李曉宇，楊成超，梁德軍，張 妍，矯麗曼，韓兆偉

（遼寧省楊樹研究所，遼寧 蓋州115213）

在我國北方，黑楊派及黑楊派與青楊派雜交種等速生型楊樹逐漸代替鄉(xiāng)土楊樹成為主栽樹種。但在遼寧、吉林、黑龍江、內(nèi)蒙古以及河北部分地區(qū)，速生楊幼樹在特殊年份常遭遇凍害等越冬傷害，出現(xiàn)干梢和整株死亡現(xiàn)象［1］。多年以來，遼寧省在抗寒速生楊樹育種方面取得了較大成績，如遼寧楊、108 楊、遼育1 號、中遼1 號等［2］。但是近10 年來由于氣候變化異常，很多楊樹品種出現(xiàn)凍害，其中表現(xiàn)最突出的就是108 楊，在遼寧中西部地區(qū)大面積死亡。除單純的凍害原因外，由凍害等越冬傷害誘發(fā)的潰瘍病和爛皮病也造成楊樹大面積死亡，凍害與病害的綜合作用給林農(nóng)帶來巨大損失。

目前現(xiàn)有的防凍保護(hù)劑一般起到生長調(diào)節(jié)和營養(yǎng)作用，有保溫、增溫、防凍、防失水功能，缺點(diǎn)是膜防水性差、防護(hù)時間短，沒有抑菌殺菌作用，不能起到綜合防治效果［3］。由于目前沒有適合于樹木的防凍防病劑，使楊樹、榛子、杏樹等樹木存在廣泛的越冬傷害和凍花凍果問題，包括由凍害誘發(fā)的潰瘍病和爛皮病，給林業(yè)和果樹生產(chǎn)造成嚴(yán)重?fù)p失。針對生產(chǎn)中實際需要，遼寧省楊樹研究所研制了樹木防凍防病膜（專利號：ZL201410008880.7）。本文利用2 種冰核細(xì)菌進(jìn)行試驗，對防凍防病膜劑的藥效進(jìn)行測定。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 菌 種

試驗使用的2種冰核細(xì)菌分別是菠蘿泛生氏菌Pantobacillus pineapple、丁香假單胞菌Pseudomonas syringae，上述菌種均從中國林業(yè)微生物菌種保藏管理中心購買。

1.1.2 防治藥劑及試驗濃度

防治藥劑選用遼寧省楊樹研究所研制的樹木防凍防病膜、農(nóng)用鏈霉素（重慶濟(jì)公農(nóng)牧藥業(yè)有限公司）。2種藥劑的試驗濃度均為0.3‰、0.6‰、1‰。

1.2 試驗方法

對冰核細(xì)菌的抑制試驗采用濾紙片擴(kuò)散法測定抑菌作用［4］。將上述2 種待試菌用斜面活化后，用接種環(huán)分別挑取兩環(huán)菌體，以10 mL 無菌生理鹽水稀釋，制成菌懸液。

取0.1 mL 菌懸液加于牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基表面，涂抹均勻，制成含菌平板。取直徑0.6 cm的無菌濾紙片分別放入無菌水（CK）、鏈霉素、防凍防病膜中浸泡10 min，用無菌鑷子取出濾紙片貼在含菌平板上，每皿貼3 片，每個菌種做3 次重復(fù)，然后置于29 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，測定濾紙片的抑菌圈大小，比較抑菌效果。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel軟件對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 對丁香假單胞菌的抑制效果

農(nóng)用鏈霉素和防凍防病膜兩種藥劑對兩種冰核細(xì)菌抑制作用的結(jié)果見表1。從表1 可知，3 種濃度的農(nóng)用鏈霉素均未對丁香假單胞菌起到抑制作用。0.3‰防凍防病膜對丁香假單胞菌抑制作用不明顯。當(dāng)濃度增大到0.6‰時，抑菌直徑能達(dá)到10.1mm。濃度增大到1‰時，抑菌效果與0.6‰濃度時的抑菌效果基本一致。說明在相同濃度下防凍防病膜對丁香假單胞菌的抑菌效果好于農(nóng)用鏈霉素。

表1 農(nóng)用鏈霉素和防凍防病膜對2種冰核細(xì)菌的抑制作用

2.2 對菠蘿泛生氏菌的抑制效果

從表1 可知，0.3‰和0.6‰的農(nóng)用鏈霉素未對菠蘿泛生氏菌起到抑制作用，當(dāng)濃度增加到1‰時，農(nóng)用鏈霉素對菠蘿泛生氏菌抑菌直徑為10 mm。試驗設(shè)定3種濃度的防凍防病膜對菠蘿泛生氏菌均起到較好的抑制效果。0.3‰防凍防病膜的抑制直徑就達(dá)到16.5 mm，遠(yuǎn)高于1‰農(nóng)用鏈霉素。且隨著使用濃度的增大，抑菌直徑逐漸擴(kuò)大。當(dāng)防凍防病膜濃度達(dá)到1‰時，抑制直徑高達(dá)19.0 mm。說明在相同濃度下防凍防病膜的抑菌效果比農(nóng)用鏈霉素強(qiáng)，且防凍防病膜隨濃度的增大抑菌效果有所增強(qiáng)。

2.3 對2種冰核細(xì)菌的抑制效果比較

從表1還可以得出，在0.3‰、0.6‰、1‰ 3 種濃度下，防凍防病膜對菠蘿泛生氏菌的抑菌效果高于丁香假單胞菌，分別提高100%、46.6%和46.8%。圖1 為0.6‰防凍防病膜對菠蘿泛生氏菌和丁香假單胞菌的抑制作用對比圖。

圖1 0.6‰濃度防凍防病膜對2種冰核細(xì)菌的抑制作用對比

3 結(jié)論與討論

本文研究了3 個試驗濃度下，樹木防凍防病膜和農(nóng)用鏈霉素對丁香假單胞菌和菠蘿泛生氏菌2種冰核細(xì)菌的抑菌效果。通過研究發(fā)現(xiàn)，樹木防凍防病膜對2 種冰核細(xì)菌的抑制效果好于農(nóng)用鏈霉素，并且樹木防凍防病膜對2種冰核細(xì)菌的抑制效果隨著藥劑濃度的增大而增大。在設(shè)置的最高試驗濃度下，樹木防凍防病膜對丁香假單胞菌和菠蘿泛生氏菌的抑菌直徑分別為10.1 mm 和19.0 mm，即樹木防凍防病膜對菠蘿泛生氏菌抑制效果好于對丁香假單胞菌的抑制效果。

國內(nèi)外大量研究證明，在自然界廣泛存在著冰核活性細(xì)菌，它可在-2～-3 ℃誘發(fā)植物細(xì)胞水結(jié)冰而發(fā)生霜凍；無冰核細(xì)菌存在的植物，一般可耐-6～-7 ℃的低溫不發(fā)生或發(fā)生輕微霜凍［5］。在我國黑龍江、吉林和遼寧等地區(qū)的楊樹上普遍存在著冰核細(xì)菌［6］。它們的主要種類分屬于3 個屬5個種或變種，即菠蘿泛生氏菌、噬夏孢子歐文氏菌、丁香假單胞菌、丁香假單胞菌流淚致病變種和丁香假單胞菌未定變種。

遼寧省楊樹研究所根據(jù)農(nóng)藥學(xué)原理，在充分預(yù)備試驗的基礎(chǔ)上，選取殼聚糖、丙三醇、乙二醇、磷酸二氫鉀、二甲基亞砜、2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮、5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮等試劑，研制了樹木防凍防病膜。通過室內(nèi)試驗說明，防凍防病膜對細(xì)菌有較好的抑菌效果。因此，防凍防病膜可以對冰核細(xì)菌引起的凍害起到防控作用。楊子明等［7］利用殼聚糖和茶樹油等研究了一種殼聚糖基橡膠樹割面噴霧劑。兩者都是利用殼聚糖良好的成膜性，可在被保護(hù)物體上形成高分子膜。而割面噴霧劑則是利用茶樹油的抗菌殺菌作用對柑桔褐腐疫霉引起的潰瘍病具有防治效果。

防凍防病膜可提高樹體表面溫度、防止風(fēng)干失水、防止病菌侵入，對低溫、冰核細(xì)菌等造成的凍害有較好的防治效果。防凍防病膜為楊樹幼樹莖干、枝條的霜凍預(yù)防、爛皮病和潰瘍病防治及病斑刮除后的創(chuàng)面保護(hù)等提供一種防護(hù)。