黃憶婷，王朝仁，楊黎耀，楊 柳，朱杰麗，吳翠蓉，秦玉川，薛錦松

(1.浙江省林產(chǎn)品質(zhì)量檢測站，杭州 310023； 2.浙江省林業(yè)科學研究院，杭州 310023；3.溫州瑞雪農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司，浙江 溫州 325500)

我國是植物油生產(chǎn)和消費大國，近年來年均銷量達3 000萬t以上，排名世界第一[1]。由于油料作物栽培技術(shù)的過度運用，使其對病蟲害的抵御能力呈現(xiàn)逐年下降趨勢，盡管各種低毒高效的生物農(nóng)藥、制劑等已在發(fā)揮著殺蟲御害作用，但其藥力效果遠不如現(xiàn)已在農(nóng)產(chǎn)品上禁用的多種有機磷農(nóng)藥，而植物油中有機磷農(nóng)藥殘留也主要來源于此。因此，研究植物油中農(nóng)藥殘留的高效檢測方法，對維護及保障植物油質(zhì)量安全具有重要意義。

目前植物油中農(nóng)藥殘留檢測應(yīng)用較廣的是GB/T 5009.20—2003《食品中有機磷農(nóng)藥殘留量的測定》，同時針對樣品前處理中的提取和凈化的新方法近些年也有較多報道，如固相萃取法[2-3]、液液分配法[4-5]、凝膠滲透色譜法[6-7]、分散固相萃取法[8-9]等，但這些方法或是操作步驟多、時間長，或是試劑耗費量大。本研究充分利用植物油低溫凝固的物理特性[10-13]，采用冷凍-離心法凈化提取液，即植物油冷凝固化后，利用密度差異，離心沉淀提取液中油脂，初步達到去除油脂、凈化提取液的目的。本文采用有機試劑對植物油樣品中有機磷農(nóng)藥進行提取，經(jīng)冷凍離心后，取上清液過多功能免疫親和柱(MycoSep 226 AflaZon+)[14-15]進一步凈化，收集凈化液經(jīng)濃縮、定容后進行氣相色譜測定。通過考察提取劑、提取方式對有機磷農(nóng)藥提取率的影響，對有機磷農(nóng)藥提取條件進行了優(yōu)化，同時對植物油中有機磷農(nóng)藥的檢測方法進行評價，以期為快速測定植物油中農(nóng)藥殘留提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

玉米油、大豆油、油茶籽油，均來源于浙江省西湖區(qū)留下鎮(zhèn)世紀聯(lián)華超市。乙腈(色譜純)，丙酮(優(yōu)級純)，正己烷(色譜純)。

有機磷農(nóng)藥標準溶液：敵敵畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、氧樂果、樂果、毒死蜱、馬拉硫磷、殺螟硫磷、倍硫磷、水胺硫磷、殺撲磷、三唑磷，質(zhì)量濃度均為1 000 μg/mL，購于上海安譜科技有限公司。使用時用丙酮將其配制成相應(yīng)質(zhì)量濃度的混合標準溶液。

Agilent 6890N氣相色譜儀，配火焰光度檢測器(FPD)；DB-17MS(50%-苯基)-甲基聚硅氧烷毛細管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)；賽多利斯BSA2202S電子天平；IKA MS3 basic旋渦混合器；Organmation N-EVAP24氮吹儀；TGL-20M高速冷凍離心機；MycoSep 226 AflaZon+免疫親和柱。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品前處理提取劑的選擇

分別稱取2.0 g玉米油、大豆油、油茶籽油樣品于25 mL離心管中，加入有機磷農(nóng)藥混合標準溶液，使樣品中13種有機磷農(nóng)藥的質(zhì)量濃度均為0.3 mg/kg，充分渦旋混勻，分別加入提取劑(丙酮、正己烷、乙腈)10 mL，蓋上塞子，3 000 r/min高速渦旋1 min，然后置于-20℃的冷凍離心機中，8 000 r/min離心10 min。取出后吸取上清液過免疫親和柱凈化，收集5 mL凈化液于比色管中，氮吹至近干，加入1.0 mL丙酮渦旋復(fù)溶后轉(zhuǎn)入進樣瓶中，采用氣相色譜測定，以回收率最高的溶劑為最優(yōu)提取劑，重復(fù)試驗6次。

1.2.2 樣品前處理提取方式的選擇

稱取2.0 g玉米油、大豆油、油茶籽油樣品于25 mL離心管中，加入有機磷農(nóng)藥混合標準溶液，使樣品中13種有機磷農(nóng)藥的質(zhì)量濃度均為0.3 mg/kg，充分渦旋混勻，并加入乙腈提取劑10 mL，分別采用均質(zhì)(10 000 r/min，1 min)、渦旋(3 000 r/min，1 min)和超聲(4 000 Hz，30 min)對油樣中農(nóng)藥進行提取，然后置于-20℃的冷凍離心機中，8 000 r/min離心5 min。取出后吸取上清液過免疫親和柱凈化，收集5 mL凈化液于比色管中，氮吹至近干，加1.0 mL丙酮渦旋復(fù)溶后轉(zhuǎn)入進樣瓶中，采用氣相色譜測定，以回收率對提取方式進行選擇，重復(fù)試驗6次。

1.2.3 植物油農(nóng)殘檢測氣相色譜條件

進樣口溫度220℃；不分流進樣，進樣量1 μL；載氣(N2)流速1 mL/min；程序升溫為70℃保持1 min，以20℃/min升溫至190℃，再以5℃/min升至260℃，保持5 min；檢測器溫度250℃；空氣流速100 mL/min，H2流速75 mL/min，補充氣(N2)流速20 mL/min。外標法定量。

1.2.4 標準曲線的建立

分別吸取各有機磷農(nóng)藥標準溶液母液于10 mL容量瓶中，丙酮定容配成100 μg/mL的單標溶液。單標進樣確定每個農(nóng)藥的保留時間和順序，并將13種有機磷農(nóng)藥標準溶液配制成5 μg/mL的混合標準儲備液。

將油樣在不加農(nóng)藥混合標準溶液的情況下，按照本文確定的前處理方法進行處理，收集定容后的溶液作為植物油基質(zhì)提取液。

吸取不同體積有機磷農(nóng)藥混合標準儲備液，用植物油基質(zhì)提取液分別配成0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 mg/L的混標，按照1.2.3方法進行氣相色譜分析，以有機磷農(nóng)藥質(zhì)量濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。

1.2.5 加標回收率與精密度

分別在玉米油、大豆油、油茶籽油樣品中添加質(zhì)量濃度為0.04、0.08、0.20 mg/kg有機磷農(nóng)藥混標，按照上述最優(yōu)方法進行前處理、檢測，重復(fù)6次，計算其回收率與精密度。

1.2.6 方法比較

向玉米油、大豆油、油茶籽油樣品中添加質(zhì)量濃度為0.3 mg/kg的混標，分別按照GB/T 5009.20—2003第二法糧、菜、油中有機磷農(nóng)藥殘留量的測定中的前處理方式和本研究確定的樣品前處理方法進行處理，以回收率、對儀器的污染程度及處理時間作為評價依據(jù)，對兩種方法進行比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品前處理提取劑的選擇

以丙酮、正己烷、乙腈3種溶劑為提取劑對試樣中有機磷農(nóng)藥進行提取，結(jié)果如表1所示。

表1 提取劑對玉米油、大豆油、油茶籽油中13種有機磷農(nóng)藥回收率的影響(n=6)

由表1可知，3種提取劑均能從樣品中提取出目標物，但不同提取劑對有機磷農(nóng)藥的回收率差異較大，同種農(nóng)藥在不同植物油中的回收率相近。3種提取劑對13種有機磷農(nóng)藥的回收率為55.3%～101.5%，正己烷提取時，乙酰甲胺磷、甲拌磷、樂果等10種農(nóng)藥回收率均在81%以上，而敵敵畏、甲胺磷、氧樂果回收率均不到65%。丙酮提取時，敵敵畏、甲胺磷、氧樂果3種農(nóng)藥的回收率均有所提升，敵敵畏回收率已達81%以上，但甲胺磷、氧樂果回收率仍小于80%。乙腈提取時，13種有機磷農(nóng)藥的平均回收率為81.3%～101.5%，滿足GB/T 5009.20—2003對植物油中有機磷農(nóng)藥殘留測定要求。丙酮對13種有機磷農(nóng)藥有較好的回收率，但提取物對氣相色譜進樣系統(tǒng)有明顯污染，多次進樣后目標物保留時間前移明顯，且出峰面積呈逐漸減小趨勢。而以乙腈作為提取劑，不僅回收率良好，均在80%以上，同時對檢測設(shè)備的污染較小，多次進樣后儀器性能仍穩(wěn)定，故本試驗以乙腈作為最佳提取劑。

2.2 提取方式的選擇

以均質(zhì)、渦旋和超聲3種提取方式對玉米油、大豆油、油茶籽油中的有機磷農(nóng)藥進行提取，以回收率結(jié)果對提取方式進行選擇，結(jié)果如表2所示。

由表2可知：各提取方式均能較好地將13種有機磷農(nóng)藥提取出來，回收率均在76%以上，其中渦旋和均質(zhì)的回收率結(jié)果相近，均在81%以上，超聲結(jié)果次之。提取方式為均質(zhì)時13種有機磷農(nóng)藥回收率為81.7%～100.3%，渦旋的回收率為81.3%～101.5%，超聲的回收率為76.6%～93.4%。3種提取方式的回收率均能滿足要求，超聲在批量處理樣品時具有優(yōu)勢，同時可以減少有機試劑揮發(fā)，對環(huán)境友好。渦旋與均質(zhì)基本能達到相近的提取效果，但考慮到渦旋的提取方式更為便捷，且用時比超聲短，回收率高于超聲，故本試驗選擇渦旋為提取方式。

表2 提取方式對玉米油、大豆油、油茶籽油中13種有機磷農(nóng)藥回收率的影響(n=6)

2.3 標準曲線和檢出限

將質(zhì)量濃度為0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 mg/L的混標進氣相色譜儀進行測定，色譜圖基線平穩(wěn)，噪聲較小，干擾全無。以有機磷農(nóng)藥質(zhì)量濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標，繪制標準曲線并求得線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、方法檢出限(S/N=3)，結(jié)果如表3所示。

由表3可知，13種有機磷農(nóng)藥在0.02～0.50 mg/L范圍內(nèi)，質(zhì)量濃度與其峰面積的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)(R2)均大于等于0.999，檢出限為0.005～0.010 mg/kg，低于GB/T 5009.20—2003第二法中最低檢出限范圍(0.01～0.03 mg/kg)。

表3 13種有機磷農(nóng)藥的線性回歸方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)及檢出限

2.4 加標回收率和精密度

按1.2.5方法進行低、中、高加標回收試驗，根據(jù)標準曲線與峰面積計算各農(nóng)藥的含量并計算加標回收率和相對標準偏差(RSD)，結(jié)果見表4。

由表4可知，植物油中13種有機磷農(nóng)藥的平均加標回收率為80.3%～102.1%，RSD小于等于3.93%，說明該方法回收率好、精密度高，可以滿足植物油中有機磷農(nóng)藥殘留的測定。

表4 13種有機磷農(nóng)藥的加標回收率及精密度

2.5 方法比較結(jié)果

按照1.2.6進行處理，以13種有機磷農(nóng)藥的回收率、對儀器的污染程度及處理時間作為評價依據(jù)，對兩種方法進行比較，結(jié)果如表5所示。由表5可知，GB/T 5009.20—2003第二法13種有機磷農(nóng)藥的回收率為70.5%～89.2%，而本方法13種有機磷農(nóng)藥回收率為81.3%～101.5%。經(jīng)GB/T 5009.20—2003第二法處理的樣品經(jīng)多次進樣后，氣相色譜儀中進樣隔墊、襯管、分流平板、色譜柱進樣口端均有明顯污漬，且出現(xiàn)雜峰，部分目標峰峰高呈逐漸縮小趨勢，而采用免疫親和柱處理的樣品則無這些現(xiàn)象。兩種方法的混合標樣色譜圖如圖1和圖2所示。本方法以有機試劑為提取劑，冷凍離心促其快速分層，避免了國標中可能出現(xiàn)的乳化現(xiàn)象，同時采用多功能免疫親和柱凈化，在1 min內(nèi)完成了脂類、蛋白質(zhì)、維生素等干擾性雜質(zhì)的去除，縮減了各種試劑用量及前處理步驟，提升了檢測效率。

表5 兩種方法13種有機磷農(nóng)藥加標回收試驗的比較(n=6)

注：1.敵敵畏；2.甲胺磷；3.乙酰甲胺磷；4.甲拌磷；5.氧樂果；6.樂果；7.毒死蜱；8.馬拉硫磷；9.殺螟硫磷；10.倍硫磷；11.水胺硫磷；12.殺撲磷；13.三唑磷。下同。

圖2 GB/T 5009.20—2003第二法10次進樣后13種混合標樣色譜圖

3 結(jié) 論

建立了一種快速有效凈化植物油中有機磷農(nóng)藥殘留的檢測方法。以乙腈為提取劑對植物油樣品進行溶解，高速渦旋提取有機磷農(nóng)藥殘留，經(jīng)冷凍離心分層，多功能免疫親和柱凈化去除提取液中的脂類、蛋白質(zhì)、維生素等雜質(zhì)，氮吹濃縮后氣相色譜法檢測，在0.02～0.50 mg/L范圍內(nèi)，敵敵畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷等13種有機磷農(nóng)藥的質(zhì)量濃度與峰面積的線性關(guān)系良好，且相關(guān)系數(shù)(R2)均大于等于0.999，檢出限為0.005～0.010 mg/kg，低于GB/T 5009.20—2003第二法中最低檢出限范圍(0.01～0.03 mg/kg)。0.04、0.08、0.20 mg/kg低、中、高添加量的平均加標回收率為80.3%～102.1%，RSD小于等于3.93%。本方法具有提取劑用量小、檢測結(jié)果準確度高，對檢測設(shè)備污染小，過柱凈化操作簡單，1 min內(nèi)即可完成等特點，適用于植物油中有機磷農(nóng)藥殘留的批量檢測。