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        Omi/HtrA2與Livin對(duì)子癇前期及子癇患者胎盤(pán)凋亡的影響

        2020-04-06 03:11:40趙小環(huán)李紅芳許會(huì)英孫高高
        關(guān)鍵詞:子癇線粒體胎盤(pán)

        趙小環(huán) 李紅芳 樊 虹 許會(huì)英 孫高高

        甘肅省蘭州市第一人民醫(yī)院(730050)

        子癇前期-子癇是妊娠期特有的疾病,發(fā)病機(jī)制仍不明確,胎盤(pán)部位細(xì)胞凋亡異??赡苁瞧湓蛑籟1]。絲氨酸蛋白酶Omi/HtrA2是線粒體促凋亡因子,在腫瘤中研究較多,在子癇前期-子癇中的凋亡作用尚無(wú)報(bào)道。Livin基因是凋亡抑制蛋白(IAPs)家族成員之一,其抑制凋亡的作用可能與受精卵著床、胎盤(pán)的生長(zhǎng)發(fā)育有關(guān)。本研究檢測(cè)Omi/HtrA2與Livin在子癇前期-子癇患者胎盤(pán)組織中的表達(dá),探討其在子癇前期及子癇發(fā)生發(fā)展中的作用。

        1 對(duì)象與方法

        1.1 選擇對(duì)象

        選擇2017-2018年本院婦產(chǎn)科住院的子癇前期20例、子癇前期重度32例、子癇8例共60例孕產(chǎn)婦(觀察組)。診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。子癇前期重度中有2例發(fā)生胎盤(pán)早剝、3例伴有胸水及心包積液、1例發(fā)生LEELP綜合征。排除其它產(chǎn)科并發(fā)癥和合并癥的正常晚期妊娠20例為對(duì)照組。本研究通過(guò)本院倫理委員會(huì)審批。

        1.2 胎盤(pán)組織的采集及處理

        在兩組孕婦剖宮產(chǎn)或陰道分娩胎盤(pán)娩出5min內(nèi),避開(kāi)梗死及鈣化區(qū),取胎盤(pán)母體面中央2cm×2cm×1cm組織10%中性甲醛溶液固定,石蠟包埋待用。采用免疫組織化學(xué)鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶連接法(SP法)檢測(cè)胎盤(pán)組織滋養(yǎng)細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞中的Omi/HtrA2與Livin的表達(dá)。鼠抗人Omi/HtrA2單克隆抗體、兔抗人Livin多克隆抗體及SP免疫組化試劑盒均購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。

        1.3 結(jié)果判定及分析

        每個(gè)標(biāo)本隨機(jī)選取2張切片,光學(xué)顯微鏡下每張切片隨機(jī)觀察3個(gè)視野,陽(yáng)性部位呈棕黃色。并將圖像輸入Image-Pro Plus圖像分析系統(tǒng),分別測(cè)得兩組胎盤(pán)組織中最小灰度值(OD值)。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

        2 結(jié)果

        2.1 一般情況

        子癇組與對(duì)照組年齡(27.9±6.2歲、27.2±4.0歲)、孕周(37.2±2.6周、39.2±1.2周)和產(chǎn)次(1.2±0.4次、1.7±0.6次)等比較無(wú)差異(P>0.05)。

        2.2 Omi/HtrA2、Livin在胎盤(pán)組織表達(dá)

        Omi/HtrA2在胎盤(pán)組織中表達(dá)呈棕色顆粒,陽(yáng)性染色主要定位于胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中,在各組胎盤(pán)組織中均有表達(dá),但OD值觀察組(150.46±26.59)高于對(duì)照組(132.11±18.43)(t=2.049,P<0.05)(圖1、圖2、圖3)(封三),且子癇前期重度(161.17±19.45)高于子癇前期(136.79±26.57)(t=-3.833,P<0.01);Livin染色呈棕黃色至深棕色顆粒,陽(yáng)性染色主要位于胎盤(pán)合體滋養(yǎng)細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞核中(圖4、圖5、圖6)(封三),觀察組OD值(116.07±22.40)低于對(duì)照組(136.73±20.81)(t=-2.216,P<0.05),但子癇前期(109.36±22.44)與子癇前期重度(122.17±28.12)比較無(wú)差異(t=-1.680,P>0.05)。

        2.3 不同子癇程度患者孕產(chǎn)情況比較

        子癇前期與子癇前期重度組間收縮壓、舒張壓、孕周、新生兒體重等均有差異,但產(chǎn)婦年齡、產(chǎn)后出血量及新生兒1 min Apgar評(píng)分無(wú)差異。 見(jiàn)表1。

        表1 子癇不同程度孕婦孕產(chǎn)情況比較

        3 討論

        目前認(rèn)為凋亡信號(hào)傳導(dǎo)有細(xì)胞表面死亡受體途徑、線粒體啟動(dòng)途徑和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑三條通路。越來(lái)越多研究顯示線粒體在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過(guò)程中發(fā)揮了極為重要作用,位于線粒體內(nèi)外膜間隙的凋亡相關(guān)分子的釋放是線粒體介導(dǎo)的凋亡過(guò)程中關(guān)鍵。

        Omi/HtrA2是定位于真核生物線粒體中的絲氨酸蛋白酶,是寡聚絲氨酸蛋白酶HtrA家族成員之一,在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成后儲(chǔ)存在線粒體膜間隙。正常情況下對(duì)細(xì)胞有保護(hù)作用,當(dāng)細(xì)胞受到刺激發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)而線粒體膜通透性增加時(shí),Omi/HtrA2分子從線粒體釋放并進(jìn)入細(xì)胞質(zhì),解除了XIAP對(duì)caspase9的抑制,導(dǎo)致下游caspase3活化,進(jìn)而DNA斷裂發(fā)生凋亡[3-8]。Omi/HtrA2除了caspase依賴性的凋亡通路外,還通過(guò)自身的酶切作用與IAPs 結(jié)合后直接剪切Livin、C-IAP1、C-IAP2和XIAP,消除IAPs抑制細(xì)胞凋亡的作用[9]。Omi/HtrA2是線粒體促凋亡因子,但在妊娠方面的研究報(bào)道很少。本研究發(fā)現(xiàn),Omi/HtrA2主要在胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中表達(dá),觀察組明顯高于對(duì)照組,且重度組更高。分析認(rèn)為因缺血、缺氧等影響,Omi/HtrA2分子從線粒體釋放入細(xì)胞質(zhì),通過(guò)凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路引起大量滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡,從而抑制滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力,使滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)過(guò)淺,胎盤(pán)淺著床;同時(shí)胎盤(pán)缺血缺氧引起血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷,胎盤(pán)功能發(fā)生障礙,尤其發(fā)展到子癇前期重度,血壓增高明顯,血管痙攣加重,并伴有其它器官受損及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)異常。因此,對(duì)子癇前期重度患者入院時(shí)應(yīng)積極給予藥物降壓、鎮(zhèn)靜對(duì)癥治療。但由于胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡,胎盤(pán)功能不良,胎兒長(zhǎng)期慢性缺氧、生長(zhǎng)受限,新生兒體重偏低。子癇前期與子癇前期重度比較,收縮血壓、舒張血壓、孕周、新生兒體重均有差異,對(duì)子癇前期重度孕婦應(yīng)給予積極治療,以降低不良妊娠結(jié)局的發(fā)生[10]。

        Livin是IAPs家族中的一種凋亡蛋白,存在于胚胎、胎盤(pán)和一些惡性腫瘤組織中,Livin凋亡抑制作用可能與受精卵的著床、胎盤(pán)的生長(zhǎng)發(fā)育等有關(guān)。Livin在凋亡過(guò)程中的作用是多方面的。在Fas/Caspase-8誘導(dǎo)的死亡受體途徑中,Livin直接抑制該途徑中的核心Caspases-3蛋白酶活性;而在另一條細(xì)胞色素c/凋亡激活因子-1(Apaf-1)作用的線粒體途徑中,Livin通過(guò)與凋亡相關(guān)蛋白(SMAC)結(jié)合而中和SMAC的Caspase活化蛋白的活性,使多種 Caspases未能活化而發(fā)揮抗凋亡作用[1]。Straszew ski-Charezl[11]等研究發(fā)現(xiàn)妊娠初期和晚期胎盤(pán)組織中有Livin表達(dá),認(rèn)為其作用機(jī)制是阻斷Fas介導(dǎo)的滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡。郭秀香等[12]研究發(fā)現(xiàn),ICP組胎盤(pán)組織中滋養(yǎng)細(xì)胞、蛻膜細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞Caspase-3表達(dá)增高,Livin表達(dá)降低且表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性,推測(cè)Caspase -3和Livin基因可能是ICP胎盤(pán)細(xì)胞凋亡的重要調(diào)控基因之一。本研究發(fā)現(xiàn),Livin在觀察組和對(duì)照組胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)細(xì)胞、蛻膜細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞中均有表達(dá),且觀察組低于對(duì)照組,但子癇前期重度與子癇前期未見(jiàn)差異,與王曉兵[1]研究基本一致。提示子癇前期及子癇患者胎盤(pán)組織中Livin蛋白低表達(dá),推測(cè)Livin通過(guò)死亡受體途徑及線粒體途徑等不同信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路引起了胎盤(pán)大量滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡,從而引起胎盤(pán)功能不良,缺血缺氧,引起子癇前期臨床表現(xiàn)甚至子癇發(fā)生,故認(rèn)為L(zhǎng)ivin在子癇前期-子癇的疾病發(fā)生發(fā)展中有一定作用。

        通過(guò)本研究認(rèn)為,凋亡因子Omi/HtrA2、Livin參與了胎盤(pán)的凋亡,在子癇前期-子癇疾病的發(fā)生發(fā)展中有重要作用,但二者參與凋亡的方式是否有關(guān)還需進(jìn)一步研究。

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