白 翠，胡澤宇，王 楠，鄭 聰，李海燕，刁鵬翔，張夏萍

1.吉林省動物疫病預(yù)防控制中心，吉林長春 130062；2. 吉林市龍?zhí)秴^(qū)江北鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，吉林吉林市 132000；3.吉林省通化市二道江區(qū)畜牧獸醫(yī)總站，吉林通化 134000；4.吉林市昌邑區(qū)兩家子鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，吉林吉林市 132000

筆者通過某牛場送檢的16頭份牛的血清樣品，共計32 份血清（其中16 份為2020 年3 月3 日采集、16 份為2020 年4 月2 日采集）進行了試管凝集檢測。具體方法及結(jié)果如下。

1 試管凝集試驗

1.1 試驗前的準備

1.1.1 樣品稀釋液首先配制0.9%生理鹽水，然后加入0.5%的石炭酸，高壓滅菌后備用。

1.1.2 準備試管

將準備好的一次性試管放入試管架中并編號。除了樣品管還要準備5 支比濁管。

1.1.3 標準抗原

本實驗室使用的抗原廠商是北京愛德士公司，生產(chǎn)批號為421。

1.1.4 被檢血清

送檢的32 份牛血清。

2 試驗操作過程

2.1 稀釋被檢血清

2.1.1 確定稀釋倍數(shù)

牛、馬、駱駝稀釋用1:50，1:100，1:200，1:400(4 個稀釋度)；豬、山羊、綿羊和狗用1:25，1:50，1:100，1:200(4 個稀釋度)。大規(guī)模檢疫時也可用2 個稀釋度，即牛、馬、駱駝用1:50，1:100，豬、山羊、綿羊和狗用1:25，1:50， 由于本次試驗檢測的畜種為牛，所以我們進行了1:50，1：100，1:200，1:400 這4 個稀釋倍數(shù)。

2.1.2 稀釋血清

2.1.2.1 每份被檢血清用4 支試管，標記編號。第I 管加1.2 mL 稀釋液，第2 ～4 管各加人0.5 mL稀釋液。

2.1.2.2 取被檢血清0.05 mL，加入第1 管，充分混勻后棄去0.25 mL。

2.1.2.3 從第1 管中吸取0.5 mL 加人到第2 管，混合均勻后，再從第2 管吸取0.5 mL 至第3 管，加入此配比稀釋液至第4 管，從第4 管棄去0.5 mL，稀釋完畢。

2.1.2.4 此時，從第1 ～4 管的血清稀釋度分別為1:25，1:50，1:100，1:200。

2.2 加入抗原

將 0.5 mL 抗原(1:20) 加入已稀釋好的各血清樣品管中，此時的血清稀釋度變?yōu)?:50，1:100，1:200，1:400。

2.3 比濁管的配置

每次試驗均要設(shè)置比濁管，用于最好結(jié)果的判斷。比濁管為5 管，分別編號1，2，3，4，5。

試管1 中加入1 mL 0.5%的石炭酸生理鹽水。

試管2 中加入0.25 mL 1:40 倍稀釋好的抗原，再加入0.75 mL 0.5%的石炭酸生理鹽水。

試管3 中加入0.5 mL 1:40 倍稀釋好的抗原，再加入0.5 mL 0.5%的石炭酸生理鹽水。

試管4 中加入0.75 mL 1:40 倍稀釋好的抗原，再加入0.25 mL 0.5%的石炭酸生理鹽水。

試管5 中加入1 mL 1:40 倍稀釋好的抗原。

將所有試管充分混勻后，置于37 ℃溫箱中反應(yīng)22 ～24 h，然后取出記錄結(jié)果。

3 判定標準

3.1 菌體完全凝集，100%下沉，上層液體100%清亮。我們用“++++”表示。

3.2 菌體幾乎完全凝集，上層液體75%清亮。我們用“+++”表示。

3.3 菌體凝集顯著，液體50%清亮。我們用“++”表示。

3.4 凝集物有沉淀，液體25%清亮。我們用“+”表示。

3.5 凝集物無沉淀，液體均勻混濁。為陰性“-”。

3.6 牛、馬、鹿和駱駝1:100 血清稀釋，豬、山羊、綿羊和狗1:50 血清稀釋，出現(xiàn)“++”以上凝集現(xiàn)象時，受檢血清判定為陽性。

3.7 牛、馬、鹿、駱駝1:50 血清稀釋，豬、山羊、綿羊、狗1:25 血清稀釋，出現(xiàn)“++”以上凝集現(xiàn)象時，受檢血清判定為可疑反應(yīng)；可疑反應(yīng)家畜經(jīng)3 ～4周后重檢，如果仍為可疑，該牛、羊判為陽性。

4 結(jié)果判定

本實驗為32 份血清，分別編號1 ～32，其中1 ～16 為第一次采集樣品，17 ～32 位一個月后相同牛的再次采集樣本。

結(jié)果顯示1，6，12，13，16 樣本牛為強陽性（++++），一個月后的抗體效價仍為強陽性。2、8、10、11、14、15 號樣本為陰性，一個月后的抗體效價仍為陰性。

3 號在1:200 的時候由++++變?yōu)?++，而一個月后的效價在相同稀釋倍數(shù)時變?yōu)?。

4 號在1:200 的時候為+，一個月后的效價為陰性。

5 號1:200 為+++，一個月后為++。

7 號1:200 為++，一個月后為陰性。

9 號由+變?yōu)?。

從實驗結(jié)果來看，效價變化并不明顯。據(jù)送檢樣品廠主口述，該廠于2019 年8 月引進該批次牛，進場后沒有進行布病疫苗免疫，那么就有可能是自然感染。2020 年年初有8 頭牛有流產(chǎn)的癥狀。從16 份樣本的結(jié)果來看，強陽性的那6 頭可能是8頭發(fā)病牛中的一員。