周俏苗 陳秋霞 黃海燕 許晶 肖美芳 龔護(hù)民 吳棟才

1海南省患者兒童醫(yī)學(xué)中心婦產(chǎn)科（?？?70000）；2海南省人民醫(yī)院婦產(chǎn)科（?？?70000）

先兆子癇是孕產(chǎn)婦和新生兒高發(fā)病率和高病死率的主要原因之一［1］。先兆子癇的發(fā)病機(jī)制涉及許多因素，例如螺旋動(dòng)脈重構(gòu)受損，氧調(diào)節(jié)異常，全身性炎癥和不適當(dāng)?shù)哪阁w血管破壞［2］。在這些因素中，螺旋動(dòng)脈重塑被認(rèn)為是引起先兆子癇的關(guān)鍵誘因，并與絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞的功能障礙有關(guān)［3］。TWIST 是一種誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的轉(zhuǎn)錄因子，通過啟動(dòng)子激活或抑制，下調(diào)上皮表型相關(guān)基因（例如E-鈣黏著蛋白）或上調(diào)間質(zhì)細(xì)胞表型相關(guān)基因來控制EMT 相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄［4］。滋養(yǎng)層細(xì)胞在流產(chǎn)中的作用已受到越來越多的關(guān)注［5］。本研究立題依據(jù)是EMT 相關(guān)分子與滋養(yǎng)細(xì)胞的遷移和侵襲能力有關(guān)［6］。在絨毛頂端或附近與絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞區(qū)別的絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞失去了一些上皮表型，具有強(qiáng)大的遷移和侵襲能力［7］。滋養(yǎng)層細(xì)胞還分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（metalloproteinase，MMP），如MMP9，并改變粘附相關(guān)分子（例如E-鈣黏著蛋白，N-鈣黏著蛋白和波形蛋白）的豐度［8］。這類似于腫瘤中EMT 的過程，并促進(jìn)滋養(yǎng)層細(xì)胞遷移和侵入子宮［9］。細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶的磷酸化和AP-1 轉(zhuǎn)錄因子的激活是參與滋養(yǎng)層細(xì)胞遷移和侵襲調(diào)節(jié)的主要信號(hào)途徑之一。近年來，環(huán)狀RNA（circular RNA，circRNA）已被確定為轉(zhuǎn)錄后水平上基因表達(dá)調(diào)控的重要分子［10］。circRNA 是由非經(jīng)典剪接形式產(chǎn)生的，最常見的情況是一個(gè)外顯子的剪接供體位點(diǎn)與上游外顯子的剪接受體位點(diǎn)連接［11］。circRNA 可能調(diào)節(jié)miRNA 的功能并且在轉(zhuǎn)錄控制中發(fā)揮作用［12］。本研究目的是探討CircRNA-79530 與TWIST 形成正反饋回路調(diào)控滋養(yǎng)細(xì)胞EMT 的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 胎盤標(biāo)本采集招募20 例嚴(yán)重早發(fā)先兆子癇的患者和20 例非嚴(yán)重早發(fā)先兆子癇的患者參與本次研究，所有患者的胎齡范圍為28 ～32 周。剖宮產(chǎn)后15 min 內(nèi)獲得所有胎盤樣本。然后將絨毛膜組織從胎盤的中央部分分離，排除纖維化，梗塞和鈣化的組織。用鹽水洗滌組織以去除多余的血液后，將它們立即在液氮中冷凍并保存在-80 ℃直至使用。本研究已經(jīng)獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)文號(hào)2018-01152）。

1.1.2 細(xì)胞培養(yǎng)和質(zhì)粒構(gòu)建滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR8/SVneo 用于本次實(shí)驗(yàn)，并在Dulbecco 改良的Eagle培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并添加了10%FBS 和1%青霉素-鏈霉素（10 000 U/mL）。通過轉(zhuǎn)染pcDNA3.0-TWIST質(zhì)?？蛇^量表達(dá)人TWIST，根據(jù)制造商的說明，使用Lipofectamine 3000 用1 g 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染在6 孔細(xì)胞板（5×105）中生長(zhǎng)的HTR8/SVneo 細(xì)胞。6 h 后，用完全培養(yǎng)基代替轉(zhuǎn)染溶液。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)分組根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，將收集樣本標(biāo)本分為兩組：重度先兆子癇組（嚴(yán)重早發(fā)先兆子癇的患者胎盤組織）和非重度先兆子癇組（非嚴(yán)重早發(fā)先兆子癇的患者胎盤組織）；將HTR8/SVneo 細(xì)胞分為對(duì)照組和TWIST 轉(zhuǎn)染組（轉(zhuǎn)染pcDNA3.0-TWIST 使TWIST 過表達(dá)）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)重組熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒包含circ-79530啟動(dòng)子（pEZX-PG04-Cul2）和CircRNA-79530（psiCHEK）的潛在miRNA 結(jié)合位點(diǎn)序列-2-circ-79530）。circ-79530 啟動(dòng)子和TWIST 過表達(dá)或敲低載體分別共轉(zhuǎn)染到PLC-PRF-5 或HTR8/SVneo 細(xì)胞中。

1.2.2 實(shí)時(shí)定量PCR（qRT-PCR）使用Trizol 試劑從胎盤組織中分離總RNA。使用SYBR Premix Ex TaqⅡ試劑盒測(cè)量TWIST 和CircRNA-79530 的表達(dá)。用ABI7900 系統(tǒng)進(jìn)行qRT-PCR。PCR 擴(kuò)增程序的初始變性步驟是在94 ℃下進(jìn)行1 min 變性，然后在95 ℃下進(jìn)行40 循環(huán)30 s，然后在60 ℃下進(jìn)行1 min 的循環(huán)。GAPDH 和U6 分別被選作TWIST和CircRNA-79530 的內(nèi)部對(duì)照。按照以下步驟進(jìn)行：50 ℃3 min，95 ℃5 min，然后進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，分別是95 ℃20 s，60 ℃30 s。使用的特異性引物顯示如下：TWIST-5′-AGAAGTCTGCGGGCTGTG-3′，5′-CCTCGTAAGACTGCGGAC-3′；GAPDH5′-TGTTCGTCATGGGTGTGAAC-3，5′-ATGGCATGGACTGTGGTCAT-3′。CircRNA-795305′-GGTGTGTTCAACTGTTCGGA-35′-ATGGCATGGACTGTGGTCAT-3′，根據(jù)2-△△Ct方法分析數(shù)據(jù)。

1.2.3 細(xì)胞增殖、活力測(cè)定使用5-乙炔基-2′-脫氧尿素（EdU）染色法和CCK-8 法測(cè)定細(xì)胞活力。對(duì)于EdU 染色測(cè)定，將HTR8/SVneo 細(xì)胞通透并用Click-iT EdU 成像試劑盒染色。將處理過的細(xì)胞用4%甲醛固定15 min，然后與0.5%Triton X-100溫育20 min。此后，在黑暗中用0.5 mL Click-iT 反應(yīng)混合物處理細(xì)胞30 min。除去反應(yīng)混合物后，將細(xì)胞用PBS 中的3%BSA 洗滌，并將細(xì)胞核用1 g/mL DAPI 在黑暗中染色15 min。對(duì)于CCK-8 測(cè)定，使用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒（CCK-8）。簡(jiǎn)而言之，將HTR8/SVneo細(xì)胞用載體轉(zhuǎn)染48 h。用PBS洗滌細(xì)胞3次，然后加入1∶10 稀釋的CCK-8 溶液，并在37 ℃下孵育2 h。通過酶標(biāo)儀在450 nm下測(cè)量結(jié)果。

1.2.4 細(xì)胞凋亡測(cè)定將在6 孔板中培養(yǎng)的HTR8/SVneo 細(xì)胞添加hoechst 33258 并與培養(yǎng)基孵育10 min，然后用PBS 洗滌細(xì)胞，倒置熒光顯微鏡，裝有用于Hoechst 33258（365 nm）的濾光片，用于檢測(cè)核形態(tài)的變化。將在6 孔板中生長(zhǎng)的HTR8/SVneo 細(xì)胞暴露于低氧條件下并用載體轉(zhuǎn)染，然后根據(jù)Annexin V-FITC 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒收集細(xì)胞并用Annexin V 和PI 染色。在具有Cell Quest 軟件的FACS Calibur 儀器中分析細(xì)胞樣品。

1.2.5 蛋白質(zhì)免疫印跡用RIPA 裂解緩沖液（加入蛋白酶抑制劑混合物提取細(xì)胞上方的總蛋白。使用Pierce BCA 蛋白測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。加載約40 μg 蛋白質(zhì)以進(jìn)行10%含丙烯酰胺的SDS-PAGE，并轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜。用5%脫脂牛奶封閉后，隨后使用針對(duì)GAPDH（1∶10 000）的抗體對(duì)膜進(jìn)行探測(cè)。在室溫下與偶聯(lián)有HRP 的二抗孵育90 min后，使用增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)具有過氧化物酶活性的蛋白條帶，并使用G-Box iChemi 化學(xué)發(fā)光圖像捕獲系統(tǒng)進(jìn)行可視化。靶蛋白與GAPDH 的條帶強(qiáng)度之比被認(rèn)為是靶蛋白水平。

1.2.6 Transwell 細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)為了評(píng)估TWIST 對(duì)細(xì)胞遷移和侵襲的影響，將懸浮在無血清培養(yǎng)基中的2 × 104個(gè)HTR8/SVneo 細(xì)胞轉(zhuǎn)移到24 孔transwell 的上腔室中，有或沒有Matrigel，然后將含有10%FBS 的培養(yǎng)基放入下腔室。在37 ℃下孵育24 h 后，對(duì)遷移或侵襲的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并在0.5%結(jié)晶紫在20%乙醇中染色15 min 后，在光學(xué)顯微鏡下拍照。每組計(jì)數(shù)五個(gè)隨機(jī)選擇的區(qū)域，所有測(cè)定獨(dú)立重復(fù)3 次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法本研究中數(shù)據(jù)全部采用SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件（美國(guó)IBM 公司）進(jìn)行處理；計(jì)量資料采用±s表示，組間比較采用單因素方差分析或者重復(fù)測(cè)量的方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用百分率（%）表示，組間比較采用χ2分析；P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 重組熒光素酶檢測(cè)為了探索TWIST 的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，我們分析了全基因組轉(zhuǎn)錄TWIST 靶標(biāo)。揭示了TWIST 在Cul2 及其啟動(dòng)子上的結(jié)合基序，使用針對(duì)TWIST 的特異性抗體對(duì)HTR8/SVneo 細(xì)胞進(jìn)行ChIP-PCR 分析，顯示TWIST 在CircRNA-79530 啟動(dòng)子上的存在，驗(yàn)證了ChIP-seq 結(jié)果。見圖1。

圖1 重組熒光素酶檢測(cè)結(jié)合位點(diǎn)Fig.1 Detection of binding sites by recombinant luciferase

2.2 RT-PCR 實(shí)時(shí)分析PCR 實(shí)時(shí)分析兩組樣本中TWIST、CircRNA-79530 的mRNA 表 達(dá) 情 況，重度先兆子癇組較非重度先兆子癇組TWIST、CircRNA-79530 的mRNA 表達(dá)降低（P＜0.05）。見表1。

表1 樣本TWIST 和CircRNA-79530mRNA 表達(dá)比較Tab.1 Comparison of twist and circrna-79530 mRNA expression in samples ±s

表1 樣本TWIST 和CircRNA-79530mRNA 表達(dá)比較Tab.1 Comparison of twist and circrna-79530 mRNA expression in samples ±s

組別重度先兆子癇組非重度先兆子癇組t 值P 值TWIST 1.03±0.24 1.97±0.36-7.286 0.035 CircRNA-79530 0.67±0.01 1.58±0.28-9.117 0.024

2.3 細(xì)胞增殖檢測(cè)對(duì)細(xì)胞增殖活力檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)第12 小時(shí)TWIST 轉(zhuǎn)染組較對(duì)照組細(xì)胞增殖升高（P＜0.05），第36 小時(shí)TWIST 轉(zhuǎn)染組較對(duì)照組細(xì)胞增殖升高（P＜0.01）。說明TWIST 過表達(dá)對(duì)HTR8/SVneo 細(xì)胞的增殖有促進(jìn)作用。見表2。

表2 細(xì)胞增殖檢測(cè)Tab.2 Cell proliferation test ±s

表2 細(xì)胞增殖檢測(cè)Tab.2 Cell proliferation test ±s

組別對(duì)照組TWIST 轉(zhuǎn)染組t 值P 值12 h 127.64±36.57 192.75±51.68-12.585 0.015 36 h 154.26±47.31 268.35±70.86-29.207 0.001

2.4 細(xì)胞凋亡及活力檢測(cè)細(xì)胞在培養(yǎng)36 h 根據(jù)制造商的規(guī)程使用凋亡檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況，對(duì)照組較TWIST 轉(zhuǎn)染組細(xì)胞凋亡率升高（P＜0.05），TWIST 轉(zhuǎn)染組較對(duì)照組細(xì)胞活力升高（P＜0.05）。在Hoechst 33358 染色的幫助下，筆者觀察到TWIST 過表達(dá)可減少凋亡細(xì)胞的數(shù)量。見圖2，表3。

圖2 Hoechs 染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況Fig.2 Detection of apoptosis by hoechs staining

表3 細(xì)胞凋亡及活力比較情況Tab.3 Comparison of cell apoptosis and viability ±s

表3 細(xì)胞凋亡及活力比較情況Tab.3 Comparison of cell apoptosis and viability ±s

組別對(duì)照組TWIST 轉(zhuǎn)染組t 值P 值細(xì)胞凋亡率（%）28.41±7.35 7.62±3.05 24.038 0.014細(xì)胞活力［h（%）］69.43±10.71 91.44±12.64-38.137 0.003

2.5 TWIST 促進(jìn)細(xì)胞EMT 發(fā)生蛋白印跡檢測(cè)HTR8/SVneo 中EMT 過程相關(guān)因子蛋白表達(dá)情況，對(duì)照組較TWIST 轉(zhuǎn)染組E-鈣黏附蛋白、波形蛋白、β-連環(huán)蛋白、MMP9 表達(dá)降低（P＜0.05）。說明TWIST 促進(jìn)細(xì)胞的EMT 的發(fā)生。見表4。

2.6 TWIST 促進(jìn)HTR8/SVneo 細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移通過遷移和侵襲無實(shí)驗(yàn)測(cè)定檢測(cè)TWIST 對(duì)細(xì)胞的影響作用，對(duì)照組較TWIST 轉(zhuǎn)染組細(xì)胞遷移數(shù)量、細(xì)胞侵襲減少（P＜0.05），TWIST 促進(jìn)滋養(yǎng)層細(xì)胞遷移和侵襲。見圖3、表5。

表4 蛋白印跡分析EMT 蛋白表達(dá)Tab.4 Western blot analysis of EMT protein expression ±s

表4 蛋白印跡分析EMT 蛋白表達(dá)Tab.4 Western blot analysis of EMT protein expression ±s

組別對(duì)照組TWIST轉(zhuǎn)染組t值P值E-鈣粘著蛋白1.14±0.16 1.76±0.32-8.386 0.025波形蛋白1.26±0.20 2.04±0.37-15.028 0.017 β-連環(huán)蛋白0.94±0.05 1.73±0.30-16.114 0.036 MMP9 1.07±0.18 1.93±0.41-15.397 0.028

圖3 細(xì)胞侵襲與遷移Fig.3 Cell invasion and migration

表5 細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移測(cè)定Tab.5 Determination of cell invasion and metastasis ±s

表5 細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移測(cè)定Tab.5 Determination of cell invasion and metastasis ±s

組別對(duì)照組TWIST 轉(zhuǎn)染組t 值P 值細(xì)胞遷移×102（個(gè)）3.87±0.35 11.27±2.86-15.247 0.019細(xì)胞侵襲×102（個(gè)）1.88±0.21 7.24±1.28 10.034 0.025

2.7 凋亡蛋白指標(biāo)檢測(cè)蛋白印跡分析caspase-3、Bax 蛋白表達(dá)升高（P＜0.05），TWIST 轉(zhuǎn)染組較對(duì)照組Bcl-2 蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）。見表6。

3 討論

滋養(yǎng)層細(xì)胞的異常遷移和侵襲與妊娠的一些常見并發(fā)癥有關(guān)［12］。在植入和胎盤發(fā)育階段，滋養(yǎng)細(xì)胞參與子宮螺旋動(dòng)脈重塑和胎盤床脈管系統(tǒng)發(fā)育，其缺陷會(huì)導(dǎo)致胎盤疾病，例如自然流產(chǎn)，先兆子癇和胎兒生長(zhǎng)受限［13］。本研究證明TWIST 通過與靶基因CircRNA-79530 結(jié)合，并上調(diào)CircRNA-79530的表達(dá)。接下來，本研究證明CircRNA-79530與TWIST 正相關(guān)，并促進(jìn)了EMT 進(jìn)展。最近，非經(jīng)典的剪接體機(jī)制重新發(fā)現(xiàn)并產(chǎn)生了circRNA。異質(zhì)circRNA 組及其作為競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源RNA 的功能改變了學(xué)界對(duì)癌癥的看法，尤其是在癌變和癌癥進(jìn)展方面。有趣的是，單個(gè)基因位點(diǎn)可通過其他反向剪接產(chǎn)生多個(gè)circRNA。這種選擇性剪接還可以擴(kuò)展circRNA 的多樣性，并且一些盒外顯子比線性mRNA 更有利地包含在circRNA 中。筆者發(fā)現(xiàn)TWIST 的外源表達(dá)促進(jìn)了circRNA 形成的轉(zhuǎn)錄。CircRNA-79530 與不良預(yù)后相關(guān)，并促進(jìn)HTR8/SVneo 細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和進(jìn)展。子癇前癥可導(dǎo)致高胎兒發(fā)病率和懷孕導(dǎo)致的病死率。臨床上其復(fù)雜的致病和危險(xiǎn)綜合癥增加了對(duì)先兆子癇患者的治療和護(hù)理難度。越來越多的證據(jù)表明，TWIST 和CircRNA-79530 在先兆子癇的發(fā)病機(jī)理和發(fā)展中起著重要作用［14］。本研究發(fā)現(xiàn)胎盤組織中TWIST 和CircRNA-79530 的表達(dá)下調(diào)。TWIST 的過度表達(dá)促進(jìn)了滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖，轉(zhuǎn)移和EMT 的形成，而TWIST 的沉默則表現(xiàn)出相反的作用。生物信息學(xué)分析表明，CircRNA-79530是TWIST的直接靶標(biāo)，在滋養(yǎng)細(xì)胞中受TWIST 正調(diào)控。TWIST 已顯示在人胎盤，高侵害性EVT 和HTR-8/ SV neo 細(xì)胞中高表達(dá)，并在癌細(xì)胞的存活和侵襲中發(fā)揮重要的積極作用［15］。在低氧條件下，TWIST 的表達(dá)在人胎盤的滋養(yǎng)細(xì)胞中顯示為異常［16］。本研究顯示與非重度先兆子癇患者相比，TWIST 表達(dá)在重度先兆子癇患者中降低。此外TWIST 的過表達(dá)減少了HTR-8/SVneo 細(xì)胞的凋亡并增強(qiáng)了增殖，遷移和侵襲以及管的形成。這些發(fā)現(xiàn)表明，TWIST 可能是調(diào)節(jié)子癇前期發(fā)展和進(jìn)程的重要因素。

表6 凋亡蛋白指標(biāo)檢測(cè)情況Tab.6 Detection of apoptotic protein index ±s

表6 凋亡蛋白指標(biāo)檢測(cè)情況Tab.6 Detection of apoptotic protein index ±s

組別對(duì)照組TWIST 轉(zhuǎn)染組t 值P 值caspase-3 1.82±0.24 1.03±0.12 7.238 0.025 Bax 1.73±0.22 1.01±0.10 8.087 0.017 Bcl-2 1.32±0.18 2.14±0.36-13.114 0.036

TWIST 是胚胎發(fā)育和腫瘤生物學(xué)中公認(rèn)的轉(zhuǎn)錄因子［17］。發(fā)現(xiàn)TWIST 功能障礙在許多惡性腫瘤的癌癥發(fā)生、增殖、血管生成、侵襲和轉(zhuǎn)移中起著重要作用［18-19］。TWIST 被認(rèn)為是通過抑制細(xì)胞凋亡來促進(jìn)腫瘤起始和存活的癌蛋白。TWIST 下調(diào)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，而TWIST 過表達(dá)抑制細(xì)胞衰老并響應(yīng)遺傳毒性損傷而促進(jìn)細(xì)胞增殖。與此相符，筆者表明TWIST 的過表達(dá)抑制了HTR-8/SVneo細(xì)胞的凋亡并增強(qiáng)了增殖。TWIST 已被證明具有抑制由多種刺激（例如p53、化學(xué)療法、TNF-α）誘導(dǎo)的凋亡的能力。TWIST 介導(dǎo)的凋亡抑制作用由caspase 途徑調(diào)控。TWIST 是凋亡過程中caspase 途徑的底物。半胱氨酸蛋白酶對(duì)TWIST 的加工導(dǎo)致泛素化和蛋白酶體介導(dǎo)的降解。在本研究中，caspase 3 表達(dá)增加可能是導(dǎo)致缺氧治療的HTR-8/SVneo 中TWIST 表達(dá)減少的原因。許多證據(jù)表明，TWIST 通過增強(qiáng)侵襲性偽足的形成、遷移和外滲，參與了腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過程。這與發(fā)現(xiàn)TWIST增強(qiáng)與癌轉(zhuǎn)移中ECM 分解有關(guān)的MMP3，MMP2，MMP9 的表達(dá)有關(guān)。與這些發(fā)現(xiàn)一致，筆者觀察到TWIST 過表達(dá)誘導(dǎo)了MMP9 表達(dá)的增加。同樣，在本研究中，TWIST 過表達(dá)被證明可促進(jìn)HTR-8/SVneo 細(xì)胞的體外遷移和侵襲。此外，發(fā)現(xiàn)TWIST誘導(dǎo)的HTR-8/SVneo 細(xì)胞侵襲與E-鈣黏蛋白上調(diào)有關(guān)，因?yàn)門WIST 可以與E-鈣粘蛋白啟動(dòng)子結(jié)合并下調(diào)E-鈣黏蛋白基因啟動(dòng)子的活性。基質(zhì)膠上細(xì)胞體外管的形成是許多生物學(xué)事件的結(jié)果，包括細(xì)胞增殖、遷移、細(xì)胞間相互作用和細(xì)胞伸長(zhǎng)。盡管這不能完全模仿體內(nèi)血管生成的整個(gè)過程，但它反映了孕早期滋養(yǎng)層細(xì)胞的潛在整體功能。

筆者認(rèn)為，CircRNA-79530 與TWIST 形成正反饋回路：滋養(yǎng)細(xì)胞中TWIST正調(diào)控CircRNA-79530；CircRNA-79530 與不良預(yù)后相關(guān)，并促進(jìn)HTR8/SVneo 細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和進(jìn)展；TWIST 通過增強(qiáng)侵襲性偽足的形成，遷移和外滲參與了腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過程；該過程很可能是通過TWIST 正調(diào)控CircRNA-79530 推進(jìn)實(shí)施的。

綜上所述，TWIST 直接與CircRNA-79530 結(jié)合形成正反饋，促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖活力，有助于EMT 和細(xì)胞的遷移侵襲能力。