李 營(yíng) 阮 瑞 艾 成 岳華梅 葉 歡 杜 浩 李創(chuàng)舉

(1. 上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院, 上海 201306; 2. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所, 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水生物多樣性保護(hù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 武漢 430223; 3. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院深圳農(nóng)業(yè)基因組研究所, 深圳 518120)

鱘屬于硬骨魚綱(Osteicthyes)、輻鰭亞綱(Actinopterygii)、軟骨硬鱗總目(Chondrostei)、鱘形目(Acipenseriformes), 包括匙吻鱘科(Polyodontidae)和鱘科(Acipenseridae)。鱘卵做成的魚子醬富含人體必需氨基酸、多種不飽和脂肪酸、維生素等物質(zhì),營(yíng)養(yǎng)價(jià)值極高, 享有“黑色黃金”的美譽(yù)。隨著過(guò)度捕撈和棲息地破壞等, 鱘野生資源量快速下降, 而國(guó)際上對(duì)鱘魚子醬的需求逐年增加[1]。因此, 鱘人工養(yǎng)殖業(yè)越來(lái)越重要, 并已成為鱘魚子醬等消費(fèi)品的主要來(lái)源。

鱘雌雄個(gè)體之間沒(méi)有明顯的第二性征, 無(wú)法從形態(tài)上辨別雌雄。目前, 其性別鑒定方法主要有超聲波技術(shù)探測(cè)法[2,3]、內(nèi)窺鏡觀察法[2,4]、外科手術(shù)性腺檢查法[5]和血液激素水平測(cè)量法[6]。但是, 一般在鱘3—5齡時(shí)通過(guò)腹腔外科手術(shù)等方法鑒定時(shí)具有較高的準(zhǔn)確性[5]。此外, 通過(guò)ISSR(Inter Simple Sequence Repeat)、AFLP(Amplified Fragment Length Polymorphisms)和RAPD(Random Amplification of Polymorphic DNA)等不同分子標(biāo)記技術(shù)來(lái)檢測(cè)了西伯利亞鱘(Acipenser baeriiBrandt)、俄羅斯鱘(Acipenser gueldenstaedtiiBrandt & Ratzeburg)、小體鱘(Acipenser ruthenusLinnaeus)、意大利鱘(Acipenser naccariiBonaparte)、湖鱘(Acipenser fulvescensRafinesque)、波斯鱘(Acipenser percicusBorodin)、歐洲鰉(Huso husoLinnaeus)、施氏鱘(Acipenser schrenckiiBrandt)和中華鱘(Acipenser sinensisGray)等物種的雌雄個(gè)體基因組差異, 都未獲得鱘性別特異性DNA分子標(biāo)記[7—12]。由于不能及早鑒定鱘性別, 導(dǎo)致人工養(yǎng)殖過(guò)多雄性個(gè)體而造成資源浪費(fèi), 增加養(yǎng)殖成本。

研究發(fā)現(xiàn)Dmrt1、Sox9、Foxl2等性別分化相關(guān)基因在鱘雌雄個(gè)體或不同發(fā)育階段性腺組織上呈現(xiàn)性別二態(tài)性表達(dá)[13—18]。目前, 已初步對(duì)施氏鱘[19]、中華鱘[20]、意大利鱘[21]和俄羅斯鱘[22,23]等性腺進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析, 以及Zhang等[24]對(duì)施氏鱘性腺中miRNAs進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)精巢和卵巢分別存在71和46個(gè)偏好表達(dá)的miRNAs, 以上研究為鱘性腺發(fā)育提供了大量的遺傳信息。而鱘性成熟時(shí)間長(zhǎng)、雌雄性腺發(fā)育不同步, 其性腺發(fā)育相關(guān)分子基礎(chǔ)研究仍相對(duì)薄弱。

施氏鱘隸屬于鱘科、鱘屬(Acipenser), 主要分布于黑龍江水系, 其染色體數(shù)量為(238±8)條[25]。本研究擬通過(guò)高通量測(cè)序分析人工養(yǎng)殖2齡施氏鱘個(gè)體精巢和卵巢的轉(zhuǎn)錄組表達(dá)特征, 篩選與性別決定和分化相關(guān)差異表達(dá)基因, 揭示參與鱘雌雄個(gè)體性腺發(fā)育的主要代謝通路表達(dá)模式, 為今后鱘性別分子標(biāo)記開(kāi)發(fā)和性腺發(fā)育等研究提供分子基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣本采集

采集人工養(yǎng)殖2齡施氏鱘雌雄各5尾, 取其性腺組織分別保存于液氮和Bouin’s固定液, 分別用于性腺組織轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和性腺組織石蠟切片。10尾樣本平均全長(zhǎng)為(82.6±3.2) cm, 平均體重為(1.89±0.43) kg。通過(guò)肉眼可以分辨其性腺組織和脂肪,雌性性腺呈淺紅色且表面有褶皺, 雄性性腺呈白色且表面光滑。

以上實(shí)驗(yàn)魚采樣過(guò)程遵照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利及使用制度, 并獲得中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 性腺組織石蠟切片

將性腺組織保存于Bouin’s溶液置4℃固定24h,并轉(zhuǎn)移至70%乙醇長(zhǎng)期保存?zhèn)溆谩９潭ê蟮臉悠方?jīng)70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ梯度脫水, 二甲苯透化,浸蠟, 包埋, 連續(xù)切片, 切片厚度為4 μm。將切片進(jìn)行二甲苯脫蠟, 乙醇濃度由高到低水分浸透, 蘇木精-伊紅染色, 乙醇梯度脫水, 中性樹(shù)膠封片, 于DM5000B正置熒光顯微鏡(Leica, 德國(guó))下觀察拍照。

1.3 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序與分析

利用RNeasy Plus Mini Kit試劑盒(QIAGEN, 德國(guó))提取性腺組織總RNA, 并經(jīng)過(guò)1.5%瓊脂糖凝膠電泳初步分析RNA降解程度以及是否有污染, Nano-Drop Lite超微量核酸檢測(cè)儀(Thermo Scientific, 美國(guó))檢測(cè)其濃度和純度。將樣品送往北京諾禾致源科技股份有限公司進(jìn)一步進(jìn)行樣品質(zhì)檢、測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建和Illumina HiSeq4000平臺(tái)進(jìn)行雙向150 bp測(cè)序。

對(duì)高通量測(cè)序的原始序列進(jìn)行低質(zhì)量序列過(guò)濾得到高質(zhì)量有效序列。由于施氏鱘無(wú)參考基因組數(shù)據(jù), 本研究通過(guò)Trinity軟件[26]對(duì)有效序列進(jìn)行組裝得到施氏鱘轉(zhuǎn)錄本, 并取每個(gè)基因中最長(zhǎng)的轉(zhuǎn)錄本作為Unigene。結(jié)合pfam和uniprot數(shù)據(jù)庫(kù), 利用Trinity軟件自帶的transdecoder模塊對(duì)Unigenes進(jìn)行開(kāi)放閱讀框(Open Reading Frame, ORF)預(yù)測(cè)并翻譯成蛋白序列, 將能夠預(yù)測(cè)ORF的Unigenes集合作為后續(xù)分析的基因轉(zhuǎn)錄本。將得到的蛋白序列與Swissport、KEGG、Interproscan、GO數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)與功能注釋。基因表達(dá)水平通過(guò)RSEM軟件[27]以上述的基因轉(zhuǎn)錄本作為參考序列進(jìn)行分析。采用DESeq軟件[28]進(jìn)行基因表達(dá)差異分析, 篩選標(biāo)準(zhǔn)為P＜0.001和|log2(fold-change)|≥1。使用Kobas軟件[29]進(jìn)行差異表達(dá)基因KEGG富集分析, 顯著性通過(guò)Benjamini & Hochberg方法校正。

表 1 實(shí)時(shí)定量PCR引物序列表Tab. 1 Primer sets used for quantitative real-time PCR

1.4 實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組差異表達(dá)基因

依據(jù)轉(zhuǎn)錄組差異表達(dá)分析結(jié)果, 選取2個(gè)與性別分化相關(guān)和10個(gè)參與卵巢類固醇合成相關(guān)的差異表達(dá)基因進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證。根據(jù)轉(zhuǎn)錄組的基因序列通過(guò)Oligo7設(shè)計(jì)引物。選擇擴(kuò)增效率在90%—110%且相關(guān)系數(shù)R2＞0.98的引物作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的引物(引物序列如表 1)。利用PrimerScript?RT reagent Kit With gDNA Eraser試劑盒(TaKaRa, 日本)合成cDNA模板, 使用TB?Premix ExTaqTMII(Takara, 日本)配置20 μL反應(yīng)體系, 體系包括TB Premix ExTapⅡ 10 μL、ROX Reference Dye Ⅱ0.4 μL、引物分別為 0.8 μL、cDNA模版2 μL、ddH2O 6 μL。利用QuantStudio6 Flex Real time PCR儀(Ap-plied Biosystems, 美國(guó))進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng), 反應(yīng)程序: 95℃ 2min; 95℃ 15s, 60℃ 15s, 72℃ 15s,共40個(gè)循環(huán)。實(shí)驗(yàn)中每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)重復(fù)及空白對(duì)照, 以β-actin作為內(nèi)參基因, 利用2-ΔΔCt方法計(jì)算目的基因在樣品中的相對(duì)表達(dá)量, 用SPSS 20.0軟件的Kruskal-Wallis檢驗(yàn)法統(tǒng)計(jì)其顯著性。

2 結(jié)果

2.1 性腺組織石蠟切片觀察

通過(guò)石蠟切片對(duì)施氏鱘性腺進(jìn)行組織學(xué)分析,并根據(jù)魚類性腺分期標(biāo)準(zhǔn)[30]以及西伯利亞鱘性腺分期研究[31]為參考, 確定5個(gè)卵巢樣本中的生殖細(xì)胞主要以Ⅱ期的初級(jí)卵母細(xì)胞為主, 細(xì)胞質(zhì)增多且呈嗜堿性, 細(xì)胞核相應(yīng)增大, 少量核仁靠近核膜環(huán)形分布(圖 1C)?？梢耘袛?個(gè)卵巢樣本發(fā)育時(shí)期為Ⅱ期。其中4個(gè)精巢樣本(AcSc_M1、AcSc_M3、AcSc_M4和AcSc_M5)的生殖細(xì)胞多為精原細(xì)胞,少量的精原細(xì)胞開(kāi)始進(jìn)行有絲分裂, 判斷其發(fā)育時(shí)期處于Ⅱ期(圖 1A)。而精巢樣本AcSc_M2的組織切片發(fā)現(xiàn)有初級(jí)精母細(xì)胞、少量的精子細(xì)胞和延長(zhǎng)的精子細(xì)胞, 說(shuō)明其發(fā)育時(shí)期相比其他精巢靠后,認(rèn)為其處于Ⅲ期末(圖 1B)。

2.2 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)基礎(chǔ)分析

雌雄各5個(gè)性腺樣品經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄組高通量測(cè)序、原始數(shù)據(jù)過(guò)濾后共計(jì)獲得84.25 Gb有效數(shù)據(jù)。每個(gè)樣品的數(shù)據(jù)信息如表 2所示, 其有效數(shù)據(jù)已上傳至NCBI的Sequence Read Archive (SRA)數(shù)據(jù)庫(kù)(Gen-Bank登錄號(hào): PRJNA509354)。通過(guò)Trinity軟件將有效數(shù)據(jù)進(jìn)行從頭組裝、ORF預(yù)測(cè)后共計(jì)獲得99919個(gè)基因, 序列的平均長(zhǎng)度為1123 bp,N50為1909 bp。其中, 52842個(gè)基因被注釋到Swissprot蛋白數(shù)據(jù)庫(kù), 33066個(gè)和15156個(gè)基因分別被注釋到GO數(shù)據(jù)庫(kù)和KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)。

按P＜0.001和|log2(fold-change)|≥1標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行差異表達(dá)基因篩選, 共獲得19690個(gè)差異表達(dá)基因。利用樣品差異表達(dá)基因的表達(dá)量分別對(duì)樣本相關(guān)性進(jìn)行分析, 結(jié)果表明10個(gè)測(cè)序樣品按照精巢和卵巢分成兩組, 但精巢樣品AcSc_M2與其余4個(gè)精巢樣品相關(guān)性相對(duì)較低(R2＜85%; 圖 2)。因此, 在后續(xù)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析時(shí)將AcSc_M2樣本去除。

圖 1 施氏鱘性腺組織切片F(xiàn)ig. 1 Gonadal tissue sections of Amur sturgeon

2.3 篩選與性別決定和分化相關(guān)差異表達(dá)基因

選取與性別決定與分化相關(guān)基因Dmrt1、Amh、Gata4、Ar、Cyp11a、Foxl2、Figla、Bmp15、Gdf9、Gsdf、Wnt4、Sf1、Cyp19a1、Cyp11b、Lhx9以及Sox基因家族在施氏鱘轉(zhuǎn)錄組注釋結(jié)果中進(jìn)行查找比對(duì)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),Sox基因家族注釋到13個(gè)(Sox1、Sox2、Sox4、Sox5、Sox6、Sox7、Sox8、Sox9、Sox10、Sox13、Sox14、Sox17、Sox30), 其中只有Sox5和Sox9具有差異性表達(dá)且都在精巢中高表達(dá)。此外,Dmrt1、Amh、Gata4、Ar、Cyp11a在精巢中顯著高表達(dá),Foxl2、Figla、Bmp15、Gdf9在卵巢中顯著高表達(dá)。Gsdf、Wnt4、Sf1、Cyp19a1、Cyp11b、Lhx9等基因在精巢和卵巢中沒(méi)有差異性表達(dá)(圖 3)。

2.4 差異表達(dá)基因KEGG富集分析

通過(guò)差異表達(dá)基因KEGG富集分析, 發(fā)現(xiàn)19690個(gè)差異表達(dá)轉(zhuǎn)錄本被富集到410條KEGG通路, 其中56條通路被顯著富集(Q＜0.001), 圖 4所示富集最顯著的前30條通路。與性腺發(fā)育相關(guān)的代謝通路有黃體酮介導(dǎo)的卵母細(xì)胞成熟(Progesterone-mediated oocyte maturation)、卵母細(xì)胞減數(shù)分裂(Oocyte meiosis)、卵巢類固醇合成(Ovarian ste-roidogenesis)、促性腺激素釋放激素信號(hào)通路(GnRH signaling pathway)等。

卵巢類固醇合成通路共注釋到18個(gè)差異表達(dá)基因, 其中在精巢高表達(dá)的有:Lhr、Fshr、Insr、Igf1r、Ldlr、Adcy3、Adcy9、Cyp11a1、Cyp17a1、Cyp1a1和Hsd3b1, 而Adcy5、Adcy8、Cyp2j6、Hsd17b1、Cyp1b1、Bmp15和Gdf9在卵巢中高表達(dá)。差異表達(dá)基因在卵巢類固醇合成通路的分布如圖 5所示, 圖 5根據(jù)KEGG Pathway數(shù)據(jù)庫(kù)提供的參考代謝通路模式圖繪制。

2.5 差異表達(dá)基因定量PCR驗(yàn)證

選取參與卵巢類固醇合成通路的Bmp15、Cyp1a1、Cyp1b1、Gdf9、Hsd17b1、Hsd3b1、Cyp17a1、Fshr、Ldlr和Lhr, 以及與性別分化相關(guān)的Sox9、Foxl2 共12個(gè)基因進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證。結(jié)果顯示, 選取的12個(gè)基因在精巢和卵巢中呈現(xiàn)顯著差異表達(dá)且表達(dá)趨勢(shì)與轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果一致, 即Bmp15、Cyp1a1、Gdf9、Hsd17b1和Foxl2在卵巢中高表達(dá), 其余7個(gè)基因在精巢中高表達(dá)(圖 6)。以上驗(yàn)證結(jié)果表明本研究轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析結(jié)果是可靠的。

表 2 施氏鱘性腺轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)信息表Tab. 2 Information of gonadal transcriptome high-throughput sequencing from Amur sturgeon

圖 2 基于差異表達(dá)基因的表達(dá)量進(jìn)行性腺樣本相關(guān)性分析Fig. 2 Correlation analysis based on the relative expression level of differentially expressed gonadal genes

圖 3 施氏鱘轉(zhuǎn)錄組中性別決定和分化相關(guān)差異表達(dá)基因的相對(duì)表達(dá)量Fig. 3 Expression profiles of differentially expressed genes involved in sex determination and differentiation in transcriptomes from Amur sturgeon

3 討論

本研究對(duì)2齡人工養(yǎng)殖施氏鱘性腺進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組特征分析。首先通過(guò)性腺樣本石蠟切片觀察發(fā)現(xiàn)精巢樣本AcSc_M2處于Ⅲ期末, 而另外4個(gè)精巢樣本處于Ⅱ期、5個(gè)卵巢樣本處于Ⅱ期。在自然條件下, 其雄性個(gè)體性成熟年齡為6—7齡, 雌性為9—11齡。章龍珍等[32]報(bào)道人工養(yǎng)殖下施氏鱘雄性個(gè)體4齡可以達(dá)到性成熟。以上表明人工養(yǎng)殖條件施氏鱘個(gè)體性腺發(fā)育存在差異, 且雄性個(gè)體發(fā)育較快。通過(guò)差異表達(dá)基因的表達(dá)量對(duì)10個(gè)樣本進(jìn)行相關(guān)性分析, 發(fā)現(xiàn)樣本AcSc_M2雖然能夠與其余4個(gè)精巢樣本聚為一類, 但其相關(guān)性相對(duì)較低, 說(shuō)明其基因表達(dá)模式與其余4個(gè)精巢樣本存在較大差異,因此在后續(xù)差異表達(dá)分析中舍去。

圖 4 差異表達(dá)基因富集最顯著的前30條KEGG通路Fig. 4 The top 30 most significantly enriched KEGG pathways based on the differentially expressed genes between the testis and ovary from two-year-old Amur sturgeon

圖 5 差異表達(dá)基因在卵巢類固醇合成通路的分布(參考KEGG Pathway數(shù)據(jù)庫(kù)提供的參考代謝通路模式圖)Fig. 5 Distribution of differentially expressed genes in ovarian steroidogenesis (modified from the reference map of the KEGG Pathway)

圖 6 實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證差異表達(dá)基因在性腺中的表達(dá)量Fig. 6 Relative expression levels of differentially expressed genes in gonads by real-time quantitative PCR

由于鱘為多倍體魚類, 其染色體數(shù)量約為120條或240條以上, 目前還未發(fā)表基因組數(shù)據(jù), 而且利用常規(guī)技術(shù)沒(méi)有鑒定到鱘性別特異性分子標(biāo)記。本研究通過(guò)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)查找與性別相關(guān)基因,共注釋到28個(gè), 差異表達(dá)基因11個(gè)。其中,Dmrt1和Sox9作為雄性性別決定與分化以及性腺發(fā)育的重要轉(zhuǎn)錄因子, 并在多種魚類中研究也表明其在雄性性腺高表達(dá), 如羅非魚(Oreochromis niloticusLinnaeus)[33]、虹鱒(Oncorhynchus mykissWalbaum)[34]、青鳉(Oryzias latipesTemminck & Schlegel)[35]、斑馬魚(Danio rerioHamilton)[36]、西伯利亞鱘[13,14]等。Foxl2是叉頭框轉(zhuǎn)錄因子超家族成員之一, 在脊椎動(dòng)物卵巢分化和發(fā)育中起重要作用。目前, 施氏鱘、歐洲鰉、小體鱘等研究中發(fā)現(xiàn)Foxl2在卵巢中高表達(dá)[15—17]。此外, 研究表明Foxl2可以調(diào)控Cyp19a1的轉(zhuǎn)錄表達(dá)[37], 且Cyp19a1能夠促進(jìn)肝臟卵黃蛋白原的合成, 確保卵子發(fā)生早期卵母細(xì)胞的正常發(fā)育和卵黃積累[38]。但是本研究中2齡施氏鱘性腺轉(zhuǎn)錄組分析中未發(fā)現(xiàn)Cyp19a1呈現(xiàn)差異性表達(dá),而且其在精巢和卵巢轉(zhuǎn)錄組中的表達(dá)量相對(duì)很低(RPKM＜0.5)。在歐洲鰉研究中, 表明Cyp19a1主要在卵黃形成早期和初期高表達(dá), 暗示其可能與歐洲鰉卵黃合成有關(guān)[15]。Amh是一種以多肽形式存在的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β (TGF-β)超家族成員, 能夠抑制繆勒氏管的形成, 阻止卵巢的形成, 使性腺向精巢發(fā)育, 是雄性性別分化的重要因子。研究表明魚類中并沒(méi)有繆勒氏管, 但發(fā)現(xiàn)存在Amh或其同源基因,且表現(xiàn)為雄性性腺高表達(dá), 如銀漢魚(Odontesthes hatcheriEigenmann)[39]。另外,Bmp15和Gdf9屬于TGF-β超家族成員, 主要通過(guò)結(jié)合Ⅰ型和Ⅱ型兩種Ser/Thr激酶受體進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo), 發(fā)揮調(diào)節(jié)卵巢發(fā)育等生物學(xué)功能[40]。在歐洲海鱸(Dicentrachus labraxLinnaeus)[41]、虹鱒[42]、斑馬魚[43,44]和異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)[45,46]等魚類研究中, 表明Bmp15和Gdf9表達(dá)水平隨卵細(xì)胞發(fā)育而降低。本研究中Dmrt1、Sox9、Foxl2、Amh、Bmp15和Gdf9也都呈現(xiàn)出性二態(tài)表達(dá)模式, 可以為其性腺分化和發(fā)育研究提供基礎(chǔ), 同時(shí)為從mRNA水平上及早鑒定施氏鱘性別提供了借鑒。

通過(guò)差異表達(dá)基因KEGG富集分析, 發(fā)現(xiàn)卵巢類固醇合成通路被顯著富集。卵巢類固醇合成通路主要功能是合成雌二醇、黃體酮。按照雙細(xì)胞雙促性腺激素理論(two-cell/two-gonadotropin theory),首先卵泡膜細(xì)胞在LH作用下產(chǎn)生相應(yīng)酶將膽固醇轉(zhuǎn)化為雄激素(雄烯二酮和睪酮), 雄激素通過(guò)擴(kuò)散進(jìn)入顆粒細(xì)胞, 在FSH信號(hào)通路作用使顆粒細(xì)胞芳香化酶活性增強(qiáng)將雄激素轉(zhuǎn)變?yōu)榇仆痛贫?。而發(fā)育早期的雄性個(gè)體則通過(guò)GnRH調(diào)控LH激活雄激素合成相關(guān)酶, 以及與LH受體結(jié)合激活cAMP磷酸化途徑激活芳香化酶的轉(zhuǎn)錄[47—49]。在本研究中, 發(fā)現(xiàn)Ⅱ期卵巢中Lhr、Insr、Igf1r、Ldlr、Fshr基因表達(dá)量顯著低于Ⅱ期精巢, 而這些受體基因在卵巢中的低表達(dá)可能抑制卵巢雌激素的合成,但精巢中雄激素的合成可能未受影響。同時(shí),Bmp15能夠明顯抑制FshrmRNA的表達(dá), 從而使Fsh誘導(dǎo)的P450arom表達(dá)減少[50—53];Gdf9能夠通過(guò)抑制Fsh誘導(dǎo)的cAMP的產(chǎn)生, 進(jìn)一步抑制顆粒細(xì)胞產(chǎn)生雌激素和孕酮[51,54]。另外, 睪酮生成關(guān)鍵酶Cyp1b1、Cyp17a1和Hsd3b1在施氏鱘Ⅱ精巢中的表達(dá)量更高, 可能促進(jìn)雄激素的產(chǎn)生和維持精巢組織的發(fā)育。綜上所述, 2齡施氏鱘雌性個(gè)體可能通過(guò)限制雌激素的合成使卵細(xì)胞處于減數(shù)分裂阻滯期, 而雄性個(gè)體保持精巢發(fā)育, 這可能是導(dǎo)致鱘雌雄發(fā)育不同步的原因, 同時(shí)為今后研究鱘性腺發(fā)育提供了參考。