利用一定配比的有機(jī)溶劑對(duì)固體樣品進(jìn)行萃取[10]。ASE不僅能夠提高目標(biāo)化合物的萃取效率,而且能夠減少萃取溶劑的使用量,縮短萃取時(shí)間。QuEChERS凈化方法是近年來(lái)最新發(fā)展起來(lái)的一種主要用于農(nóng)殘檢測(cè)的前處理方法[11],選擇性使用多種混合凈化填料組合可以高效地去除多種雜質(zhì)。QuEChERS具備高效、簡(jiǎn)便、綠色等優(yōu)點(diǎn),近年來(lái)廣泛應(yīng)用于各檢測(cè)領(lǐng)域,也包括真菌毒素的分析[12-14]。將ASE和QuEChERS聯(lián)合使用,既能夠提高目標(biāo)化合物的萃取效率,又滿足了前處理操作簡(jiǎn)便、快速的要求[15]。但是,目前還未見(jiàn)結(jié)合兩種技術(shù)應(yīng)用于藥食同源產(chǎn)品中多種真菌毒素檢測(cè)的報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)采用加速溶劑萃取結(jié)合QuEChERS方法對(duì)藥食同源樣品中16種真菌毒素進(jìn)行萃取和凈化,采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行測(cè)定。該方法操作簡(jiǎn)單,重復(fù)性好,靈敏度高,可用于藥食同源產(chǎn)品中多種真菌毒素的快速篩查和定量檢測(cè)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料

Nexera X2液相色譜儀(日本Shimadzu公司); QTrap 6500三重四極桿-線性離子阱復(fù)合質(zhì)譜系統(tǒng)(美國(guó)AB Sciex公司); Allegra X-22R離心機(jī)(美國(guó)Beckman Coulter公司); ASE 350加速溶劑萃取儀(美國(guó)Thermo Fisher公司); R-215旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士Buchi公司); N-EVAPTM112氮吹儀(美國(guó)Organomation Associates公司)。所有實(shí)驗(yàn)室用水均由Milli-Q超純水系統(tǒng)(美國(guó)Millipore公司)制得。

16種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品:DON(CAS號(hào):51481-10-8,純度≥99.0% )、玉米赤霉烯酮(ZEN, CAS號(hào):17924-92-4,純度≥99.9% )、3-乙?；撗跹└牭毒┐?3-AcDON, CAS號(hào):50722-38-8,純度≥99.0% )、15-乙?；撗跹└牭毒┐?15-AcDON, CAS號(hào):88337-96-6,純度≥99.0% )、黃曲霉毒素B1(AFB1, CAS號(hào):1162-65-8,純度≥99.0% )、黃曲霉毒素B2(AFB2, CAS號(hào):7220-81-7,純度≥99.9% )、黃曲霉毒素G1(AFG1, CAS號(hào):1165-65-8,純度≥99.0% )、黃曲霉毒素G2(AFG2, CAS號(hào):7241-98-7,純度≥98.3% )、伏馬毒素B1(FB1, CAS號(hào):116355-83-0,純度≥99.7% )、伏馬毒素B2(FB2, CAS號(hào):116355-84-1,純度≥99.9% )、OTA(CAS號(hào):303-47-9,純度≥99.9% )、赭曲霉毒素B(OTB, CAS號(hào):4825-86-9,純度≥99.0% )、疣孢青霉原(VER, CAS號(hào):12771-72-1,純度≥98.0% )、雜色曲霉毒素(SMC, CAS號(hào):10048-13-2,純度≥99.9% )、T-2毒素(T-2, CAS號(hào):21259-20-1,純度≥98.2% )、HT-2毒素(HT-2, CAS號(hào):26934-87-2,純度≥99.0% )、黃曲霉毒素B1內(nèi)標(biāo)(U-[13C17]-AFB1, CAS號(hào):1217449-45-0, 0.5 mg/L)、伏馬毒素B1內(nèi)標(biāo)(U-[13C34]-FB1, CAS號(hào):1217458-62-2, 25 mg/L)均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司;胺丙基鍵合硅膠(-NH2)、乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)、C18均購(gòu)自上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司;甲酸(色譜純,美國(guó)Fluka公司);乙酸(分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);乙腈、甲醇(色譜純,美國(guó)Thermo Fisher公司)。山銀花、葛根、沙棘樣品均為市售。

1.2 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:分別準(zhǔn)確稱取適量各標(biāo)準(zhǔn)品,用乙腈-甲醇(3∶2, v/v)配制成含各真菌毒素100 mg/L 的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,于-20 ℃下避光保存。

內(nèi)標(biāo)工作液:用乙腈將U-[13C17]-AFB1配制成質(zhì)量濃度為100 μg/L 的同位素內(nèi)標(biāo)工作液,U-[13C34]-FB1配制成質(zhì)量濃度為250 μg/L 的同位素內(nèi)標(biāo)工作液,于-20 ℃下避光保存。

基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:用空白樣品萃取液將混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制成適當(dāng)濃度的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,并加入同位素內(nèi)標(biāo)溶液,現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.3 樣品前處理

1.3.1 萃取

準(zhǔn)確稱取粉碎過(guò)篩后的樣品5.00 g,加入黃曲霉素B1同位素內(nèi)標(biāo)工作液和伏馬毒素B1同位素內(nèi)標(biāo)工作液各400 μL,然后加入1 g氯化鈉,并與適量硅藻土混勻后,移入34 mL不銹鋼樣品萃取池中進(jìn)行加速溶劑萃取。萃取試劑為乙腈-水-乙酸(85∶12∶3, v/v/v),萃取溫度75 ℃,加熱時(shí)間5 min,靜態(tài)萃取時(shí)間5 min,循環(huán)2次,沖洗體積為60%萃取池體積,萃取后氮?dú)獯祾?00 s,收集萃取液于60 mL收集瓶中。最后將萃取液轉(zhuǎn)移至雞心瓶中,于45 ℃水浴中減壓濃縮至近干,加入20 mL乙腈-水(85∶15, v/v)充分溶解殘?jiān)?待凈化。

1.3.2 凈化

取上述待溶液5 mL于離心管中,加入0.6 g -NH2、0.4 g PSA、0.25 g C18,渦旋振蕩5 min。以 10 000 r/min 離心5 min,吸取1 mL上清液于室溫氮吹至近干,加入1 mL含0.1%(v/v)甲酸的乙腈-水(3∶97, v/v)復(fù)溶,過(guò)0.22 μm微孔濾膜,待上機(jī)。

1.4 分析條件

反相色譜柱:Kinetex XB-C18柱 (100 mm×3 mm, 2.6 μm,美國(guó)Phenomenex公司);柱溫:40 ℃;流動(dòng)相A為0.1%(v/v)甲酸水溶液(含5 mmol/L 乙酸銨), B為0.1%(v/v)甲酸乙腈溶液;流速:0.4 mL/min。梯度洗脫條件:0～0.5 min, 3%B; 0.5～1.0 min, 3%B～10%B; 1.0～6.0 min, 10%B～90%B; 6.0～7.5 min, 90%B; 7.5～7.6 min, 90%B～3%B; 7.6～9.0 min, 3%B。進(jìn)樣體積:10 μL。

離子源:電噴霧電離(ESI)源,采用正、負(fù)離子同時(shí)掃描模式;噴嘴電壓:5 500 V(+)/-4 500 V(-);毛細(xì)管溫度:600 ℃;氣簾氣壓力0.207 MPa;碰撞氣電壓強(qiáng)度:medium。16種真菌毒素的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理?xiàng)l件優(yōu)化

2.1.1 ASE條件優(yōu)化

16種真菌毒素的理化性質(zhì)差異較大,因此選擇一種兼容性好、萃取效率高的萃取溶劑尤為重要。本實(shí)驗(yàn)在現(xiàn)有文獻(xiàn)[16-18]報(bào)道的基礎(chǔ)上,分別用乙腈、乙腈-乙酸體系和乙腈-水-乙酸體系作為萃取溶劑對(duì)空白山銀花樣品進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)(見(jiàn)圖1)。在pH值相同的情況下,當(dāng)萃取試劑中含有適量水時(shí),大部分真菌毒素的萃取效率相比使用純乙腈時(shí)均有提高,這是因?yàn)樗軌蛟鰪?qiáng)乙腈的滲透能力,以便于萃取液滲透到基質(zhì)較為復(fù)雜的藥食同源性食品中,從而提高目標(biāo)物的萃取效率。此外,pH值對(duì)于部分酸敏感真菌毒素的萃取效率有較大影響,如DON、ZEN、OTA、FB1、FB2具有羧基基團(tuán),水溶性強(qiáng),對(duì)有機(jī)萃取溶劑的酸度有一定要求,因此降低萃取液的pH值能提高其穩(wěn)定性,增加萃取效率。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步對(duì)比了當(dāng)萃取液中含0% 、1% 、3% 和5%體積分?jǐn)?shù)的乙酸時(shí)的萃取效率。從圖1可以看出,隨著乙酸體積分?jǐn)?shù)的增加,部分真菌毒素的萃取效率有所增加,而當(dāng)萃取液中含有3%的乙酸時(shí)各目標(biāo)化合物的萃取效率相對(duì)較好。因此,實(shí)驗(yàn)選擇乙腈-水-乙酸(85∶12∶3, v/v/v)作為萃取試劑。

表 1 16種真菌毒素及兩種同位素內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜參數(shù)Table 1 MS parameters of the 16 mycotoxins and two isotopic internal standards

CE: collision energy; DP: declustering potential; * quantitative ion.

圖 1 萃取液對(duì)加標(biāo)山銀花樣品中16種真菌毒素萃取效率的影響Fig. 1 Effect of extraction solvents on the extraction efficiencies of the 16 mycotoxins spiked in the flos lonicerae samples

萃取溫度考察了55、75、85和95 ℃ 4個(gè)溫度點(diǎn)。溫度增加可以降低萃取溶劑的黏度,從而提高溶劑對(duì)基質(zhì)的浸潤(rùn)能力和對(duì)目標(biāo)物的溶解能力。但是溫度過(guò)高也可能導(dǎo)致目標(biāo)物產(chǎn)生不可預(yù)知的變化，從而影響最終的萃取效果。結(jié)果表明,當(dāng)萃取溫度為85 ℃和95 ℃時(shí),各類毒素的回收率都有所減少。綜合考率,本實(shí)驗(yàn)選擇75 ℃作為萃取溫度。

在循環(huán)次數(shù)上,循環(huán)2次與循環(huán)3次,結(jié)果沒(méi)有明顯的差異,為了減少樣品前處理的時(shí)間,選擇循環(huán)2次。

整個(gè)萃取過(guò)程大約用時(shí)20 min,得到的萃取液較為清澈,無(wú)需過(guò)濾直接進(jìn)行蒸發(fā)濃縮。

2.1.2 凈化填料的優(yōu)化

藥食同源性食品基質(zhì)較為復(fù)雜,且實(shí)驗(yàn)采用高溫高壓萃取方式,在萃取目標(biāo)物化合物的同時(shí)也會(huì)萃取樣品中其他干擾物,如蛋白質(zhì)、色素、脂質(zhì)和糖類等,因此凈化步驟對(duì)于結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要。凈化劑可以通過(guò)極性相互作用或非極性相互作用使目標(biāo)化合物和雜質(zhì)相互分離。本研究考察的凈化劑主要有C18、PSA、石墨化炭黑(GCB)、-NH2、氰丙基鍵合硅膠(-CN)、弗洛里硅土(Florisil)。在空白山銀花基質(zhì)中進(jìn)行添加回收試驗(yàn),各分析物的添加水平為10 μg/kg。分別考察了采用6種凈化劑單獨(dú)處理以及不同配比的凈化劑組合處理的凈化效果,比較各真菌毒素的回收率。結(jié)果表明,使用GCB時(shí),黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮回收率較低。因?yàn)镚CB對(duì)具有平面分子結(jié)構(gòu)的雜質(zhì)具有顯著的吸附作用[19],但目標(biāo)化合物中黃曲霉毒素等毒素具有平面結(jié)構(gòu)或不完全平面分子結(jié)構(gòu),因此GCB不適于本研究。含有氰丙基鍵合硅膠和胺丙基鍵合硅膠等活性基團(tuán)的凈化劑可通過(guò)氫鍵作用吸附極性物質(zhì)(脂肪酸和有機(jī)酸等),實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)-NH2能強(qiáng)烈吸附基質(zhì)中的極性色素,凈化非極性毒素。C18能夠吸附基質(zhì)中非極性物質(zhì),有效去除糖類,但凈化能力有限,加入PSA和-NH2后,各類真菌毒素的回收率都得到了提高,這與糖類、有機(jī)酸、脂肪酸等主要干擾物質(zhì)被去除后降低了基質(zhì)效應(yīng)的影響有關(guān)[20]。因此,本實(shí)驗(yàn)最終采用C18、PSA和-NH2協(xié)同凈化的方式,增強(qiáng)雜質(zhì)的凈化能力,降低離子抑制作用,提高方法的準(zhǔn)確度。

2.2 超高效液相色譜條件優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)考察了2種色譜柱(Waters, ACQUITY UPLC HSS T3 (100 mm×2.1 mm, 1.8 μm)和Phenomenex, Kinetex XB-C18 (100 mm×3 mm, 2.6 μm))對(duì)16種真菌毒素分離效果的影響。結(jié)果表明:使用T3柱時(shí),3-AcDON和15-AcDON這對(duì)同分異構(gòu)體無(wú)法達(dá)到基線分離,且峰形較差,響應(yīng)較低。而使用Phenomenex Kinetex XB-C18柱則能達(dá)到較好的分離效果。該柱內(nèi)徑和填料粒徑均較小,能夠獲得良好的分離度。

由于真菌毒素易溶于甲醇或乙腈,實(shí)驗(yàn)還分別考察了甲醇和乙腈作為強(qiáng)洗脫流動(dòng)相的洗脫效果。當(dāng)乙腈-水體系作為流動(dòng)相時(shí),在正、負(fù)兩種模式下的洗脫效果和響應(yīng)強(qiáng)度均好于甲醇-水體系,這有可能是因?yàn)樯贁?shù)待測(cè)物中含有乙酰氧基團(tuán),而此類化合物在甲醇中不穩(wěn)定。因此,實(shí)驗(yàn)選擇乙腈作為強(qiáng)洗脫流動(dòng)相。在流動(dòng)相中加入0.1%(v/v)的甲酸可以提高待測(cè)物在電噴霧電離、正離子模式中的離子化效率,提高靈敏度。當(dāng)使用0.1%(v/v)甲酸水和0.1%(v/v)甲酸乙腈進(jìn)行梯度洗脫時(shí),AFG2存在嚴(yán)重的拖尾現(xiàn)象,而在水相中加入少量的乙酸銨能消除這種現(xiàn)象。為了增大目標(biāo)化合物的響應(yīng)值并且改善峰形,實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步考察了不同濃度的乙酸銨對(duì)目標(biāo)化合物離子化效率的影響。結(jié)果表明,在水相中加入5 mmol/L 乙酸銨能夠最大限度增加目標(biāo)化合物的響應(yīng)值并改善峰形,而過(guò)高濃度的乙酸銨反而會(huì)降低目標(biāo)化合物的離子化效率。所以實(shí)驗(yàn)最終選擇含5 mmol/L 乙酸銨的0.1%(v/v)甲酸水溶液和0.1%(v/v)甲酸乙腈溶液作為流動(dòng)相。由于藥食同源性食品基質(zhì)較為復(fù)雜且分析物較多,實(shí)驗(yàn)選擇梯度洗脫進(jìn)行分析以達(dá)到縮短出峰時(shí)間和高效除去色譜柱中殘留雜質(zhì)的目的。

2.3 質(zhì)譜條件優(yōu)化

在優(yōu)化質(zhì)譜采集參數(shù)時(shí),同時(shí)考察了16種真菌毒素在正、負(fù)離子模式下的響應(yīng)值,發(fā)現(xiàn)除了ZEN在負(fù)模式下響應(yīng)較好,其余的15種目標(biāo)物均在正離子模式下響應(yīng)較好。除了T-2的母離子為[M+NH4]+峰,其余15種化合物在選定的分析條件下都產(chǎn)生[M+H]+峰。在MRM分析中選擇了離子豐度最高的子離子作為定量離子,離子豐度次高的作為定性離子,并且優(yōu)化了CE值和DP值,以獲得較高的響應(yīng)值。各化合物的提取離子流色譜圖見(jiàn)圖2。

圖 2 16種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品及同位素內(nèi)標(biāo)的提取離子流色譜圖Fig. 2 Extracted ion current chromatograms of the 16 mycotoxins and the isotope internal standards

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍及檢出限

由于AFB1和FB1的穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)試劑易獲得,實(shí)驗(yàn)中AFB1和FB1用內(nèi)標(biāo)法定量,其余毒素用外標(biāo)法定量。

在空白山銀花樣品基質(zhì)中添加目標(biāo)化合物,分別加入100 μL AFB1和FB1的同位素內(nèi)標(biāo)工作液,配制成系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。AFB1和FB1以其與同位素內(nèi)標(biāo)響應(yīng)峰面積之比為縱坐標(biāo)(Y′),其余14種化合物以峰面積(Y)為縱坐標(biāo),分別以對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度(X, μg/L)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以3倍和10倍信噪比(S/N)確定方法的檢出限(LOD)和定量限(LOQ)。

如表2所示,16種真菌毒素在各自的線性范圍內(nèi)線性良好,線性相關(guān)系數(shù)(r2)均大于0.99。16種真菌毒素的檢出限為0.008～0.3 μg/kg,定量限為0.03～1.0 μg/kg,遠(yuǎn)低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)真菌毒素限量檢測(cè)要求和歐盟、日本等國(guó)家規(guī)定的最大殘留量。

表 2 16種真菌毒素的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限Table 2 Linear ranges, linear equations, correlation coefficients (r2), LODs and LOQs of the 16 mycotoxins

Y: peak area;Y′: peak area ratio of the analyte to isotope internal standard;X: mass concentration, μg/L.

2.4.2 加標(biāo)回收率和精密度

分別用山銀花、葛根、沙棘空白樣品作為基質(zhì),添加3個(gè)不同水平的待測(cè)物,平行測(cè)定6次,計(jì)算回收率以及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD),結(jié)果見(jiàn)表3。可以看出,16種真菌毒素的平均回收率為70.8% ～118% ,使用內(nèi)標(biāo)校準(zhǔn)后,AFB1和FB1的回收率更高，可達(dá)90%以上；RSD為2.5% ～10.2% ,滿足檢測(cè)要求。

表 3 16種真菌毒素在3種基質(zhì)中的回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)Table 3 Recoveries and relative standard deviation (RSDs) of the 16 mycotoxins spiked in three matrices (n=6)

表 3 (續(xù))Table 3 (Continued)

2.5 實(shí)際樣品檢測(cè)

采用建立的方法分別對(duì)電商銷售的30個(gè)批次的山銀花、葛根和沙棘進(jìn)行16種真菌毒素的殘留量測(cè)定。

結(jié)果表明，1個(gè)批次的沙棘樣品和1個(gè)批次的葛根樣品被檢出含有AFB1,污染水平分別為3.59 μg/kg 和6.17 μg/kg。1個(gè)批次的沙棘樣品被檢出含有AFG2,污染水平高達(dá)11.7 μg/kg。1個(gè)批次的山銀花樣品被檢出含有OTA,污染水平為7.45 μg/kg。2個(gè)批次的沙棘樣品和1個(gè)批次的葛根樣品被檢出含有FB1,污染水平為52.6～96.9 μg/kg。其余真菌毒素均未檢出。

3 結(jié)論

本文建立了一種基于ASE和QuEChERS聯(lián)用的前處理技術(shù),結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時(shí)檢測(cè)藥食同源性食品中16種真菌毒素的檢測(cè)方法。與傳統(tǒng)方法相比,本方法減少了有機(jī)溶劑用量,縮短了檢測(cè)周期,提高了檢測(cè)靈敏度,檢出限、定量限遠(yuǎn)低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)真菌毒素限量檢測(cè)要求和歐盟、日本等國(guó)家規(guī)定的最大殘留量。方法學(xué)考察及實(shí)際樣品檢測(cè)證明,該方法具有實(shí)用性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便快速等優(yōu)點(diǎn),能夠滿足國(guó)內(nèi)外對(duì)植物源性藥食同源產(chǎn)品中多種真菌毒素的檢測(cè)要求。