尹彥青

（河北常山生化藥業(yè)股份有限公司，河北 常山 050800）

對(duì)“甜味”的追求是銘刻于人類的基因當(dāng)中。隨著社會(huì)的發(fā)展，人們?cè)谧非蟆疤稹钡耐瑫r(shí)，也不忘追求“健康”【1】。盡管甜味素已經(jīng)被證實(shí)并不會(huì)引發(fā)肥胖，對(duì)人體的危害也非常的微小，但是，如果食品加工過(guò)程中添加過(guò)量的甜味素，則有可能引發(fā)食用者發(fā)生腹瀉的可能，并且，實(shí)驗(yàn)證明，甜味素?cái)z取過(guò)量，極易造成苯丙酮尿癥患者無(wú)法正常代謝苯丙胺酸。此外，一些無(wú)良商家以更加廉價(jià)的其他人造甜味劑替代甜味素，造成食品安全隱患[2]。因此，對(duì)于測(cè)定食品中是否使用了甜味素，以及甜味素的具體含量，成為了相關(guān)監(jiān)督部門以及食品檢測(cè)行業(yè)從業(yè)人員關(guān)注的重點(diǎn)。

一、高效液相色譜法原理

高效液相色譜是分析的有力工具。實(shí)施高效液相色譜法高效液相色譜法基本上是柱色譜法的一種高度改進(jìn)形式。不是讓溶劑在重力作用下通過(guò)柱子滴下，而是在高達(dá)400個(gè)大氣壓的高壓下強(qiáng)制通過(guò)[3]。這樣可以更好地分離混合物的組分。另一個(gè)主要的改進(jìn)就是柱色譜法的檢測(cè)方法。這些方法是高度自動(dòng)化和極其敏感的。高效液相色譜法所采用的色譜柱中，二氧化硅顆粒充斥其中，通過(guò)混合物中的極性化合物比非極性化合物對(duì)極性二氧化硅的粘附時(shí)間更長(zhǎng)這一特點(diǎn)，非極性電子將更快地通過(guò)圓柱。在這種情況下,柱子的大小是一樣的,但是硅石經(jīng)過(guò)改性,通過(guò)在其表面附加長(zhǎng)的烴鏈,使其成為非極性的——通常是8或18個(gè)碳原子。它們?cè)谌軇┲械娜芙庑砸矔?huì)降低，因?yàn)楫?dāng)它們擠進(jìn)水分子或甲醇分子之間時(shí)，需要打破氫鍵。因此，它們?cè)谌芤褐谢ㄙM(fèi)的時(shí)間較少，這會(huì)減慢它們通過(guò)柱的速度。這意味著現(xiàn)在是極性分子，將更快地通過(guò)色譜柱，從而快速的確定測(cè)定結(jié)果。

二、檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

（一）儀器與試劑

本次實(shí)驗(yàn)所采用的儀器，包括高效液相色譜儀；離心機(jī)；電子天平。本次實(shí)驗(yàn)所采取的試劑，包括實(shí)驗(yàn)用純水；1000mg/L的水中甜蜜素溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.1001g；實(shí)驗(yàn)用分析純（Sulfuric acid,hypochlorite,Sodium bicarbonate）；實(shí)驗(yàn)用色譜純（Methanol,ethanol,n-ethane）。

（二）實(shí)驗(yàn)流程

本次實(shí)驗(yàn)選取了三種樣品，分別是市售飲料A、市售濃縮果汁B以及市售糖果C。對(duì)三種樣品進(jìn)行取樣和制備，具體流程如下所述。

1.取樣品、微溫加熱除二氧化碳、氨水調(diào)節(jié) PH=5、定容至 20 毫升、HA0.45μm 濾膜過(guò)濾，濾液備用。

2.樣品取樣和制備完成后，進(jìn)行甜味素的測(cè)定：先取 20μl 甜味素標(biāo)準(zhǔn)溶液注入到高速液相色譜儀中，進(jìn)行色譜分離測(cè)定；依據(jù)保留時(shí)間定性、外標(biāo)法定量；重復(fù)上述測(cè)定過(guò)程，并進(jìn)行結(jié)果標(biāo)記。

三種樣品的甜味素測(cè)定過(guò)程一致，以此降低測(cè)定干擾。

3.結(jié)果

在陽(yáng)離子模式下，以甲醇/水流動(dòng)相（30:70，添加乙酸，pH為3.01），在正離子模式下分析阿斯巴甜，檢出限為5pg，水溶液中阿斯巴甜的線性響應(yīng)范圍為10-200 pg[4]。該方法用于檢測(cè)飲料、濃縮果汁和糖果中的阿斯巴甜。其液色相譜如圖1、圖2和圖3所示。

4.討論

本文開發(fā)了一種同時(shí)測(cè)定液相色譜（LC）測(cè)定加工食品中甜味素的方法。通過(guò)在設(shè)置為160 rpm和50°C的恒溫振蕩器中使用30%甲醇溶液通過(guò)快速透析來(lái)制備樣品1小時(shí)。如果不使用固相萃取（SPE）進(jìn)行純化步驟，則測(cè)試溶液中的基質(zhì)對(duì)化合物的鑒定和定量沒有影響。該方法滿足所有驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)，所有樣品的定量限（LOQ）為0.01μg/ g。使用這種方法調(diào)查了3種加工食品中甜味素的含量，結(jié)果表明它們的檢出限低于較低的最低檢測(cè)限，以進(jìn)一步增強(qiáng)產(chǎn)物識(shí)別能力。

需要注意的是，在本次實(shí)驗(yàn)中，采用高效液相色譜法進(jìn)行食品甜味素的測(cè)定，在檢測(cè)波長(zhǎng)的確定時(shí)，需要充分的考慮到樣品甜味素的吸收情況，結(jié)合紫外線照射下，色譜流動(dòng)相的相應(yīng)值，210nm的波長(zhǎng)是最佳波長(zhǎng)。但是，在實(shí)際測(cè)定過(guò)程中，為了避免外部影響，以及樣品的不確定性，最終確定的檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，這也是本次實(shí)驗(yàn)中所采用的檢測(cè)波長(zhǎng)，并且，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明了該檢測(cè)波長(zhǎng)能夠最大限度確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。

其次，對(duì)食品中甜味素的測(cè)定來(lái)說(shuō)，選擇合適的溶液酸堿度，有利于對(duì)溶液的測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確。同時(shí)，溫度也會(huì)在一定程度上，影響到甜味素的測(cè)定結(jié)果。因此，結(jié)合甜味素在3-5之間的酸堿度性質(zhì)最穩(wěn)定的特點(diǎn)，并且綜合實(shí)驗(yàn)多方因素，將高效液相色譜法測(cè)定食品中的甜味素的溶液酸堿度確定為5，同時(shí)，色譜柱的溫度定為25℃。

三、結(jié)論

綜上所述，食品加工行業(yè)的發(fā)展，使得甜味素在我國(guó)的食品加工中被廣泛應(yīng)用，同時(shí)，秉承對(duì)廣大人民群眾的健康負(fù)責(zé)，對(duì)待甜味素的使用要格外的嚴(yán)謹(jǐn)，因此，我國(guó)明確規(guī)定了食品加工中甜味素的使用量。有鑒于此，食品衛(wèi)生監(jiān)督部門出于提升我國(guó)食品安全、控制食品甜味素使用量的目的，應(yīng)當(dāng)在食品中甜味素的測(cè)定中，采用高效液相色譜法。