1 正確認(rèn)識(shí)口蹄疫滅活疫苗的作用

1.1 豬的帶毒與排毒問題口蹄疫具有傳播速度快、感染動(dòng)物廣泛、控制難度大、經(jīng)濟(jì)損失巨大等特點(diǎn)，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為動(dòng)物傳染病的一類病害。2006年塞浦路斯國際口蹄疫會(huì)議上多位學(xué)者報(bào)告了豬的帶毒與排毒問題存在，論證了免疫雖然不能完全提供臨床保護(hù)和病毒學(xué)保護(hù)，但可以有效使免疫后感染的豬排毒量大幅減少[1]。

1.2 疫苗接種作用2010年日本暴發(fā)口蹄疫，當(dāng)時(shí)易感動(dòng)物多、感染傳播太快，以至于來不及撲殺和處理尸體，使疫情面積擴(kuò)大。為了應(yīng)對(duì)口蹄疫疫情，日本緊急改變防控措施，使用疫苗緊急控制了疫情，此次事件中疫苗起到了減少排毒的作用。日本的經(jīng)驗(yàn)說明，免疫控制疫情是有效的，動(dòng)物帶毒與排毒是有風(fēng)險(xiǎn)的。

對(duì)于我國而言，疫病防控最有效方法之一應(yīng)該是疫苗免疫方法的應(yīng)用[2]，而免疫接種是疫病防控中最關(guān)鍵的一個(gè)環(huán)節(jié)，其目的就是保護(hù)易感動(dòng)物，提高易感動(dòng)物的免疫水平，降低口蹄疫流行的嚴(yán)重程度和流行范圍，特別是規(guī)?；瘓?，滅活疫苗的注射密度必須達(dá)到80%以上時(shí)，才能有效遏制口蹄疫的流行[3]。

2 臨床診斷與實(shí)驗(yàn)室診斷

口蹄疫風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估對(duì)于規(guī)模養(yǎng)殖場、非疫區(qū)都具有十分重要的意義。病原檢測、血清抗體（3ABC、免疫抗體）的檢測，有助于早期發(fā)現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)因子及時(shí)預(yù)警并制定可行方案，把握該病的發(fā)生情況和發(fā)展趨勢，從而及時(shí)預(yù)警預(yù)報(bào)[5]。通過臨床癥狀、血清學(xué)與病原學(xué)分析，才能證明豬場是否具有風(fēng)險(xiǎn)[4]

2.1 口蹄疫臨床診斷口蹄疫的臨床癥狀主要表現(xiàn)為鼻部、蹄冠、乳房、皮膚發(fā)生水皰和爛斑；部分豬口腔黏膜也有同樣病變，特是幼畜發(fā)病率和死亡率高，心臟部位易發(fā)生“虎斑心”癥狀（見圖1）。豬群還表現(xiàn)為采食量減少、日增重降低、消毒費(fèi)用增高，根據(jù)研究資料表明：全年因口蹄疫損失比較巨大，如豬肉全年經(jīng)濟(jì)損失24%、活牛17%、牛肉20%、牛奶16%、綿羊和綿羊10%損失率[7]。

圖1 豬口蹄疫的臨床癥狀

2.2 口蹄疫血清學(xué)與病原學(xué)診斷

2.2.1 多重 RT-PCR病原學(xué)診斷 按照國家防疫要求進(jìn)行“早、快、嚴(yán)、小”原則處理發(fā)病豬群。臨床上為了確診口蹄疫流行毒株以及提供科學(xué)的防控建議，需要做流行毒株與疫苗匹配性研究，這樣才能提供針對(duì)性強(qiáng)的防控措施[6]。

圖2 多重 RT-PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果

2.2.2 血清學(xué)檢測 豬群通過頸靜脈采血分離血清后（見表1，圖3），通過LPB-ELISA檢測口蹄疫免疫抗體水平，來評(píng)估免疫效果及調(diào)整免疫程序。按照國家要求免疫覆蓋密度≥80%；群體免疫合格率≥70%，豬一次免疫抗體合格率在30%～40%，加強(qiáng)免疫80%～90%；牛一次免疫抗體合格率在50%～60%，加強(qiáng)免疫95%以上表明免疫合格、群體免疫力強(qiáng)、疫苗質(zhì)量好、豬場發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)小[6]。

表1 健康豬場抗體抽血方案

圖3 頸靜脈采血及分離血清

3 影響口蹄疫疫苗免疫效果的因素分析

3.1 疫苗毒株與流行毒株匹配性從目前市場來講，口蹄疫主要是O型、A 型流行為主；其中O型是感染最多、流行復(fù)雜的毒株，也是最難防控的關(guān)注重點(diǎn)?？谔阋叨局旮餍烷g沒有交叉免疫性，同血清型的各拓?fù)湫椭g也僅有部分交叉免疫性，所以在疫苗毒株的選擇上，免疫用疫苗的制苗毒株必須與流行毒株盡可能匹配。目前，國內(nèi)口蹄疫制苗毒株主要分為：傳統(tǒng)培養(yǎng)的制苗毒株（O/Mya98/BY/2010株、A/WH/09株、O/PanAsia/TZ/2011株、O/Mya98/XJ/2010株、O/GX/09-7株、O/HM02株+AKTⅢ株、O/HB/HK99株、AF/72株）以及利用反向遺傳操作技術(shù)拯救的制苗毒株（Re-A/WH/09株、Re-O/MYA98/JSCZ/2013株），通過反向遺傳操作技術(shù)可以構(gòu)建種毒庫，從種毒源頭解決田間毒株產(chǎn)量低、抗原不穩(wěn)定、不適合作為種毒的難題，顯著提高了抗原產(chǎn)量，降低和消除種毒致病性，拓寬了抗原譜，提高了穩(wěn)定性和抗原免疫原性，改善免疫應(yīng)答，優(yōu)化種毒性能，顯著提高疫苗效力，并實(shí)現(xiàn)疫苗產(chǎn)業(yè)化。臨床上由于口蹄疫容易變異，防控難度大的特點(diǎn)，疫苗毒株要與流行毒株匹配，這樣才能保障疫苗的防控效果[8]。

3.2 疫苗本身效力的影響口蹄疫滅活疫苗的效力不僅取決于抗原含量，也取決于抗原和佐劑混合物的共同作用，疫苗效力評(píng)估用PD50進(jìn)行評(píng)定，一般將口蹄疫疫苗免疫動(dòng)物21d后，用同源強(qiáng)毒10000ID50攻擊免疫動(dòng)物，如果動(dòng)物獲得攻毒保護(hù)，則該疫苗合格；PD50高說明免疫效果好，反之亦然。

實(shí)驗(yàn)研究表明（見表2），疫苗PD50與液相阻斷ELISA測定的抗體水平具有一定的相關(guān)性，相關(guān)性在95%以上。目前大部分用液相阻斷ELISA方法檢測抗體滴度，滴度≥1: 128時(shí)，免疫動(dòng)物能耐受攻擊，屬于全部保護(hù)范圍；ELISA抗體滴度≤1:16時(shí)，免疫動(dòng)物不能耐受攻擊，屬于不保護(hù)范圍；介于兩者之間ELISA抗體滴度在1:22～64時(shí)，免疫動(dòng)物不能完全耐受攻擊，屬于不完全保護(hù)范圍，此時(shí)應(yīng)進(jìn)行免疫接種或加強(qiáng)免疫。

表2 豬場液相阻斷ELISA抗體保護(hù)范圍

3.3 母源抗體的干擾母源抗體具有兩重作用，既能保護(hù)幼齡動(dòng)物免受病原的侵害，但在實(shí)際生產(chǎn)中又有不利的一面，對(duì)疫苗免疫具有明顯的干擾作用。母源抗體對(duì)特異性抗原位點(diǎn)的“封閉”而阻止抗原位點(diǎn)與機(jī)體免疫相關(guān)細(xì)胞上的抗原受體結(jié)合等而導(dǎo)致免疫系統(tǒng)不能對(duì)抗原物質(zhì)產(chǎn)生反應(yīng)。

高世杰等通過實(shí)驗(yàn)證明，母源抗體效價(jià)高低，傳遞給仔豬的抗體水平有一定的差異。向華等采用微量細(xì)胞中和試驗(yàn)（SN）證明，母源抗體越高，干擾作用越大。臨床上如果母豬使用高純度、高含量的疫苗后，對(duì)于母豬產(chǎn)下的仔豬而言，免疫時(shí)間就得推后。仔豬免疫程序易受母源抗體的影響，免疫過早、過晚均不是理想的免疫時(shí)機(jī)，因?yàn)槊庖哌^早母源抗體易被疫苗抗原中和導(dǎo)致免疫失敗，如果母源抗體完全消失后再免疫，雖然免疫效果好，但免疫空白期過長存在一定的感染風(fēng)險(xiǎn)。大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，母源抗體水平?jīng)Q定仔豬的首免時(shí)間，首免過后的殘留抗體水平?jīng)Q定再次免疫的時(shí)間。

3.4 免疫程序不合理不同的養(yǎng)殖場往往根據(jù)自己的經(jīng)驗(yàn)來確定首次免疫時(shí)間和免疫次數(shù)，導(dǎo)致大量的免疫失敗現(xiàn)象。疫苗在應(yīng)用時(shí)，免疫劑量適宜是最有效、最經(jīng)濟(jì)的選擇；在應(yīng)用時(shí)如果免疫劑量不足易造成免疫失敗，因?yàn)榈退娇贵w不能抵抗野毒的攻擊。臨床上由于疫情復(fù)雜，適當(dāng)?shù)募哟笠呙鐒┝繉?duì)疾病防控有一定作用，但劑量加大過度，反而不利于防控；具體應(yīng)根據(jù)疫情選擇疫苗種類、劑量和次數(shù)進(jìn)行防控應(yīng)用。

3.5 疫苗儲(chǔ)藏與冷鏈運(yùn)輸、存放時(shí)溫度未按疫苗保存要求，如保存溫度較高，油佐劑疫苗冷凍，易導(dǎo)致疫苗中有效抗原的降解或破乳，造成疫苗效力減小甚至完全失效。

3.6 疫苗使用注射操作不規(guī)范，注射器的刻度不清晰，或注射時(shí)“打飛針”造成免疫的劑量不足。免疫接種前后豬只受到濕度過大、通風(fēng)不良、過冷、過熱、斷奶、限飼、長途運(yùn)輸、脫水、突然換料、轉(zhuǎn)群或咬架等刺激，都可不同程度地造成應(yīng)激，導(dǎo)致豬體免疫應(yīng)答能力減弱。

3.7 疫苗免疫效果的評(píng)估臨床實(shí)際中，常常發(fā)生疫苗免疫失敗，造成免疫空白的個(gè)體或畜群，這些動(dòng)物極易被FMDV感染，成為口蹄疫發(fā)生與流行的潛在危險(xiǎn)因素。探究其原因，主要是由于免疫程序不合理，母源抗體干擾和免疫抑制等因素所致。但是口蹄疫的防控，疫苗免疫只是綜合防控措施之一，平時(shí)要重視養(yǎng)殖場生物安全管理，改善飼養(yǎng)管理、提高豬群健康水平更為重要。隨著科技的進(jìn)步和疫苗應(yīng)用的要求，疫苗生產(chǎn)工藝也在不斷完善。根據(jù)流行毒株而選用制苗種毒、抗原濃縮和無血清培養(yǎng)、佐劑的篩選，這些都能提高疫苗的效力和安全性。

在疫苗選擇盡量選擇高效、安全的疫苗。研究表明，滅活疫苗質(zhì)量的好壞與制造工藝、抗原量、純度、毒株以及佐劑有關(guān)，疫苗抗原純度決定了注射時(shí)應(yīng)激反應(yīng)大?。灰呙缭郊冸s蛋白與內(nèi)毒素含量越小，免疫應(yīng)激反應(yīng)越小，疫苗安全性就越好。隨著細(xì)胞免疫和黏膜免疫的研究不斷深入，養(yǎng)殖水平也在不斷提高，相信不久的將來我國能夠很好地控制和消滅口蹄疫。