劉曉云 安寶東 高少妮 楊秀麗 萬莉

(山東科建檢測服務(wù)有限公司，山東 日照 276800)

1 材料與設(shè)備

1.1 基質(zhì)

番茄，來自日照市東港區(qū)南湖鎮(zhèn)沈馬莊村試驗(yàn)田的對照小區(qū)。

1.2 試劑

乙腈，Sigama aldrich公司；水，霍尼韋爾國際公司；NaCl，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)品

丙酮中異菌脲，1000 ± 20 mg/L，北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司。

1.4 儀器設(shè)備及型號(hào)

FA1204C 萬分之一電子天平，YP5002百分之一電子天平，RZ-528G 破壁機(jī)，XW-80A 微型旋渦混合儀，KQ-500B 超聲波清洗器，Agilent 1290-Ultivo超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀。

2 檢測步驟

2.1 前處理步驟

提取和凈化：

取待測空白番茄樣品，放入破壁機(jī)制成勻漿，稱取勻漿試樣5.00±0.10 g于具塞試管中，添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)30 min后（樣品空白不需要添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)），加入50.0 ml 乙腈提取劑，超聲提取15 min，加入適量氯化鈉，渦旋混合30 s，靜置后吸取2 ml 上清液，加入0.10 g 佛洛里硅土，渦旋混合30 s，靜置后取1 ml 上清液，根據(jù)實(shí)際情況稀釋，取適量稀釋液過0.22 μm 有機(jī)微膜，測試。

2.2 儀器測定

（1）儀器：Agilent 1290-Ultivo 超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀；（2）色譜柱：Eclipse Plus C18，1.8μL，2.1×50 mm；（3）柱溫：35.0°C；（4）進(jìn)樣量：2.00μl；（5）流動(dòng)相預(yù)處理：超聲脫氣；（6）流動(dòng)相A：水；（7）流動(dòng)相B：乙腈；（8）梯度洗脫條件：流動(dòng)相A:流動(dòng)相B=90:10(0.00 min)；50:50(1.00 min)；10:90(2.00 min)；90:10(3.00 min)；90:10(5.00 min)；（9）離子源：AJS-ESI；（10）掃描方式：MRM模式；（11）鞘氣溫度：250°C；（12）鞘氣流速：11.0 L/min；（13）MS2 Heater：65 °C；（14）MS1 Heater：65 °C；（15）噴霧：15.0 psi；（16）MRM質(zhì)譜條件見表1。

表1 MRM監(jiān)測條件參數(shù)

3 檢測方法確證

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性

以對照小區(qū)的番茄為材料，按照前處理步驟，制備得到空白基質(zhì)溶液。

分別以乙腈和空白基質(zhì)溶液為定容介質(zhì)配制一系列質(zhì)量濃度為0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.020 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在確定的方法條件下對標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定，每個(gè)濃度采集3 個(gè)平行，以5 個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制1 條標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.2 基質(zhì)效應(yīng)考察

分別用純?nèi)軇┮译婧涂瞻谆|(zhì)溶液為定容介質(zhì)配制一系列質(zhì)量濃度為0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.020 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分析時(shí)以乙腈標(biāo)準(zhǔn)溶液、空白基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的順序進(jìn)行檢測，以考察基質(zhì)的影響。

基質(zhì)效應(yīng)(Matrix Effect)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：對純?nèi)軇┡c基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率進(jìn)行比較，若基質(zhì)效應(yīng)ME%的絕對值≥20%，說明基質(zhì)效應(yīng)明顯。若基質(zhì)效應(yīng)ME%絕對值＜20%，說明基質(zhì)效應(yīng)不明顯。

基質(zhì)效應(yīng)(ME)按照式（1）進(jìn)行計(jì)算：

式中：ME為基質(zhì)效應(yīng)，%；

bA為以純?nèi)軇槎ㄈ萁橘|(zhì)配制的標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率；

bB為以空白基質(zhì)溶液為定容介質(zhì)配制的標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率；

3.3 準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn)

設(shè)計(jì)1個(gè)溶劑空白對照組、l個(gè)樣品空白對照組和3個(gè)添加水平（0.05 mg/kg、0.20 mg/kg、1.0 mg/kg）。每個(gè)添加水平5個(gè)重復(fù)。對空白對照組與3 個(gè)添加水平組共16 個(gè)前處理后得到的樣品各采集1針（溶劑空白對照不進(jìn)行前處理）。

3.4 LOQ

以最小添加濃度作為方法的LOQ，異菌脲在番茄中的LOQ為0.05 mg/kg。

3.5 專屬性

所測空白樣品在被試物出峰區(qū)間的信號(hào)應(yīng)小于LOQ 添加水平響應(yīng)的30%。

4 結(jié)果與討論

4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性

在本試驗(yàn)條件下進(jìn)行測定，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度對響應(yīng)值（峰面積）進(jìn)行線性回歸，以乙腈為定容介質(zhì)配制的標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=203887.812674*x+ 851.348676，R2=0.998，r=0.999；以 空白基質(zhì)溶液為定容介質(zhì)配制的標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=202558.597908*x+ 3487.782117，R2=0.998，r=0.999。

4.2 基質(zhì)效應(yīng)

標(biāo)準(zhǔn)曲線由5 個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)組成（不包括原點(diǎn)），濃度范圍為0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.020 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L。按照乙腈標(biāo)準(zhǔn)溶液、空白基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的順序進(jìn)行檢測，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度對響應(yīng)值（峰面積）進(jìn)行線性回歸。

結(jié)果表明異菌脲在番茄中檢測基質(zhì)效應(yīng)不明顯，基質(zhì)效應(yīng)ME的絕對值為0.7%。

4.3 準(zhǔn)確度與精密度

空白番茄中三個(gè)添加水平0.05 mg/kg、0.20 mg/kg、1.0 mg/kg的平均回收率為84%、96%、85%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為11%、6%、7%。

4.4 LOQ

以最小添加濃度作為方法的LOQ，異菌脲在番茄中的LOQ為0.05 mg/kg。

4.5 專屬性

所測乙腈、空白基質(zhì)樣品在異菌脲出峰區(qū)間的信號(hào)均小于LOQ水平響應(yīng)的30%。

4.6 檢測方法有效性評(píng)價(jià)

本驗(yàn)證試驗(yàn)建立了番茄異菌脲殘留分析方法，番茄樣品用乙腈提取，佛洛里硅土凈化，采用Agilent 1290-Ultivo 超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定，采用保留時(shí)間（3.120 min）及定性離子對（330.0/245.0和330.0/287.9）定性，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線-外標(biāo)法定量（定量離子對330.0/245.0）。試驗(yàn)結(jié)果滿足《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》（NY/T 788-2018）對殘留檢測方法的要求，適合番茄中異菌脲殘留的檢測。