許艷麗，魯建聰，宋 潔,2

(1.中國(guó)科學(xué)院 東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所，黑龍江 哈爾濱 150081；2.哈爾濱商業(yè)大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150028)

0 引 言

大豆長(zhǎng)期連作會(huì)使土壤產(chǎn)生對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)(Soybean cyst nematodes,SCN)的抑制性，即人們所說(shuō)的“線蟲(chóng)抑制性土壤”[1-2]，大豆是我國(guó)北方的優(yōu)勢(shì)作物，黑龍江省是我國(guó)大豆的最大產(chǎn)區(qū)，播種面積占全國(guó)的50%左右[3]。在大豆主產(chǎn)區(qū)由于種植歷史悠久，大豆胞囊線蟲(chóng)病發(fā)生比較普遍，在大豆適宜種植區(qū)常連作或迎茬種植，近年“線蟲(chóng)抑制性土壤”這種現(xiàn)象在我國(guó)大豆產(chǎn)區(qū)也有報(bào)道[4-7]，孫漫紅等研究認(rèn)為大豆胞囊線蟲(chóng)抑制性土壤中空胞囊數(shù)量增多是由食線蟲(chóng)真菌所致[8]。Crump認(rèn)為大豆胞囊線蟲(chóng)病的土壤中雌蟲(chóng)寄生真菌有厚垣輪枝菌(Verticilliumchlamydosporium)等[9]，孫玉秋等研究發(fā)現(xiàn)連作15 a和16 a豆田大豆胞囊線蟲(chóng)二齡幼蟲(chóng)(J2)蟲(chóng)口密度低于迎茬和輪作田,二齡幼蟲(chóng)被毛孢菌(Hirsutellaminnesotensis)寄生率均高于其他大豆茬口[10]。宋潔等分離了大豆22 a連作、3 a連作和22 a小麥-玉米-大豆輪作土壤中大豆胞囊線蟲(chóng)寄生真菌，發(fā)現(xiàn)22 a連作土壤中厚垣輪枝菌遠(yuǎn)高于3 a連作和22 a連作的土壤。在22 a連作和輪作土中可檢測(cè)到淡紫擬青霉，但3 a連作土中則沒(méi)有分離到該菌。連作22 a大豆田分離的大豆胞囊線蟲(chóng)卵寄生真菌中厚垣輪枝菌和淡紫擬青霉明顯高于連作3 a和輪作，因此，認(rèn)為厚垣輪枝菌和淡紫擬青霉是該抑制性土壤中的優(yōu)勢(shì)寄生真菌[11]。孫玉秋等在黑龍江省、吉林省等地的大豆田土壤中分離到的真菌中淡紫擬青霉最多[12]。王克寧等從遼寧省、吉林省、黑龍江省、河北省、內(nèi)蒙古自治區(qū)和山東省等地區(qū)的大豆連作土壤中分離到了真菌19個(gè)屬，也包括淡紫擬青霉、厚垣輪枝菌和鐮孢菌屬[12]。

隨著研究的不斷深入，人們逐漸將研究重點(diǎn)轉(zhuǎn)移到這些寄生真菌對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)的抑制作用上。厚垣輪枝菌作為兼性寄生菌，可寄生在大豆胞囊線蟲(chóng)的各個(gè)蟲(chóng)態(tài)，自然條件下可控制植物寄生線蟲(chóng)種群密度，有報(bào)道厚垣輪枝菌在黑龍江省、吉林省和遼寧省大豆田為優(yōu)勢(shì)大豆胞囊線蟲(chóng)卵寄生真菌[13]。趙曉輝等離體研究認(rèn)為，大豆胞囊線蟲(chóng)抑制性土壤中分離的厚垣輪枝菌對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)3號(hào)生理小種二齡幼蟲(chóng)有強(qiáng)烈致死作用[14]。范圣長(zhǎng)等在我國(guó)北方大豆田土中分離出了厚垣輪枝菌，該菌對(duì)線蟲(chóng)胞囊寄生率達(dá)100%[15]。淡紫擬青霉菌也能寄生多種植物線蟲(chóng)的卵和幼蟲(chóng)等，該菌在代謝過(guò)程中產(chǎn)生抑制線蟲(chóng)活性的物質(zhì)，以此抑制植物線蟲(chóng)卵孵化，并強(qiáng)烈抑制J2活性，減少植物線蟲(chóng)密度，被認(rèn)為是重要的生防真菌[16]。孫漫紅等報(bào)道了淡紫擬青霉M-14菌株代謝產(chǎn)物可強(qiáng)烈抑制大豆胞囊線蟲(chóng)卵孵化[17]。鐮孢菌屬(Fusariumspp.)是一類龐大真菌，可引起作物枯萎病和根腐病，該屬的某些種也是植物病原物的生防菌。陳立杰等在6 a連作大豆田分離真菌，發(fā)現(xiàn)鐮孢菌分離比例最高[18]。趙曉輝等也報(bào)道鐮孢菌在大豆胞囊線蟲(chóng)抑制性土壤中和線蟲(chóng)胞囊上分離頻率最高，其中禾谷鐮孢菌(F.graminearum)和尖鐮孢菌芬芳變種(F.oxysporumvar.，現(xiàn)更名為芬芳鐮孢(Fusariumredolens))可明顯抑制大豆胞囊線蟲(chóng)3號(hào)生理小種卵孵化，并對(duì)J2有致死作用[19]。在美國(guó)也有報(bào)道稱鐮孢菌是大豆胞囊線蟲(chóng)胞囊的優(yōu)勢(shì)寄生菌[20]。

我國(guó)以往研究寄生真菌對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)的抑制作用多是以3號(hào)生理小種為靶目標(biāo)，但除3號(hào)小種外，其他小種在我國(guó)也有分布，其中4號(hào)小種在我國(guó)分布也很普遍，該小種主要分布在山西省、江蘇省、山東省、河南省、河北省及安徽省等地[5]，且4號(hào)生理小種毒性較強(qiáng)。因此，本研究旨在探討北方分離的大豆胞囊線蟲(chóng)優(yōu)勢(shì)寄生真菌對(duì)在其他地區(qū)分布的4號(hào)小種毒性，明確寄生真菌對(duì)其抑制作用，采用大豆胞囊線蟲(chóng)優(yōu)勢(shì)寄生菌發(fā)酵液，測(cè)定對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)4號(hào)小種胞囊、卵孵化抑制和對(duì)二齡幼蟲(chóng)致死作用，為我國(guó)大豆生產(chǎn)中胞囊線蟲(chóng)的生物生態(tài)防控提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 供試真菌和供試線蟲(chóng)

供試真菌有淡紫擬青霉(Paecilomyceslilacinus)4個(gè)菌株(P-1、P-V、P-40和P-E)、鐮孢菌屬(Fusariumspp.)4個(gè)菌株(F-1、F-5、F-9和F-V)和厚垣輪枝菌(Verticilliumchlamydosporium)4個(gè)菌株(V-25、V-1、V-2和V-21)。供試真菌菌株均由中國(guó)科學(xué)院黑土區(qū)農(nóng)業(yè)生態(tài)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室從大豆胞囊線蟲(chóng)抑制性土壤中分離、鑒定并保存。供試大豆胞囊線蟲(chóng)4號(hào)生理小種取自山西太原，在溫室盆栽大豆苗上保存。

1.2 寄生真菌發(fā)酵原液制備

菌株活化供試培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)、馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液(PDB)[21]。挑取供試菌株的菌絲在PDA培養(yǎng)基上活化7 d，然后打取直徑4 mm菌塊，接種到PDB培養(yǎng)液中，30 ℃、180 r·min-1震蕩培養(yǎng)24 h，作為種子液。取種子液接種到PDB中，再以相同條件震蕩培養(yǎng)5d，4 ℃離心20 min (10 000 r·min-1)，用細(xì)菌過(guò)濾器對(duì)上清液過(guò)濾，成為寄生真菌發(fā)酵液原液[22]。

1.3 分離大豆胞囊線蟲(chóng)胞囊和卵及制備卵和二齡幼蟲(chóng)懸浮液

取盆栽大豆根圍5～20 cm土進(jìn)行線蟲(chóng)胞囊分離。將新鮮土在燒杯中加清水?dāng)嚢?，然后浸?h后過(guò)套篩(20目和80目)，將80目篩上殘留物收集(用63%蔗糖)到離心管內(nèi)，離心5 min(2 500 r·min-1)，將殘留物過(guò)濾，挑取成熟飽滿的胞囊放4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

飽滿胞囊在套篩(200目和500目)中進(jìn)行研磨，收集殘留物，用0.5% NaClO溶液消毒，再用清水進(jìn)行沖洗，用滅菌水制備成線蟲(chóng)卵懸浮液，濃度為5 000個(gè)·mL-1，放到4℃冰箱保存。

將保存的線蟲(chóng)卵放置在420目篩網(wǎng)布上，放入內(nèi)裝有0.4 mmol·L-1ZnCl2溶液的卵孵化池中，在25 ℃培養(yǎng)箱里孵化，根據(jù)試驗(yàn)要求制成相應(yīng)濃度的J2懸浮液。

1.4 寄生真菌發(fā)酵原液和稀釋液對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)胞囊孵化毒力測(cè)定

將分離出的新鮮飽滿胞囊放置于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)(每孔放10個(gè))，在每孔里分別加入2 mL寄生真菌發(fā)酵原液、5×、10×、20×和50×稀釋液，對(duì)照加滅菌水，3次重復(fù)，25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每隔3d記錄孵化出線蟲(chóng)數(shù)量，計(jì)算孵化抑制率。

線蟲(chóng)孵化抑制率(%)=(對(duì)照孵化線蟲(chóng)數(shù)-處理孵化線蟲(chóng)數(shù))/對(duì)照孵化線蟲(chóng)數(shù)×100%

1.5 寄生真菌發(fā)酵原液和稀釋液對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)卵孵化毒力測(cè)定

在細(xì)胞培養(yǎng)板中加入大豆胞囊線蟲(chóng)卵懸浮液，每孔加0.4 μL(約200粒)，各孔再分別加入2 mL寄生真菌發(fā)酵液原液、5×、10×、20×和50×稀釋液，以滅菌水為對(duì)照，3次重復(fù)，在25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每隔3 d記錄孵化出線蟲(chóng)數(shù)。并計(jì)算線蟲(chóng)孵化率和相對(duì)抑制率。

線蟲(chóng)孵化率(%)=孵化線蟲(chóng)數(shù)/供試卵數(shù)×100%

相對(duì)抑制率(%)=(對(duì)照孵化率-處理孵化率)/對(duì)照孵化率×100%

1.6 寄生真菌發(fā)酵原液和稀釋液對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)J2毒力測(cè)定

在細(xì)胞培養(yǎng)板中加入大豆胞囊線蟲(chóng)J2懸浮液(每孔約加入50條)，各孔里再加入2mL寄生真菌發(fā)酵液原液或5×、10×、20×和50×稀釋液，以滅菌為對(duì)照，3次重復(fù)，25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。分別在1 h、6 h、12 h、24 h、48 h和72 h后記錄線蟲(chóng)死亡數(shù)量，并計(jì)算線蟲(chóng)死亡率。

線蟲(chóng)死亡率(%)=死亡線蟲(chóng)數(shù)/供試線蟲(chóng)數(shù)×100%

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用Microsoft Excel 2007和SPSS 17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析及處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 寄生真菌發(fā)酵液對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)胞囊孵化的毒力

2.1.1 寄生真菌發(fā)酵原液對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)胞囊孵化抑制作用。孵化處理20 d后對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)在真菌發(fā)酵原液中胞囊孵化調(diào)查顯示，3個(gè)屬寄生真菌發(fā)酵原液對(duì)線蟲(chóng)胞囊孵化均有抑制作用(表1)。對(duì)胞囊孵化抑制率在50.6%～85.6%；其中鐮孢菌F-9菌株發(fā)酵液和淡紫擬青霉的P-E菌株發(fā)酵液的抑制率在相同菌中抑制率最高，分別是82.6%和85.6%，均與相同菌中其他3個(gè)菌株差異顯著(P<0.05)。

2.1.2 寄生真菌發(fā)酵稀釋液對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)胞囊孵化抑制作用。孵化20 d后對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)在寄生真菌發(fā)酵稀釋液中胞囊孵化結(jié)果調(diào)查表明，12個(gè)菌株稀釋液均對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)胞囊孵化有抑制作用(表2)，其抑制作用隨發(fā)酵菌液的稀釋倍數(shù)升高而逐漸降低，5×稀釋液的抑制作用較其他稀釋濃度都強(qiáng)，50×稀釋液的抑制作用最弱。5×稀釋液中， F-9、P-E、V-25、V-2菌液抑制率都接近80%，顯著高于相同菌的其他菌株；50×發(fā)酵稀釋液對(duì)胞囊仍有抑制作用，抑制率范圍在28.3%～39.3%。3種菌液里F-9、P-E和V-25在不同稀釋倍數(shù)菌液中，都對(duì)胞囊孵化有明顯的抑制作用。

表1 寄生真菌發(fā)酵原液中大豆胞囊線蟲(chóng)胞囊孵化抑制率Table 1 Hatch inhibition rates of SCN cyst in fermentation filtrates of parasitic fungi

注:數(shù)字后字母為Duncan′S新復(fù)極差測(cè)驗(yàn)結(jié)果，小寫(xiě)英文字母表示差異顯著(P<0.05),字母相同為差異不顯著。下同。

Note：Means in column followed by the same letter indicate no significant differences according to the Duncan′s multiple range test.The same is as below.

表2 寄生真菌發(fā)酵稀釋液中大豆胞囊線蟲(chóng)胞囊孵化抑制率Table 2 Hatch inhibition rates of SCN cyst of race 4 in fermentation filtrate diluents of parasitic fungi

2.2 寄生真菌發(fā)酵液對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)卵孵化毒力

2.2.1 寄生真菌發(fā)酵原液對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)卵孵化抑制作用。處理20 d后對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)在寄生真菌發(fā)酵原液中卵孵化結(jié)果調(diào)查顯示，12個(gè)寄生真菌菌株發(fā)酵原液對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)卵孵化均具有抑制性，在不同的發(fā)酵液之間，抑制作用不同(表3)。12個(gè)寄生真菌發(fā)酵原液卵孵化率在2.8%～4.4%，相對(duì)抑制率在51.3%～69.7%，卵孵化率均低于滅菌水(9.1%)，且與滅菌水的卵孵化率存在顯著差異(P<0.05)；其中P-E和V-25的發(fā)酵原液卵孵化率最低，為2.8%，相對(duì)抑制率最高，為69.7%，與其他發(fā)酵原液相比存在顯著差異，說(shuō)明P-E和V-25發(fā)酵原液對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)卵孵化具有明顯的抑制作用。

表3 寄生真菌發(fā)酵原液中大豆胞囊線蟲(chóng)卵孵化率和相對(duì)抑制率Table 3 Hatch rates and relative hatch inhibition rates of SCN eggs in fermentation filtrate of parasitic fungi

2.2.2 寄生真菌發(fā)酵稀釋液對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)卵孵化抑制作用。處理20 d后對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)在寄生真菌發(fā)酵稀釋液中卵孵化結(jié)果調(diào)查表明，卵孵化率隨寄生真菌菌液稀釋倍數(shù)的增加而升高(表4)，卵孵化抑制率相反(表5)。5×稀釋液中卵孵化量最低，相對(duì)孵化抑制率高，50×稀釋液卵孵化量高，卵孵化抑制率低，但均與對(duì)照產(chǎn)生顯著性差異(P<0.05)。

表4 寄生真菌發(fā)酵稀釋液中大豆胞囊線早卵孵化率Table 4 Hatch rates of SCN eggs in fermentation filtrate diluents of parasitic fungi

5×稀釋液中F-9發(fā)酵稀釋液孵化率最低(2.3%)，相對(duì)抑制率最高(83.0%)，代謝物F-5、V-2孵化率均最高(3.0%)，相對(duì)抑制率最低(78.0%)。而在50×稀釋液中，V-21卵孵化率最高(7.2%)，相對(duì)抑制率最低(47.6%)，代謝物F-5孵化率最低(6.1%)，孵化抑制率最高(55.5%)。10×菌液中，孵化率范圍為3.1%～4.1%，相對(duì)抑制率范圍70.1%～77.4%，20×稀釋液中，孵化率范圍在5.1%～5.8%，相對(duì)抑制率范圍在57.9%～62.8%，各菌液的孵化抑制率和相對(duì)抑制率分布較為均勻，但均與對(duì)照孵化率13.7%差異顯著(表4)(P<0.05)。

12株寄生真菌發(fā)酵液5×稀釋液中，對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)卵相對(duì)抑制率達(dá)到78.0%以上， 50×稀釋液中，卵相對(duì)抑制率都在47.6%以上，對(duì)卵孵化相對(duì)抑制作用顯著。

表5 寄生真菌稀釋液中SCN卵孵化相對(duì)抑制率Table 5 Relative hatch inhibition rates of SCN eggs in fermentation filtrate diluents of parasitic fungi

2.3 寄生真菌發(fā)酵液對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)J2毒力

2.3.1 寄生真菌發(fā)酵原液對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)J2毒力。處理72 h后對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)在寄生真菌發(fā)酵原液中J2死亡率調(diào)查表明，滅菌水對(duì)照里J2在處理12 h時(shí)才有19%的死亡率，而處理1 h時(shí)，12株寄生菌發(fā)酵液里就有10株有J2死亡，說(shuō)明它們對(duì)J2的擊倒作用迅速；處理6 h開(kāi)始12株寄生真菌菌株發(fā)酵液里都有J2死亡，之后12株寄生菌發(fā)酵液均對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)二齡幼蟲(chóng)致死作用高于滅菌水，并隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)抑制作用增強(qiáng)；在48 h時(shí)， F-9發(fā)酵原液中J2死亡率高達(dá)97.3%，與對(duì)照差異顯著；在72 h時(shí)12株寄生菌發(fā)酵液的J2死亡率都在98%以上，其中在菌株F-9、F-V、P-E、P-V、V-25、V-2和V-21發(fā)酵原液中J2死亡率達(dá)到100%，12株寄生菌都與對(duì)照差異顯著(表6)。

2.3.2 寄生真菌發(fā)酵稀釋液對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)J2毒力。處理后對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)在寄生真菌發(fā)酵稀釋液中J2死亡率調(diào)查表明，12個(gè)寄生菌株發(fā)酵稀釋液對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)J2均具有致死作用，并隨著發(fā)酵稀釋液倍數(shù)的升高，J2的死亡率在降低，但隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，J2死亡率逐步升高(7)。在不同的稀釋倍數(shù)中，5倍稀釋液毒力最高，50倍的最弱。

在處理1 h時(shí)5倍-20倍發(fā)酵稀釋液中就有 J2出現(xiàn)死亡，6 h時(shí)所有12個(gè)菌株的5倍～50倍發(fā)酵稀釋液中均有J2出現(xiàn)死亡，而此時(shí)滅菌水中仍沒(méi)有出現(xiàn)J2死亡。滅菌水對(duì)照在12 h以后開(kāi)始出現(xiàn)J2死亡，但死亡率遠(yuǎn)低于12個(gè)菌株。在12個(gè)菌株在12 h、24 h、72 h的5倍和10倍發(fā)酵稀釋液里和48 h的5倍、10倍和20倍發(fā)酵稀釋液里J2死亡率都明顯高于對(duì)照，與滅菌水差異顯著(P<0.05)；12個(gè)菌株中F-9和V-25對(duì)J2致死作用明顯，在24 h時(shí)，5倍稀釋液中，J2死亡率達(dá)到50%以上，高于其他發(fā)酵稀釋液。在72 h時(shí)，菌株F-9、P-E、V-25和V-21的5倍稀釋液中J2死亡率已經(jīng)達(dá)到了93%～96%，均與對(duì)照差異顯著(P<0.05)。F-9、P-E、V-25發(fā)酵液在不同時(shí)段不同稀釋倍數(shù)中對(duì)J2的抑制作用明顯高于其他菌株。

表6 寄生真菌發(fā)酵原液中大豆胞囊線蟲(chóng)J2死亡率Table 6 Death rate of SCN J2 in fermentation filtrates of parasitic fungi

表7 寄生真菌發(fā)酵稀釋液中大豆胞囊線蟲(chóng)J2死亡率Table 7 Death rate of SCN J2 in fermentation filtrate diluents of parasitic fungi

3 結(jié)論和討論

供試的12株寄生真菌發(fā)酵液對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)4號(hào)小種都具有抑制作用，能夠抑制其胞囊和卵孵化，并對(duì)二齡幼蟲(chóng)具有致死作用。其中，菌株F-9、P-E、V-25發(fā)酵原液及稀釋發(fā)酵液對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)作用顯著，胞囊孵化抑制率高的可達(dá)85%以上，稀釋發(fā)酵液對(duì)卵孵化相對(duì)抑制率可達(dá)83.0%，對(duì)卵抑制作用高于對(duì)胞囊抑制作用。原液在72 h時(shí)，J2致死率達(dá)到100%，作用顯著。

有關(guān)生防真菌代謝物(發(fā)酵液)對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)作用機(jī)制尚不完全明確，有報(bào)道代謝物產(chǎn)生酶類物質(zhì)、產(chǎn)生毒素及其他對(duì)線蟲(chóng)有毒害的次生代謝物質(zhì)[23]，認(rèn)為生防菌代謝物中存在具有抑制線蟲(chóng)或殺死線蟲(chóng)的活性物質(zhì)。不同真菌產(chǎn)生不同的代謝產(chǎn)物，因此殺線活性也不盡相同。淡紫擬青霉菌可寄生胞囊線蟲(chóng)等多種植物病原線蟲(chóng)的各個(gè)蟲(chóng)態(tài)，并在代謝過(guò)程中產(chǎn)生具有殺線蟲(chóng)活性的物質(zhì)，抑制線蟲(chóng)卵孵化，并強(qiáng)烈抑制二齡幼蟲(chóng)活性，從而控制線蟲(chóng)密度[16]。鐮孢菌是一類龐大的真菌類群，種和同種菌株之間的特性也存在很大差異，在本研究中不同菌株間對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)抑制作用存在差異。Chen等[24]研究在大豆胞囊線蟲(chóng)胞囊上分離獲得的茄腐鐮孢菌(Fusariumsolani)的發(fā)酵液對(duì)二齡幼蟲(chóng)有毒力作用，而尖鐮孢菌(F.oxysporum)對(duì)二齡幼蟲(chóng)和卵均沒(méi)有抑制作用。試驗(yàn)中的3種寄生真菌對(duì)線蟲(chóng)的胞囊和卵孵化有抑制作用，也對(duì)二齡幼蟲(chóng)具有致死作用，在生防真菌中應(yīng)用發(fā)酵液對(duì)胞囊孵化的作用尤為重要，胞囊可在土壤中長(zhǎng)期存活，抑制其孵化即可抑制對(duì)寄主的侵染，守住第一道防線。生產(chǎn)上應(yīng)用應(yīng)以發(fā)酵液為主，活體菌劑雖然也有效，但應(yīng)用量大，且易受土壤環(huán)境因素影響。因此，應(yīng)加快開(kāi)發(fā)寄生菌發(fā)酵濾液，促進(jìn)病蟲(chóng)害生物防治技術(shù)，改善農(nóng)田生態(tài)環(huán)境質(zhì)量[25]。連作大豆田會(huì)引起大豆根際微生物群落結(jié)構(gòu)的改變，近年我國(guó)在該領(lǐng)域研究取得了許多進(jìn)展[26-27]，還應(yīng)在利用生態(tài)環(huán)境控制作物土傳病蟲(chóng)害上開(kāi)展深入研究，為大豆胞囊線蟲(chóng)等植物寄生線蟲(chóng)的生物生態(tài)控制提供理論依據(jù)。

致謝

感謝山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所劉學(xué)義研究員提供大豆胞囊線蟲(chóng)4號(hào)生理小種。