蓋小君 王曉玲 郭龍宗 陳靜

摘? 要：為了解山東省煙臺地區(qū)J亞型禽白血病與網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥的流行情況，于2019年9～10月，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗對來自煙臺地區(qū)8個農(nóng)業(yè)縣的16個種雞場、20個商品代場和 16個散養(yǎng)雞群共940份血清樣本進(jìn)行檢測分析。結(jié)果顯示：有5個農(nóng)業(yè)縣檢測到J亞型禽白血病，抗體陽性率為2.9%;8個農(nóng)業(yè)縣全部檢測出禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥，抗體陽性率為43.9%，雙抗體陽性率為2.7%。此次調(diào)查為煙臺地區(qū)禽白血病的凈化及禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥的防控提供了數(shù)據(jù)支撐。

關(guān)鍵詞：煙臺地區(qū);J亞型禽白血病;禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥;血清流行病學(xué)

中圖分類號：S858.311.31+3???? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B???? 文章編號：1673-1085（2020）3-0053-04

禽白血病（Avian leucosis， AL）和禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥 （Reticuloendotheliosis， RE） 是禽的兩大腫瘤性疾病，均可以感染多種禽類，造成免疫器官損傷，導(dǎo)致嚴(yán)重的免疫抑制，給我國養(yǎng)禽業(yè)帶來了嚴(yán)重的損失[1]。禽白血病可分為A、B、C、D、E和J 6個亞群，其中J亞型是主要流行毒株[2]。J亞型禽白血病是由J 亞群禽白血病病毒 （avian leukosis virus of subgroup J，ALV-J）感染引起的一種傳染性骨髓細(xì)胞瘤疾病或髓細(xì)胞性白血病，可造成雞群免疫抑制、生長抑制，甚至造成髓細(xì)胞癌變。自1989年首次將ALV-J從商品肉雞分離以來[3]，一直不斷威脅著雞群的健康。RE是由網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒（Reticuloendotheliosis Virus， REV）引起的禽類的腫瘤性疾病，同ALV-J一樣，感染了REV的雞群均可產(chǎn)生嚴(yán)重免疫抑制，致使機(jī)體內(nèi)免疫應(yīng)答降低，造成對其他細(xì)菌性和病毒性疾病的易感性增強(qiáng)。ALV和REV既可通過種雞垂直傳播，也可水平傳播，是造成當(dāng)前養(yǎng)禽業(yè)生產(chǎn)水平降低的重要病毒性疾病。

北京、廣東、遼寧、吉林、山東和浙江等[1， 4， 8]等多個省市地區(qū)都報道過雞群中存在ALV和REV感染，表明這兩種疾病在我國普遍流行。煙臺市地處山東半島東部，山東半島三面環(huán)海，只有西與內(nèi)陸接壤，具有天然的動物疫病防控地理優(yōu)勢。家禽產(chǎn)業(yè)一直以來都是煙臺市傳統(tǒng)的優(yōu)勢畜牧產(chǎn)業(yè)，但是目前對于AL和RE最新流行情況鮮有調(diào)查報道。因此，為了解煙臺地區(qū)ALV-J亞型和REV的感染情況，我們于2019 年9～10月采集了煙臺市種雞場、商品代、散養(yǎng)雞群樣品，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗對ALV-J亞型和 REV感染情況進(jìn)行了血清流行病學(xué)調(diào)查分析，為ALV的凈化及REV的防控提供了數(shù)據(jù)支撐。

1? 材料與方法

1.1? 血清樣品來源? 來自全市所轄范圍內(nèi)8個農(nóng)業(yè)縣，每個縣隨機(jī)抽取2個父母代種雞場、 2～3個商品代場和2個散養(yǎng)雞群，每個種父母代雞場、商品代場、散養(yǎng)雞群分別隨機(jī)采集35份、15份和5份全血樣品并分離血清，最終共得到雞血清樣品940份，其中16個種雞場、20個商品代場和16個散養(yǎng)雞群樣品數(shù)量分別為 560份、300份和80份。

1.2? 樣品采集與制備? 每只雞均通過翅靜脈進(jìn)行無菌采血，將采集的全血37℃靜置2h待血清析出后，3000r/min常溫離心5min，將上清液吸到1.5mL無菌的離心管中后，置于-20℃冰箱中保存，備用待檢。

1.3? 檢測? ALV-J亞型ELISA抗體、REV抗體檢測試劑盒購自美國IDEXX公司。將試劑恢復(fù)至18～26℃，并將其振搖混勻后使用，樣品做500倍稀釋用?；静僮鞑襟E如下：

取出抗原包被板并標(biāo)記好被檢樣品的位置，在合適位置的兩孔中加入100μL不稀釋的陰、陽性對照;取100μL稀釋的被檢樣品加入相應(yīng)的孔中，在18～26℃條件下孵育30min;每孔加入約350μL的洗滌液進(jìn)行洗板，洗5次，并將孔內(nèi)液體完全吸干;每孔加入100μL的酶標(biāo)抗體，在26℃條件下孵育30min;每孔加入約350μL的洗滌液進(jìn)行洗板，洗5次，并將孔內(nèi)液體完全吸干;每孔加入100μL的酶標(biāo)抗體，在26℃條件下孵育30min，重復(fù)上述步驟一次;每孔加入100μLTMB底物溶液，在26℃條件下孵育15min;每孔加入100μL的終止液終止反應(yīng)，測定并記錄各孔于450nm波長的吸光值。

1.3? 數(shù)據(jù)分析? 若某一場（群）有一份樣品的ELISA檢測結(jié)果為陽性，則判定該場（群）為陽性場（群）。陽性率=（陽性樣品數(shù)/樣品總數(shù)）×品總數(shù)）。

2? 結(jié)果

2.1? 8個農(nóng)業(yè)縣的ALV-J和REV抗體檢測結(jié)果? 在8個農(nóng)業(yè)縣中，有5個農(nóng)業(yè)縣檢測出ALV-J抗體陽性，平均陽性率為2.9%;8個農(nóng)業(yè)縣全部檢測出REV抗體陽性，平均陽性率為43.9%;雙抗體陽性率為2.7%，見表1所示。表明ALV-J 亞型在煙臺雞群中感染率較低，而 REV在煙臺雞群中廣泛分布。

2.2? 不同代次的ALV-J和 REV抗體檢測結(jié)果? 各個種雞場、商品代場和散養(yǎng)雞群的REV抗體陽性率分別為45.4%、37.3%及58.8%，平均陽性率為43.9%（413/940）;ALV-J亞型的抗體陽性率分別為0.7%、4.3%及12.5%，平均陽性率為2.9%（27/940）;雙抗體陽性率分別為0.7%、3.7%及12.5%，平均陽性率為2.7%（25/940），見表2所示。

種雞場、商品代場和散養(yǎng)雞群的ALV-J、REV抗體陽性率分布情況見圖1、圖2。

由圖1可見，各陽性率區(qū)間種雞場、商品代場和散養(yǎng)雞群數(shù)量的分布情況顯示，ALV-J抗體陽性率為0%的種雞場、商品代場和散養(yǎng)雞群分別有14個、14個和10個，占比分別為87.5%（14/16）、70%（14/20）和62.5%（10/16）。

由圖2可見，各陽性率區(qū)間種雞場、商品代場和散養(yǎng)雞群數(shù)量的分布情況顯示，REV抗體陽性率高于50%的種雞場、商品代場和散養(yǎng)雞群分別有7個、7個和9個，占比分別為43.8%（7/16）、35%（7/20）和56.2%（9/16），其中抗體陽性率達(dá)100%的種雞場、商品代場和散養(yǎng)雞群分別有1個、1個和4個，占比分別為6.2%（1/16）、5%（1/20） 和25%（4/16）。

3? 討論

目前，沒有有效的藥物和疫苗治療、預(yù)防AL的發(fā)生，雞群中的抗體水平可以反應(yīng)出該病毒的感染狀態(tài)，防控該病的關(guān)鍵是通過病原及抗體檢測不斷剔除雞群中陽性雞，達(dá)到凈化種群的目的[5]。2019年，張倩報道通過2014～2016年在全國范圍內(nèi)監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，ALV-J對我國地方品種的感染性和致病性在不斷增強(qiáng)，且在祖代種雞群中ALV-J和ALV-A/B混合感染檢出率均在34%以上[6]。在山東省內(nèi)，劉麗平報道對8個祖代種雞場檢測發(fā)現(xiàn)有4個種雞場檢測出ALV-J的抗體陽性[7]。此次我們檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，煙臺市種雞場、商品代場和散養(yǎng)雞群的ALV-J的抗體陽性率分別為0.7%、4.3%及12.5%。主要原因可能是近幾年，煙臺市畜牧獸醫(yī)局制訂了《煙臺市種雞場禽白血病凈化方案》，要求種雞場對感染種雞進(jìn)行淘汰，從源頭上凈化禽白血病，減少損失。山東益生種畜禽股份有限公司（祖代肉種雞十八場）通過了“禽白血病凈化示范場”評估[6]，對煙臺白羽肉雞的凈化起到了積極的推動作用。在檢測的16個種雞場中，有2個種雞場檢測出ALV-J的抗體陽性，說明有ALV的存在或曾經(jīng)感染過ALV，需要進(jìn)一步對全群加強(qiáng)病毒抗原檢測，若有陽性及時淘汰。同時商品代和散養(yǎng)雞群的ALV-J感染較為嚴(yán)重，急需有關(guān)部門引起重視。

REV和ALV類似，即可垂直傳播也可水平傳染，與疫苗污染有很大的關(guān)系，但我國目前尚未對REV開展系統(tǒng)的監(jiān)測凈化工作，養(yǎng)殖場對REV的重視程度不夠，使REV的抗體陽性率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于ALV-J。通過檢測發(fā)現(xiàn)，煙臺市8個農(nóng)業(yè)縣全部檢測出REV抗體陽性，平均陽性率為43.9%，種雞場、商品代場和散養(yǎng)雞群REV抗體陽性率分別為45.4%、37.3%及58.8%，其中抗體陽性率達(dá)100%分別有1個、1個和4個，表明REV在煙臺雞群中廣泛分布，并且感染嚴(yán)重。本試驗檢測結(jié)果與鮑偉華報道的2017年在寧波市雞群中檢測出ALV-J抗體陽性率為21.5%、REV抗體陽性率為32.0%[8]相比，可能與家禽產(chǎn)業(yè)一直是煙臺市傳統(tǒng)的優(yōu)勢畜牧產(chǎn)業(yè)、進(jìn)口數(shù)量多、養(yǎng)殖密度大有關(guān)。

本次血清學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示煙臺市種雞場、商品代場和散養(yǎng)雞ALV-J和REV共感染的陽性率分別為0.7%、3.7%及12.5%，平均陽性率為2.7%。表明免疫抑制病已經(jīng)危害煙臺雞群的健康，會增加其它疫病的發(fā)生和治療難度，應(yīng)注意ALV-J和REV感染對疫苗免疫的抑制作用，建議規(guī)模場開展免疫抑制病的檢測，及時淘汰陽性雞，做到早檢測、早發(fā)現(xiàn)、凈化雞群，促進(jìn)煙臺市養(yǎng)禽業(yè)健康持續(xù)的發(fā)展。

參考文獻(xiàn)：

[1]? 沈清霞，任冬梅，丁紅雷，等.重慶市禽白血病及禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥的血清流行病學(xué)調(diào)查[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2014，（22）： 54-55.

[2]? 羅明星，周碧君，李永明，等.貴州省雞群中禽白血病病毒J亞群感染的調(diào)查[J].中國家禽，2009， 31（11）： 15-18.

[3]? 馬超鋒，趙云煥，連慧香，等.河南信陽土雞J亞群禽白血病血清流行病學(xué)調(diào)查[J].畜牧與獸醫(yī)， 2018， 50（4）： 116-119.

[4]? 李鑫，王紅寧，楊鑫，等.2012～2013年蛋雞J亞群禽白血病流行病學(xué)調(diào)查[J].四川大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2015， 52（4）： 932-936.

[5]? 崔治中，孫淑紅，趙鵬，等.對種雞場禽白血病凈化方案的建議[J].中國家禽， 2014， 36（1）：3-6.

[6]? 張倩，王傳彬，韓雪，等.2014～2016年祖代種雞場禽白血病的監(jiān)測與分析[J].中國獸醫(yī)科學(xué).2019，49（09）：1199-1206.

[7]? 劉麗平，張月，徐聰，等.山東省種雞場禽白血病血清學(xué)調(diào)查[J].家禽科學(xué)， 2019.8：46-48.

[8]? 鮑偉華，樊莉，盧黎明，等.浙江省寧波市部分雞場雞免疫抑制性疫病血清學(xué)調(diào)查[J].中國動物檢疫，2017， 34（1）： 29-31.

Serological Investigation of J-subtype Avian Leukosis and Avian Reticuloendotheliosis in Yantai area of Shandong Province in China

GAI Xiaojun1， WANG Xiaoling1， GUO Longzong2

（1. Yantai Animal Disease Prevention and Control Center， Yantai 264003， China;

2.Shandong Yisheng Animal and Poultry Breeding Company，Yantai 264003， China ）

Abstract：To investigate the prevalence of J-subtype avian leukosis and avian reticuloendotheliosis in Yantai， Shandong Province，a total of 940 serum samples were collected from16 breeding farms，20 commercial scale farms and 16 backyard flocks from 8 agricultural counties in Septemper to October 2019，and subjected to detection for antibody against J-subtype avian leukosis and avian reticuloendotheliosis by enzyme-linked immunosorbent assay.The results showed that J-subtype avian leukosis antibody positive samples were detected in 5 agricultural counties，and the averaged positive rate was 2.9%;avian reticuloendotheliosis antibody positive samples were detected in 8 agricultural counties，and the averaged positive rate was 43.9%;the positive rate of double antibody was 2.7%.The research could provide a basic data for further purification of avian leukemia and avian reticuloendotheliosis prevention and control in Yantai City.

Key words：Yantai area;J-subtype avian leukosis;Avian reticuloendotheliosis;Serological investigation

收稿日期：2020-03-20

作者簡介：蓋小君（1973.09-），男，碩士，主要從事動物疫病防控工作，E-mail：gaixj197309@sohu.com。

通訊作者：陳靜（1968-），研究員，山東省禽產(chǎn)業(yè)體系省綜合試驗站站長，主要從事動物疫病快速診斷、疑難病癥確診、疫情監(jiān)測和疫病普查、動物流行病學(xué)調(diào)查、實驗室管理、獸醫(yī)新技術(shù)培訓(xùn)與推廣及實用防治技術(shù)研究等工作，E-mail：1752058646@qq.com。