安冬

（日照市東港區(qū)濤雒鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心，山東日照276805）

1 布魯氏菌病抗體檢測(cè)方法

布魯氏菌病主要是通過(guò)布魯氏菌所引起的傳染病，具有人獸共患特點(diǎn)，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將其歸納為B 類動(dòng)物疫病之中，我國(guó)將其列入到二級(jí)動(dòng)物疫病。豬、牛、羊最易感染此病，犬與60 多種家禽、家畜、野生動(dòng)物易感性有所不同，主要是侵害生殖系統(tǒng)，易引發(fā)不孕、流產(chǎn)等。近幾年中，布魯氏菌病陽(yáng)性率逐漸升高，已成為重點(diǎn)防范病種。

本次主要使用虎紅平板凝集試驗(yàn)。由于培養(yǎng)布魯氏菌營(yíng)養(yǎng)條件苛刻，時(shí)間漫長(zhǎng)，因此診斷布魯氏菌病主要依據(jù)血清學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)。原理是依據(jù)相應(yīng)抗體可在體外產(chǎn)生特異性結(jié)合，并展現(xiàn)出可見(jiàn)反應(yīng)，通過(guò)已知抗原進(jìn)行未知抗體檢測(cè)。因?yàn)樵谒嵝詶l件下抑制IgM活性，主要對(duì)IgG 類凝集抗體進(jìn)行檢查，具有良好特異性，與二巰基乙醇試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)等吻合率較高。虎紅平板凝集試驗(yàn)具有價(jià)格便宜、靈敏度高、操作便捷、檢測(cè)速度快，更加適合普查群體布魯氏菌病，也是國(guó)際貿(mào)易中豬、牛、羊布魯氏菌病指定檢測(cè)試驗(yàn)。

2 布魯氏菌病抗體檢測(cè)影響因素

一是采血管影響。在布魯氏菌抗體檢測(cè)中，首先將標(biāo)本放置在采血管中，以此進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)。而不同采血管對(duì)于抗體檢測(cè)結(jié)果具有一定影響。經(jīng)研究表明，選擇鄉(xiāng)鎮(zhèn)牛羊各50頭檢測(cè)布魯氏菌病抗體，使用負(fù)壓采血管在羊頸靜脈與牛尾靜脈采血共2 管，采血管一個(gè)是普通采血管，另一個(gè)則含有肝素鈉抗凝劑，以2500/min 速度離心10 分鐘，取上清液檢測(cè)。結(jié)果表明，在虎紅平板凝集試驗(yàn)中，普通采血管檢測(cè)結(jié)果均為陰性，而含抗凝劑的采血管試驗(yàn)結(jié)果則為陽(yáng)性，在不同抗凝條件下，同一血液樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生兩種不同結(jié)果。主要是由于普通采血管中沒(méi)有抗凝劑，血液樣品采集后通常放置30min 離心，產(chǎn)生的上清液則為血清而含有抗凝劑的采血管，血液樣品混合而后離心，上清液則是血漿，前者沒(méi)有纖維蛋白質(zhì)，后者則與之相反。使用血漿試驗(yàn)，將會(huì)因?yàn)槔w維蛋白質(zhì)與試管凝集抗原及布魯氏菌病虎紅平板凝集抗原相結(jié)合，出現(xiàn)假陽(yáng)性情況。通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)可知，日常工作中應(yīng)當(dāng)使用普通采血管進(jìn)行標(biāo)本采集，避免產(chǎn)生假陽(yáng)性問(wèn)題。

二是放置時(shí)間影響。試驗(yàn)中采集血清后，需將放置一定時(shí)間才能進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。不同放置時(shí)間對(duì)于檢測(cè)結(jié)果也存在相應(yīng)影響。經(jīng)研究表明，在試驗(yàn)中使用普通采血管，將其分別放置10、30、60min 進(jìn)行虎紅平板凝集試驗(yàn)，結(jié)果表明血液標(biāo)本在放置10至30 分鐘后陽(yáng)性率從8.7%向4.3%降低，而放置60分鐘后，血液標(biāo)本陽(yáng)性率逐漸穩(wěn)定。由此可知，隨著血清標(biāo)本增加放置時(shí)間，將會(huì)降低假陽(yáng)性率，主要是由于血清中存在少量纖維蛋白，導(dǎo)致血清凝結(jié)成塊，此時(shí)試驗(yàn)纖維蛋白將會(huì)與抗原相結(jié)合，出現(xiàn)假陽(yáng)性，而經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間放置后，血清中纖維蛋白會(huì)逐漸收縮，可提高檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確率。

三是實(shí)驗(yàn)溫度影響。試驗(yàn)中放置血清時(shí)，應(yīng)當(dāng)將其放在那種溫度環(huán)境下是主要研究問(wèn)題，不同溫度對(duì)于試驗(yàn)結(jié)果同樣具有一定影響。經(jīng)研究表明，在實(shí)驗(yàn)中采集血清后，將其分別放置在5℃、15℃、30℃、35℃、至5℃溫度中進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明，在虎紅平板凝結(jié)實(shí)驗(yàn)中，隨著溫度不斷提高，假陽(yáng)性率也隨之降低。試驗(yàn)溫度在15℃以上時(shí)，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確率趨近于100%。

四是前帶現(xiàn)象影響。在檢測(cè)布魯氏菌陽(yáng)性血清標(biāo)本時(shí)，易產(chǎn)生試管凝結(jié)前帶現(xiàn)象，產(chǎn)生此種現(xiàn)象后進(jìn)行虎紅平板凝結(jié)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明均為強(qiáng)陽(yáng)性，而使用試管凝集試驗(yàn)，血清稀釋度較低為陰性，而血清稀釋度較高時(shí)，檢測(cè)結(jié)果方為陽(yáng)性。因此，在虎紅平板凝集試驗(yàn)中，其檢測(cè)結(jié)果為強(qiáng)陽(yáng)性，而采取試管凝集試驗(yàn)表明結(jié)果為陰性，則表明實(shí)驗(yàn)中可能產(chǎn)生前帶現(xiàn)象，此時(shí)共走人員應(yīng)當(dāng)將血清稀釋度加大，超過(guò)1:1600 時(shí)，才能將前帶現(xiàn)象所導(dǎo)致的假陽(yáng)性誤差減少，保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。

3 布魯氏菌病抗體檢測(cè)影響因素對(duì)策

標(biāo)本準(zhǔn)備：備好標(biāo)準(zhǔn)陰性與陽(yáng)性血清、虎紅平板凝集抗原（由畜牧站提供），按說(shuō)明使用；使用普通采血管采集標(biāo)本，血清應(yīng)當(dāng)無(wú)腐敗氣味、無(wú)溶血、無(wú)蛋白凝塊，樣品新鮮；干凈玻璃板或玻片，劃分若干方格（4cm2）；移液器或吸管，可滴加0.03mL 液體；混合棒或牙簽，以便攪拌。

操作方法：在實(shí)驗(yàn)之前，抗原與血清應(yīng)當(dāng)在室溫內(nèi)放置約30 至60min，標(biāo)記玻璃板被檢血清標(biāo)號(hào)，添加相應(yīng)0.03mL 血清后，繼續(xù)添加0.03mL 虎紅平板凝集抗原，使用小棒攪拌抗原與血清，讓兩者充分融合，5min后觀察結(jié)果，與準(zhǔn)備的陽(yáng)性及陰性血清做對(duì)照。

判定結(jié)果：在對(duì)照的陽(yáng)性與陰性血清下，可判定被檢血清，若是4min 內(nèi)被檢血清呈現(xiàn)肉眼可變的凝集現(xiàn)象，則可判定其為陽(yáng)性（+），若是并無(wú)凝結(jié)現(xiàn)象產(chǎn)生，或出現(xiàn)均勻粉紅色，則可判定血清是陰性（至）。

4 結(jié)語(yǔ)

工作人員在抗體檢測(cè)中，應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)對(duì)抗原與標(biāo)本的檢查，樣品應(yīng)當(dāng)無(wú)明顯蛋白凝塊、腐敗其為、無(wú)溶血，血清樣品運(yùn)送與保存中避免出現(xiàn)反復(fù)受熱凍結(jié)情況，確保標(biāo)本與實(shí)驗(yàn)要求相符，從而提高檢測(cè)準(zhǔn)確率，以免誤殺牲畜，對(duì)農(nóng)牧民利益造成損害。