葉娟，郝迪，王梓，李旭，孫國珍，賈淑杰△

子宮肌瘤是一種常見且發(fā)病率極高的婦科疾病，發(fā)病率在育齡期女性中高達(dá)20%～50%，且呈逐年上升趨勢［1-2］。50歲以上女性有80%～90%被發(fā)現(xiàn)患有子宮肌瘤［3］。子宮肌瘤會(huì)引起疼痛、月經(jīng)過多或不孕。子宮肌瘤的發(fā)展隨年齡增長而增加?，F(xiàn)階段，臨床多采用手術(shù)和藥物進(jìn)行治療，但手術(shù)治療可對(duì)患者子宮造成影響，且術(shù)后并發(fā)癥多。我院認(rèn)為對(duì)于子宮肌瘤，可先使用中藥治療來縮小肌瘤體積，降低手術(shù)難度、減少手術(shù)出血、增加微創(chuàng)手術(shù)機(jī)會(huì)，使機(jī)體損傷較小，縮短康復(fù)時(shí)間。消結(jié)安是我院應(yīng)用50余年的臨床治療子宮肌瘤的經(jīng)驗(yàn)方，臨床取得了較好的療效。該藥是以扶正祛瘀立法治療子宮肌瘤藥方，具有軟堅(jiān)散結(jié)、通經(jīng)活絡(luò)、化瘀止血、清熱解毒等功效。目前國內(nèi)對(duì)子宮肌瘤超微結(jié)構(gòu)研究的報(bào)道較少。本研究旨在運(yùn)用雌、孕激素制備子宮肌瘤大鼠模型基礎(chǔ)上，通過對(duì)子宮肌瘤細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化來觀察消結(jié)安對(duì)子宮肌瘤的防治作用。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 消結(jié)安浸膏，由黃芪、白術(shù)、山楂、三棱、莪術(shù)、雞內(nèi)金、醋五靈脂、地龍、透骨草、地錦草和知母組成，規(guī)格：4 g生藥/mL浸膏；桂枝茯苓膠囊，江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，規(guī)格：0.31 g/粒，生產(chǎn)批號(hào)：18020608341；苯甲酸雌二醇注射液，哈爾濱三馬獸藥業(yè)有限公司，規(guī)格2 mL∶4 mg，批號(hào)20170401。黃體酮注射液，天津金耀藥業(yè)有限公司，規(guī)格10 g/L，生產(chǎn)批號(hào)：1703271。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雌性SD大鼠48只，SPF級(jí)，體質(zhì)量200 g左右，8周齡，健康無異常，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)SCXK（京）2016-0003。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物模型制備 參考文獻(xiàn)［4］方法，選用雌、孕激素雙膜法制備模型，苯甲酸雌二醇每周3次肌內(nèi)注射，每只0.06 mL，連續(xù)10周，之后增加黃體酮注射液每周2次肌內(nèi)注射，每只0.1 mL，連續(xù)5周，整個(gè)造模周期為15周。

1.3.2 分組及給藥 模型制備成功大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為5組，模型組，消結(jié)安高、中、低劑量組，陽性藥組，另設(shè)正常組，每組8只。造模結(jié)束后經(jīng)口給予消結(jié)安，每天1次，連續(xù)4周，給藥劑量為20 mL/kg。消結(jié)安劑量選用臨床用量的16倍、8倍、1倍，分別為64 g生藥/kg，32 g生藥/kg，4 g生藥/kg，陽性藥：桂枝茯苓膠囊，0.31 g/kg。

1.3.3 指標(biāo)測定 末次給藥后第2天，所有動(dòng)物稱取體質(zhì)量，腹主動(dòng)脈取血，化學(xué)發(fā)光法測定血清雌二醇、孕酮含量；肉眼觀察各組大鼠子宮組織形態(tài)和色澤的改變，游標(biāo)卡尺量取子宮頸以上橫徑，左側(cè)分角子宮根部起的子宮直徑。電子天平稱量子宮、卵巢質(zhì)量，計(jì)算子宮、卵巢系數(shù)。子宮系數(shù)（mg/g）=子宮質(zhì)量/大鼠體質(zhì)量；卵巢系數(shù)（mg/g）=卵巢質(zhì)量/大鼠體質(zhì)量。甲醛固定部分子宮組織待做HE染色，進(jìn)一步進(jìn)行病理觀察；一部分子宮組織在戊二醛固定液中迅速將其剪成2 mm×2 mm的小塊，將組織移入裝有戊二醛溶液的小瓶內(nèi)固定，固定結(jié)束后再經(jīng)2%PBS液沖洗，包埋切片，透射電鏡下觀察子宮組織超微細(xì)胞結(jié)構(gòu)的改變。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料數(shù)據(jù)以表示，組間比較采用單因素方差分析（ANOVA），組間多重比較用LSD-t法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠子宮大體解剖發(fā)現(xiàn) 正常組大鼠子宮呈肉紅色，血管豐富，有光澤，宮體纖細(xì)，卵巢大小正常；而模型組大鼠子宮顏色發(fā)白，無光澤，宮頸體短粗，直徑增大明顯，分角根部腫脹異常，子宮腔內(nèi)充滿分泌液，子宮體顯著增大，卵巢萎縮變小，見圖1。

Fig.1 Gross anatomy of rat uterus in model and control group圖1 模型組與正常組大鼠子宮大體解剖對(duì)照

2.2 消結(jié)安對(duì)子宮肌瘤大鼠子宮形態(tài)的影響 模型組子宮系數(shù)、分角直徑和分角根部直徑均大于正常組，卵巢系數(shù)小于正常組（P＜0.05）。陽性藥組、消結(jié)安各劑量組子宮系數(shù)、分角直徑和分角根部直徑均小于模型組（P＜0.05）。消結(jié)安各劑量組子宮系數(shù)、分角直徑和分角根部直徑與陽性藥組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。模型組、陽性藥組、消結(jié)安各劑量組卵巢系數(shù)均小于正常組（P＜0.05），但陽性藥組、消結(jié)安各劑量組卵巢系數(shù)與模型組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.3 消結(jié)安對(duì)各組大鼠血清雌激素、孕激素的影響 正常組血清雌二醇及血清孕酮含量均小于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。消結(jié)安各劑量組血清雌二醇和孕酮均低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；消結(jié)安各劑量組與陽性藥組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

Tab.1 Effects of Xiaojie-An on uterine morphology inrats with uterine fibroids表1 消結(jié)安對(duì)子宮肌瘤大鼠子宮形態(tài)的影響（n=8，x±s）

Tab.2 Effects of Xiaojie-An on serum levels of estrogen and progesterone in six groups of rats表2 消結(jié)安對(duì)6組大鼠血清雌激素、孕激素的影響（ng/L，x±s）

2.4 各組大鼠子宮組織超微細(xì)胞結(jié)構(gòu)的觀察 正常組：正常肌細(xì)胞，胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器正常，細(xì)胞周圍膠原纖維排列規(guī)則。模型組：細(xì)胞核近似呈橢圓形，核體積增大，見少數(shù)畸形核的核面略有凹痕，異染色質(zhì)邊聚于核膜下；胞質(zhì)內(nèi)線粒體輕度腫脹，部分嵴斷裂消失；可見部分粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張，輕度的顆粒融合和脫顆?，F(xiàn)象，細(xì)胞內(nèi)含有較豐富的肌微絲，并見脂褐素。陽性藥組與消結(jié)安各劑量組結(jié)構(gòu)相似，細(xì)胞器豐富，肌微絲豐富，線粒體部分嵴融合模糊不清，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可見輕度的顆粒融合和脫顆?，F(xiàn)象，見圖2。

Fig.2 Comparison of ultrastructures of rat uterus between six groups圖2 6組大鼠子宮組織超微細(xì)胞結(jié)構(gòu)比較

2.5 消結(jié)安對(duì)大鼠子宮一般組織形態(tài)學(xué)影響 對(duì)照組子宮內(nèi)膜呈分泌期變化，間質(zhì)可見不同程度的嗜酸性白細(xì)胞浸潤，肌層未見異常。模型組子宮內(nèi)膜呈分泌期變化，子宮平滑肌層增厚，肌細(xì)胞數(shù)量增多肥大，排列欠規(guī)整，少量中性粒細(xì)胞浸潤。高、中、低劑量組和陽性藥組與模型組比較均有一定改善，子宮平滑肌層變薄，結(jié)構(gòu)尚清楚，肌細(xì)胞基本恢復(fù)常態(tài)；但肌層見局部增厚，肌細(xì)胞數(shù)量增多肥大，排列欠規(guī)整。以高劑量組和陽性藥組為佳，見圖3。

3 討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為瘀血內(nèi)阻是肌瘤發(fā)病的病機(jī)關(guān)鍵，或氣滯血瘀，或痰濕瘀結(jié)，或氣虛血瘀［5-6］。臨床多從虛、從瘀而治子宮肌瘤。目前臨床尚鮮見對(duì)子宮肌瘤的發(fā)病機(jī)制作出明確闡述，認(rèn)為子宮肌瘤最初的形成機(jī)制可能與女性激素、免疫、遺傳等因素有關(guān)，但具體的發(fā)病機(jī)制仍不明確［7-8］。

消結(jié)安是以扶正祛瘀立法治療子宮肌瘤藥方，軟堅(jiān)散結(jié)，通經(jīng)活絡(luò)，化瘀止血，清熱解毒；用于子宮內(nèi)膜異位癥及子宮肌瘤，方中黃芪、白術(shù)、山楂益氣健脾，三棱、莪術(shù)、雞內(nèi)金、醋五靈脂破血行氣，消積止痛，消癥散結(jié)；地龍、透骨草、地錦草清熱解毒；知母涼潤，既可濟(jì)黃芪之熱，又可滋腎水之枯。全方體現(xiàn)了扶正祛邪兼顧，消癥瘕而不傷正，益氣血而不礙癥瘕消除的宗旨。

本實(shí)驗(yàn)在成功制備大鼠實(shí)驗(yàn)性子宮肌瘤模型的基礎(chǔ)上，觀察消結(jié)安對(duì)病變大鼠各項(xiàng)子宮大體指標(biāo)影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，消結(jié)安能降低子宮肌瘤大鼠的子宮質(zhì)量、子宮系數(shù)、卵巢系數(shù)、分角直徑和分角根部直徑。消結(jié)安各劑量組與陽性藥組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

Fig.3 Typical HE staining images of rat uterine tissues in six groups(×200)圖3 6組大鼠子宮典型HE染色圖像（×200）

許多研究表明，雌激素是子宮肌瘤發(fā)生機(jī)制中的重要促長激素，雌激素可促進(jìn)有絲分裂，從而影響卵巢激素的正常分泌，引起女性生殖功能障礙，最終導(dǎo)致子宮肌瘤的發(fā)生，并可刺激子宮肌瘤增長。而孕激素可進(jìn)一步促進(jìn)和維持子宮肌瘤細(xì)胞上的雌激素受體含量。卵巢是分泌雌二醇和孕酮最主要的器官，動(dòng)物模型制備中發(fā)現(xiàn)，長期外源性高水平卵巢激素的刺激導(dǎo)致大鼠卵巢萎縮，卵巢系數(shù)下降［9］。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)各組大鼠血清性激素水平的檢測，發(fā)現(xiàn)子宮肌瘤具有明顯的雌孕激素依賴性，實(shí)驗(yàn)表明，正常組血清雌二醇和孕酮水平均低于模型組，證明了在肌瘤的發(fā)生、發(fā)展上雌激素、孕激素均有重要作用。與模型組比較，消結(jié)安能降低血清中雌二醇和孕酮的含量，表明消結(jié)安對(duì)子宮肌瘤有一定的預(yù)防及治療作用，各劑量組與陽性藥組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。病理組織學(xué)研究顯示，消結(jié)安高、中、低劑量組和陽性藥組均有一定改善，子宮平滑肌層變薄，結(jié)構(gòu)尚清楚，肌細(xì)胞基本恢復(fù)常態(tài)，以高劑量組和陽性藥組為佳；透射電鏡下觀察消結(jié)安能有效改善子宮肌瘤大鼠子宮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)病變，改善子宮平滑肌細(xì)胞的局灶性增生和部分膠原纖維的紊亂，抑制平滑肌細(xì)胞的異常增殖。

綜上，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明消結(jié)安確有降低子宮系數(shù)，降低血清性激素，改善子宮肌瘤大鼠子宮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)病變的作用，其作用機(jī)制有待于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。